目的1)建立PCR-反向線點雜交技術(shù)檢測沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis,CT)及基因型分型方法。2)探討孕婦生殖道CT感染情況及基因型分布。3)探討CT的母嬰傳播情況。方法收集寶安區(qū)婦幼保健院高危孕產(chǎn)婦宮頸分泌物3,343例,新生兒呼吸道分泌物3,010例,4,686例非孕期生殖道感染患者宮頸分泌物(非孕感染組)和16,196例不孕癥患者宮頸分泌物(不孕癥組)為對照。使用實時熒光定量PCR方法對樣本進行CT-DNA檢測,陽性結(jié)果樣本通過多重PCR-反向線點雜交技術(shù)進行CT基因型分型。結(jié)合孕婦孕期臨床表型,CT基因分型以及新生兒的CT分型結(jié)果,明確孕期CT感染的主要并發(fā)癥,基因型分布情況、以及母嬰傳播的情況。統(tǒng)計方法采用精確檢驗和卡方檢驗。結(jié)果1.3對引物擴增CT菌株后均可獲得一條約202-235bp的DNA,擴增其他泌尿生殖道常見病原體未見到到擴增帶,說明3條引物對CT檢測特異性強。2.多重PCR-RLB的最低檢測濃度為100fg/μL,巢氏PCR-RLB的最低檢測濃度為1000fg/μL。多重PCR-RLB對CT的檢測敏感性,高于巢式PCR-RLB;巢式PCR-RLB對CT的分型特異性高于多重PCR-RLB。3.2012～2016年間孕婦CT感染率平均為5.0%,2014年的感染率最高,為6.9%。4.高危孕婦中CT感染基因型以E、F和D型為主,混合感染率為39.3%。最常見的混合感染類型為J+K(7.7%)、E+J(6.0%)和E+F(4.8%)。5.CT感染孕婦組中,CT感染率為5.0%(168/3,343);非孕生殖道感染組中,CT感染率為9.0%(421/4,686);不孕癥組中,CT感染率為6.5%(1,047/16,196),3組婦女的CT感染率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=49.1,P0.01);3組婦女CT感染各基因型的比例比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.5,P=0.60)。6.CT陰性孕婦的絨毛膜羊膜炎者的患病率為9.8%(312/3,175);CT陽性孕婦的絨毛膜羊膜炎患病率為28.0%(47/168),兩者比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=29.561,P0.01)。7.3,010例新生兒中,陰道分娩新生兒的CT陽性率為7.2%(185/2,579);剖宮產(chǎn)分娩新生兒431例,未發(fā)現(xiàn)CT陽性者。8.30例嬰兒沙眼衣原體感染的核酸檢測結(jié)果與母親一致,其基因分型結(jié)果全部為母親生殖道檢出的基因型。結(jié)論1.多重PCR-RLB法是敏感性、快速檢測CT方法,巢氏PCR-RLB法是檢測CT分型的特異性方法。CT混合感染時,PCR-RLB分型法優(yōu)于PCR-RFLP。2.高危孕婦的CT感染率高,為5.0%。單基因型感染率為60.7%,雙重基因型感染率為29.2%,多基因型戚染率為10.1%,單基因型以E、F、D為主要優(yōu)勢流行型。3.CT感染孕婦分娩期絨毛膜羊膜炎的發(fā)生率增加。4.CT存在母嬰傳播。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R714.251
【部分圖文】：

圖２－１?Ｍｉｎｉｂｌｏｔｔｅｒ雜交反應(yīng)板??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｍｉｎｉｂｌｏｔｔｅｒ?Ｈｙｂｒｉｄ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｐｌａｔｅ??增結(jié)束后，�。到挟a(chǎn)物加入含有１７０?ｐＬ２?ｘ?ＳＳＰＥ和０．１％?ＳＤ．５?ｍ丨ＥＰ管中，離心－混勻－離心。??浴箱（１００°Ｃ）煮ｌＯｍｉｎ，取出ＥＰ管立即置于冰上冷卻。??６０°Ｃ的２?ｘ?ＳＳＰＥ和０．１％?ＳＤＳ混合液漂洗事先標(biāo)記好的Ｂｉｏ５?ｍｉｎ，將膜固定于Ｍｉｎｉｂｌｏｔｔｅｒ雜交反應(yīng)板上，向凹槽加入１５０混合液（ＰＣＲ產(chǎn)物與２?ｘ?ＳＳＩ＾Ｅ和０．１％?ＳＤＳ混合液），６０°Ｃ雜６０°Ｃ的２?ｘ?ＳＳＰＥ和０．１％?ＳＤＳ混合液洗滌２次，１０?ｍｉｎ／次。??ｂｙｎｅ?Ｃ尼龍膜放入含有２?ｘ?ＳＳＰＥ和０．１％?ＳＤＳ混合液和鏈親和接合物的反應(yīng)筒內(nèi)（１０?ｍｌ?２?ｘ?ＳＳＰＥ和０．１％?ＳＤＳ混合液，２?｜ｉ氧化物酶接合物），４２°Ｃ，孵育ｌｈ。??

ｂｐ?Ｕ?Ｉ?ｔ?３?４?ｉ?ｉ?ｆ?Ｓ?９?ｍ?１１?ｉｆ?ｉｔ??簡??Ｉ??圖２－３多重ＰＣＲ擴增臨床ＣＴ樣本結(jié)果??圖２－３多重ＰＣＲ擴增臨床樣本。ｂｐＭ道為Ｍａｒｋｅｒ，?１－１３道臨床樣本，其中卜５、７、８和??１０為陽性，６、９、１１、１２和１３為陰性。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｍｕｌｔｉｐｌｅ?ＰＣＲ?ｃｌｉｎｉｃａｌ?ｓａｍｐｌｅｓ．?Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ．?１－１３?ｃｌｉｎｉｃａｌ?ｓａｍｐｌｅｓ，?１￣５＞?７＞??８?ａｎｄ?１０：?ｐｏｓｉｔｉｖｅ；?６、９、１１、１２?ａｎｄ?１３：?ｎｅｇａｔｉｖｅ．??含質(zhì)粒的多重ＰＣＲ－ＲＬＢ結(jié)果見圖２－４

８２?？ｍ??４Ｃ??圖２－２多重ＰＣＲ擴增ＣＴ結(jié)果１－６道分別為ＣＴ血清型Ｄ株ＤＮＡ濃度依次稀釋為ｌｆｇ／ｐＬ、??１０ｆｇ／ｐＬ、１００ｆｇ／（ｉＬ、ｌｐｇ／（ｉＬ、１０ｐｇ／（ｉＬ、ｌＯＯｐｇ／ｐＬ，?７－９?道為臨床樣本，１０?道為淋病奈瑟??菌，１１道為脲原體，１２道為生殖支原體，１３道為人型支原體，１４道為陰道加德納菌，１５??道為肺炎衣原體。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｍｕｌｔｉｐｌｅ?ＰＣＲ．?１￣６：?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｓｅｒｏｔｙｐｅ?Ｄ?ＣＴ：?１?ｆｇ／ｊｉＬｖ??１０?ｆｇ／ｊｉＬ、１００?ｆｇ／ｐＪＬ、１?ｐｇ／ｊｉＬ、１０?ｐｇ／｜ｉＬ、１００?ｐｇ／ｊｉＬ，?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．?７？９：?Ｃｌｉｎｉｃａｌ?ｓａｍｐｌｅｓ；?１０：??ｎｅｉｓｓｅｒｉａ?ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ；?１１：?ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ?ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ，?１２：?ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ?ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ，】３：?ｍｙｃｏｐｌａａ??ｈｏｍｉｎｉｓ，?１４：?ｖａｇｉｎａｌ?ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ，?ａｎｄ?１５：?ｃｈｌａｍｙｄｉａ?ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ．??ｂｐ?Ｕ?Ｉ?ｔ?３?４?ｉ?ｉ?ｆ?Ｓ?９?ｍ?１１?ｉｆ?ｉｔ??簡??Ｉ??圖２－３多重ＰＣＲ擴增臨床ＣＴ樣本結(jié)果??圖２－３多重ＰＣＲ擴增臨床樣本。ｂｐＭ道為Ｍａｒｋｅｒ，?１－１３道臨床樣本，其中卜５、７、８和??１０為陽性
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本文編號：2863437