目的:腫瘤細(xì)胞化療耐藥是導(dǎo)致卵巢癌病人預(yù)后差和死亡率高的主要原因,而表觀遺傳學(xué)在調(diào)控惡性腫瘤的耐藥表型中起關(guān)鍵作用。本文主要目的是尋找是否存在關(guān)鍵的調(diào)控因子來(lái)調(diào)控眾多耐藥基因的表達(dá)以及其潛在的耐藥機(jī)制,并且進(jìn)一步研究是否能以該關(guān)鍵調(diào)控因子為靶點(diǎn)來(lái)逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的耐藥。方法:為了尋找上述類(lèi)型的關(guān)鍵調(diào)控因子,挑選20例高級(jí)別漿液性卵巢癌組織標(biāo)本與20例正常輸卵管對(duì)照標(biāo)本進(jìn)行H3K4me3、H3K36me3、H3K79me2/me3(轉(zhuǎn)錄活化相關(guān))和H3K9me3、H3K27me3、H4K20me3(轉(zhuǎn)錄抑制相關(guān))六個(gè)位點(diǎn)的ChIP-seq以及轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,并進(jìn)行motif分析預(yù)測(cè)調(diào)控因子。挑選潛在的調(diào)控因子,用數(shù)據(jù)庫(kù)和臨床樣本信息分析其與卵巢癌預(yù)后之間關(guān)系。各項(xiàng)體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)研究該調(diào)控因子是否有促進(jìn)卵巢癌順鉑耐藥的作用。進(jìn)一步利用ChIP-seq和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序以及生物信息學(xué)分析,研究該調(diào)控因子如何利用表觀重編程來(lái)促進(jìn)下游基因的表達(dá)。進(jìn)一步再使用磷酸化抗體芯片及各項(xiàng)耐藥實(shí)驗(yàn)研究CEBPB如何在卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥表型調(diào)控中起作用。結(jié)果:我們分析了漿液性卵巢癌和正常對(duì)照組織中由于組蛋白6個(gè)位點(diǎn)甲基化所致差異表達(dá)的基因,通過(guò)進(jìn)行motif分析,篩選出35個(gè)可能調(diào)控組蛋白甲基化的上游調(diào)控因子,這其中轉(zhuǎn)錄因子CEBPB與H3K79甲基化相關(guān)性最高。數(shù)據(jù)庫(kù)生物信息學(xué)分析和臨床樣本分析都顯示了CEBPB高表達(dá)與卵巢癌預(yù)后差及腫瘤細(xì)胞順鉑耐藥相關(guān)。各項(xiàng)體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)表明CEBPB高表達(dá)促進(jìn)順鉑耐藥,并與卵巢癌細(xì)胞獲得性耐藥相關(guān)。機(jī)制上我們發(fā)現(xiàn)CEBPB通過(guò)增強(qiáng)DOT1L與靶基因的結(jié)合能力來(lái)調(diào)控基因的H3K79甲基化水平,進(jìn)而調(diào)控基因表達(dá)。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明CEBPB依賴(lài)于DOT1L在卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥表型調(diào)控中起關(guān)鍵作用。用抑制劑或者shRNA來(lái)降低CEBPB或者DOT1L的表達(dá)水平,可逆轉(zhuǎn)卵巢癌腫瘤細(xì)胞的順鉑耐藥。結(jié)論:我們的研究結(jié)果首次表明特異的轉(zhuǎn)錄因子可以調(diào)控表觀重編程相關(guān)的一群功能相關(guān)的基因。CEBPB作為DOT1L的共調(diào)控因子,共同結(jié)合于靶基因,促進(jìn)靶基因染色質(zhì)區(qū)域H3K79高甲基化,因此維持了多個(gè)耐藥基因染色質(zhì)區(qū)域的開(kāi)放狀態(tài)。因此,諸如CEBPB等轉(zhuǎn)錄因子通過(guò)表觀遺傳酶的作用間接調(diào)控了染色質(zhì)的狀態(tài)。在高級(jí)別漿液性卵巢癌中,我們的研究提供了新的治療思路,可以進(jìn)一步研發(fā)靶向CEBPB或者CEBPB-DOT1L相互作用的藥物,同時(shí)說(shuō)明了進(jìn)一步在腫瘤中發(fā)現(xiàn)具有染色質(zhì)重塑功能的轉(zhuǎn)錄因子的重要性。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R737.31
【部分圖文】：

23圖 2：漿液性卵巢癌和正常輸卵管樣品的組蛋白甲基化組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析結(jié)果。 20 例 HG-SOC 組織樣品和 20 例正常輸卵管組織樣品磁珠分選得到上皮細(xì)胞，并分混合得到混合上皮細(xì)胞樣品。a，b，在純化后混合的樣品中，轉(zhuǎn)錄激活（a）的組白甲基化位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄抑制（b）的組蛋白甲基化位點(diǎn)的整個(gè)基因組的 ChIP-seq 信號(hào)征。圓形圖軸刻度表示每一百萬(wàn) reads 中的 read 密度，外圈的染色質(zhì)序數(shù)是以百萬(wàn)基為單位呈現(xiàn)的。chr, 染色質(zhì)；HG，HG-SOC；NC，正常對(duì)照（正常輸卵管）。c，

分析得到與 35 個(gè)轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)的 38 個(gè) motif 序列（P < 1×10-11）（圖3d）。其中，轉(zhuǎn)錄因子 CEBPB，與 H3K79 甲基化水平相關(guān)性最高（P = 1×10-86）（圖3d）。圖 3：通過(guò) ChIP-seq 分析發(fā)現(xiàn)一批與高級(jí)別漿液性卵巢癌表觀重編程相關(guān)的轉(zhuǎn)錄

與 H3K4me3 相關(guān)性較高；GATA1 與 H3K9me3 相關(guān)性較高；GCM1 也與 H3K79me2/3 相關(guān)性較高（圖 4d 和圖4e）。以上結(jié)果說(shuō)明，特異的轉(zhuǎn)錄因子，在基因組 DNA 層面可以結(jié)合一些特異的 motif序列，同時(shí)還在基因表達(dá)層面調(diào)控下游基因的表達(dá)。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 劉暢;李文娟;陳瑜;丁衛(wèi);安國(guó)順;李淑艷;倪菊華;賈弘禔;;8-氯腺苷誘導(dǎo)的組蛋白H3K79雙甲基化促進(jìn)NBS1和p21的基因轉(zhuǎn)錄激活[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2009年11期

2 張勤;薛鵬;白寶玲;李會(huì)莉;楊福全;;質(zhì)譜檢測(cè)葉酸缺乏人胚腎細(xì)胞中低組蛋白H3賴(lài)氨酸79甲基化修飾[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年23期

3 李呈貞;韓振格;何東儀;;Dot1及其同源物的研究進(jìn)展[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2018年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 李夢(mèng)晨;CEBPB通過(guò)H3K79甲基化表觀重編程介導(dǎo)卵巢癌鉑類(lèi)耐藥的相關(guān)機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2019年

2 張小雪;H3K79甲基轉(zhuǎn)移酶DOT1L的表達(dá)對(duì)卵巢癌病人的預(yù)后價(jià)值及對(duì)卵巢癌播散和轉(zhuǎn)移作用的機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 陶佳;DOT1L抑制劑對(duì)豬著床前克隆胚體外發(fā)育及H3K79二甲基化重編程的影響[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 王鵬彬;hDOT1L基因在急性白血病發(fā)病機(jī)制中的作用及其臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 王海玲;莠去津?qū)有肪用富钚�、DNA完整性及組蛋白表達(dá)的影響[D];河北大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2837984