背景:多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是一種女性常見的代謝性疾病,其主要的臨床特征包括高雄激素血癥、持續(xù)無排卵、卵巢多囊樣改變。大量研究發(fā)現(xiàn),80%的多囊卵巢綜合征患者伴隨著脂質(zhì)異常,其中,棕櫚酸(palmitic acid,PA)的濃度在血液和卵泡液中也增加,棕櫚酸濃度的增加引起顆粒細(xì)胞脂質(zhì)毒性,但棕櫚酸是否促進(jìn)顆粒細(xì)胞脂質(zhì)蓄積尚不明確。B類I型清道夫受體(scavenger receptor class B type I,SR-BI)是細(xì)胞上的膜受體,主要參與脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn),SR-BI的表達(dá)變化與不孕密切相關(guān)。此外,在肝細(xì)胞中,過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferators-activated receptorα,PPARα)調(diào)控SR-BI的表達(dá),而在顆粒細(xì)胞中脂質(zhì)代謝異常與PPARα/SR-BI的關(guān)系還尚不清楚。目的:本研究旨在探討棕櫚酸通過PPARα調(diào)控SR-BI影響卵巢顆粒細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的作用。方法:1.人卵巢顆粒細(xì)胞(KGN)用含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液于37°C、5%CO_2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),不同濃度(0,100,200,300μmol/L)的棕櫚酸處理24 h,油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量,NBD-Cholesterol熒光標(biāo)記表示細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量;Western-blot、免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光分別檢測細(xì)胞PPAR-α,SR-BI蛋白質(zhì)的表達(dá)。2.干預(yù)SR-BI后,采用油紅O染色和NBD-Cholesterol熒光標(biāo)記觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量。3.干預(yù)PPAR-α,采用油紅O染色和NBD-Cholesterol熒光標(biāo)記觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量,Western-blot、免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光檢測卵巢顆粒細(xì)胞SR-BI表達(dá)。結(jié)果:1.不同濃度棕櫚酸處理后,與對照組相比,顆粒細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量增加,且呈濃度依賴性;與對照組相比,顆粒細(xì)胞SR-BI的表達(dá)上調(diào),且呈濃度依賴性(P﹤0.05);與對照組相比,顆粒細(xì)胞PPARα的表達(dá)上調(diào),僅在200、300μmol/L棕櫚酸處理組有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)。2.SR-BI抑制劑BLT-1處理后,與對照組相比,棕櫚酸組顆粒細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量增加,與棕櫚酸組相比,棕櫚酸與BLT-1共孵育組顆粒細(xì)胞脂質(zhì)含量減少。3.PPARα抑制劑GW6471處理后,與對照組相比,棕櫚酸組顆粒細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量增加,與棕櫚酸組相比,棕櫚酸與GW6471共孵育組顆粒細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量減少;與對照組相比,棕櫚酸組顆粒細(xì)胞SR-BI的表達(dá)上調(diào)(P﹤0.05);與棕櫚酸組相比,棕櫚酸與GW6471共孵育組顆粒細(xì)胞SR-BI的表達(dá)下調(diào)(P﹤0.05)。結(jié)論:1.棕櫚酸促進(jìn)卵巢顆粒細(xì)胞脂質(zhì)蓄積;2.PPARα介導(dǎo)棕櫚酸調(diào)控SR-BI蛋白的表達(dá)影響卵巢顆粒細(xì)胞脂質(zhì)蓄積。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R711.75
【部分圖文】：

為觀察棕櫚酸對KGN細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的影響，我們采用不同濃度(0、100、200、300μmol/L)處理KGN細(xì)胞，油紅O染色法檢測細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，胞內(nèi)脂滴數(shù)量增加，且呈濃度依賴性(圖4.1)，這個結(jié)果提示，棕櫚酸促進(jìn)KGN細(xì)胞脂質(zhì)蓄積。圖 4.1 油紅 O 染色檢測棕櫚酸對 KGN 細(xì)胞脂質(zhì)含量的影響(×400)Control:對照組,100 μmol/L PA：100 μmol/L 棕櫚酸組,200 μmol/L PA:200 μmol/L 棕櫚酸組,300 μmol/L PA:300 μmol/L 棕櫚酸組.此外，為了觀察 KGN 細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量的變化，我們采用不同濃度(0、100、200、300 μmol/L)處理 KGN 細(xì)胞，用 NBD-Cholesterol 孵育 KGN 細(xì)胞后，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)熒光的強(qiáng)度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)綠色熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，且呈濃度依賴性(圖 4.2)。這些結(jié)果也提示

圖 4.2 熒光標(biāo)記膽固醇檢測棕櫚酸對 KGN 細(xì)胞脂質(zhì)含量的影響(×200)trol:對照組,100 μmol/L PA:100 μmol/L 棕櫚酸組,200 μmol/L PA:200 μmol/L 棕組,300 μmol/L PA:300 μmol/L 棕櫚酸組.棕櫚酸對 KGN 細(xì)胞 SR-BI以及 PPARα的影響.1 棕櫚酸上調(diào) KGN 細(xì)胞 SR-BI的表達(dá)GN 細(xì)胞脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)是受多種基因及蛋白調(diào)控的復(fù)雜過程，其中 S胞膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)鍵蛋白。為進(jìn)一步深入探討棕櫚酸促進(jìn) KGN的作用機(jī)制，我們將 KGN 細(xì)胞用不同濃度的棕櫚酸(0, 1ol/L)處理 24 h，采用 Western blot 的方法檢測 SR-BI 的表達(dá)，結(jié)果組相比，SR-BI 表達(dá)量增加,且呈濃度依賴性（圖 4.3）。這些櫚酸上調(diào) KGN 細(xì)胞 SR-BI的表達(dá)。

圖 4.3 Western blot 檢測棕櫚酸對 KGN 細(xì)胞 SR-B1 蛋白表達(dá)的影響Control:對照組,100 μmol/L PA:100 μmol/L 棕櫚酸組,200 μmol/L PA:200 μmol/L 棕櫚酸組,300 μmol/L PA:300 μmol/L 棕櫚酸組,(n=3).*P < 0.05, Control vs 100μmol/L PA,** P < 0.01Control vs 200μmol/L PA or 300μmol/L PA 組.此外為了驗(yàn)證棕櫚酸對卵巢顆粒細(xì)胞 SR-BI 表達(dá)的影響，我們將 KGN 細(xì)胞用不同濃度的棕櫚酸(0, 100, 200, 300μmol/L)處理 24 h，采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法檢測 SR-BI 的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，細(xì)胞膜上標(biāo)記 SR-BI 的棕褐色增加，且呈濃度依賴性(圖 4.4)。這些結(jié)果也提示，棕櫚酸上調(diào) KGN 細(xì)胞SR-BI 的表達(dá)。
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本文編號：2853785