本文關(guān)鍵詞：VPA聯(lián)合ATRA促進(jìn)子宮頸癌細(xì)胞衰老的發(fā)生，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景宮頸癌是最常見的女性生殖道惡性腫瘤,發(fā)病率僅次于乳腺癌位居第二的女性惡性腫瘤。近年來宮頸癌的發(fā)病率有明顯上升和年輕化趨勢,發(fā)病以每年2%~3%的速度增長。早期宮頸癌患者可采用手術(shù)治療,而晚期患者主要以鉑類化療為主,但毒副作用大,患者易對其產(chǎn)生耐藥性,從而限制了進(jìn)一步的治療,使患者生存率大大降低。因此,急需一種有效且毒副作用低的宮頸癌治療手段。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為遺傳基因的突變在腫瘤的形成過程中起著至關(guān)重要的作用,隨著近年來分子生物學(xué)的發(fā)展,表觀遺傳的改變在腫瘤發(fā)展中作用被人們所認(rèn)識,從而打破了以往“基因決定論”的觀點(diǎn)。表觀遺傳是不依賴于DNA序列的遺傳現(xiàn)象,表觀遺傳異常主要包括DNA甲基化異常、非編碼RNA的異常調(diào)節(jié)、組蛋白修飾異常等。越來越多的研究證實,表觀遺傳異常與子宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有著密切關(guān)系。丙戊酸鈉(valproate acid,VPA)是一種廣譜的抗癲癇藥物,同時也是一種組蛋白去乙�；�(histone deacetylase,HDAC)抑制劑。體外實驗證實,VPA在多種實體瘤和白血病中有抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡和誘導(dǎo)分化的作用,其高效、安全、低毒、可口服的特點(diǎn)使之極具臨床前景。全反式維甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是維生素A的生物活性代謝產(chǎn)物,與其受體結(jié)合,具有促進(jìn)上皮細(xì)胞分化成熟的作用,已作為一種誘導(dǎo)分化劑用于臨床腫瘤的治療。課題組前期的研究已經(jīng)證實VPA聯(lián)合ATRA可使宮頸癌細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞周期阻滯,并誘導(dǎo)細(xì)胞分化,但細(xì)胞凋亡增加不明顯。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步分析VPA聯(lián)合ATRA的抗宮頸癌作用,觀察其對細(xì)胞衰老的影響并探討其可能的分子機(jī)制,從而為尋求新的子宮頸癌治療方法提供參考。目的:研究VPA聯(lián)合ATRA誘導(dǎo)子宮頸癌細(xì)胞衰老作用,并探討其分子機(jī)制。方法實驗分為對照組、VPA組、ATRA組、VPA+ATRA組,采用3 mmol/L VPA、1mmol/L ATRA單獨(dú)或聯(lián)合作用于人子宮頸癌Hela及Siha細(xì)胞,對照組僅加溶媒;采用CellTiter 96#174;AQueous法檢測細(xì)胞增殖;Annexin V-PE/7AAD法檢測細(xì)胞凋亡;β-半乳糖苷酶化學(xué)染色法檢測細(xì)胞衰老;Q-PCR和Western blot法分別檢測衰老相關(guān)基因P16、P63、hTERT的mRNA和蛋白表達(dá)變化;采用免疫組織化學(xué)SP法檢測P16、P63及hTERT的表達(dá);Cell cycle staining solution法檢測細(xì)胞周期結(jié)果(1)Cell Titer 96#174;AQueous法檢測結(jié)果顯示,VPA對HeLa及SiHa細(xì)胞均有生長抑制作用,與ATRA聯(lián)合抑制效果明顯優(yōu)于單獨(dú)用藥(P0.05);(2)我們采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡,結(jié)果顯示:VPA單獨(dú)或聯(lián)合ATRA后對HeLa、SiHa細(xì)胞凋亡增加都不明顯;(3)SA-β-半乳糖苷酶染色顯示,VPA聯(lián)合ATRA顯著增加衰老細(xì)胞比例,與對照組及單獨(dú)用藥組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(4)Q-PCR和Western blot結(jié)果顯示,VPA單獨(dú)和聯(lián)合ATRA可上調(diào)P16、P63的表達(dá),降低h TERT的表達(dá),且聯(lián)合用藥組優(yōu)于單獨(dú)用藥組及對照組(P0.05);(5)免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn),VPA組、ATRA組中P16、P63的表達(dá)都是增加的,與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),且兩藥聯(lián)合后效果更明顯(P0.05);(6)Cell cycle staining solution法檢測細(xì)胞周期結(jié)果顯示,VPA聯(lián)合ATRA引起宮頸癌細(xì)胞G1期受阻滯結(jié)論VPA聯(lián)合ATRA可抑制宮頸癌細(xì)胞增殖;上調(diào)P16和P63,下調(diào)hTERT的表達(dá),從而誘導(dǎo)細(xì)胞衰老是其可能的分子機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：子宮頸癌 丙戊酸鈉 全反式維甲酸 細(xì)胞衰老
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33

  本文關(guān)鍵詞：VPA聯(lián)合ATRA促進(jìn)子宮頸癌細(xì)胞衰老的發(fā)生，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：284289