發(fā)布時間：2020-10-11 01:28

　　 目的:多囊卵巢綜合征(Polycystic Ovary Syndrome,PCOS)是青春期及育齡期女性中常見的一種內(nèi)分泌異常疾病,其病理生理變化非常復雜,發(fā)病機制至今還未十分明確。肥胖是PCOS的主要臨床體征之一,約30%-75%的PCOS患者存在超重或肥胖,脂肪細胞在內(nèi)分泌系統(tǒng)調(diào)節(jié)功能中扮演著重要角色,推測肥胖PCOS患者與正常體重的PCOS患者的發(fā)病機制可能有差異。同位素相對標記與絕對定量技術(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)是一項新興的定量蛋白質(zhì)組學技術,本研究旨在利用iTRAQ技術對肥胖型與非肥胖型PCOS患者進行血清蛋白質(zhì)組學研究,探討PCOS相關差異表達蛋白與發(fā)病機制的關系,為PCOS的病因?qū)W研究和尋找診斷標志物等提供更多的線索。方法:選取來自廣州醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院2017年01月至2017年05月的婦科門診患者和正常體檢的健康女性,共64例,包括肥胖PCOS患者16例,非肥胖PCOS患者16例;正常對照女性16例,肥胖正常對照女性16例。收集各組血清,血清去除高豐度蛋白,對其濾出液進行蛋白還原烷基化及胰蛋白酶酶解,之后進行iTRAQ試劑標記,結合色譜分離技術體系進行蛋白鑒定和定量分析,最后對獲得的差異蛋白進行生物信息學分析。結果:經(jīng)過篩選鑒定發(fā)現(xiàn),非肥胖PCOS組和正常對照組相比有93個差異表達蛋白,差異倍數(shù)排名前兩位分別是人非紅細胞血影蛋白-β4(SPTBN4)、鈣蛋白酶-2(CAPN2);肥胖PCOS組和正常對照組相比有179個差異表達蛋白,差異倍數(shù)排名前兩位分別是驅(qū)動蛋白家族成員-15(KIF15)、鈣蛋白酶-2(CAPN2);與非肥胖PCOS組相比,肥胖PCOS組有67個差異表達蛋白質(zhì),差異倍數(shù)最大的是KIF15;與肥胖正常組相比,肥胖PCOS組共鑒定得到10個差異蛋白,差異倍數(shù)最大的是KIF15。細胞組分分析顯示:肥胖PCOS與非肥胖PCOS的差異蛋白主要存在于細胞外間隙;分子功能分析顯示:肥胖PCOS與非肥胖PCOS的差異蛋白主要參與蛋白結合;生物學過程分析顯示:肥胖PCOS與非肥胖PCOS的差異蛋白主要參與創(chuàng)傷反應、防御反應等應激反應過程。KEGG信號通路分析顯示:非肥胖PCOS組參與的信號通路有70種,肥胖PCOS組參與的信號通路有158種。其中兩組共同參與的顯著性信號通路(P0.05)是補體和凝血級聯(lián)信號通路。肥胖PCOS組分別與非肥胖PCOS組和肥胖正常對照組比較,其差異蛋白參與的信號通路涉及多個糖代謝通路的異常。結論:1.本研究采用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學技術對PCOS患者進行血清蛋白質(zhì)輪廓掃描,成功建立了肥胖PCOS與非肥胖PCOS的血清差異表達蛋白譜。2.PCOS患者的血清差異蛋白主要涉及蛋白水解、防御反應、創(chuàng)傷反應、蛋白激活級聯(lián)、急性炎癥反應、補體和凝血級聯(lián)信號通路途徑,提示慢性低度炎癥參與了PCOS的發(fā)生與發(fā)展。肥胖PCOS組參與的通路途徑有158種,而非肥胖PCOS組參與的通路途徑只有70種,提示肥胖PCOS與非肥胖PCOS具有不同的調(diào)控機制。其中,KIF15是與肥胖型PCOS相關的血清差異蛋白;CAPN2是潛在的PCOS候選標記物。
【學位單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R711.75
【部分圖文】：

圖 3. 高 pH 反相色譜分離肽段2.8 質(zhì)譜分析：一維色譜分離的多肽樣品經(jīng)離心干燥后，重新溶解于25 μL的0.1%甲酸/2%乙腈/98%水溶液中，取10 μL樣品在Eksigent nanoLC-Ultra 二維納升液相色譜系統(tǒng)并聯(lián)合TripleTOF 5600 plus質(zhì)譜系統(tǒng)進行分析。首先加樣品至納升流量的捕集柱（3 μm， 120 ）上，上樣泵以A液（0.1%甲酸/2%乙腈/98%水溶液）流速為3.0 μL/min進行脫鹽10分鐘，然后以B液（0.1%甲酸/2%水/98%乙腈溶液）溶液進行梯度洗脫，同時進行質(zhì)譜掃描分析。液相洗脫梯度為70分鐘內(nèi)線性梯度B液從5-40%，（分析柱為75 μm×15 cm ，C18-3 μm 120 ， ChromXP Eksigent 公司）。質(zhì)譜參數(shù)設置為：納噴電壓為2.5 kV，霧化氣5 psi，氣簾氣35 psi，離子源加熱溫度為150℃，質(zhì)譜掃描方式為IDA掃描模式，掃描范圍為400-1250 m/z，一級掃描累加250毫秒，一次一級質(zhì)譜掃描最多選取30個母離子進行二級質(zhì)譜分析，累計

廣州醫(yī)科大學碩士學位論文3.2 四組樣品高豐度蛋白去除效果高豐度蛋白去除效果如圖示（圖 4），與原始血清 A（肥胖 PCOS 組）、B（正常對照組）、C（非肥胖 PCOS 組）、D（肥胖正常對照組）相比，四組樣品 A-de、B-de、C-de、D-de 的高豐度蛋白去除效果顯著，考馬斯亮藍染色可見多條新出現(xiàn)的蛋白條帶。

第一部分 多囊卵巢綜合征患者血清的定量蛋白組學檢測結果驗共定性鑒定了 1690 個蛋白質(zhì)，其中有定量信息的蛋白質(zhì)為 343 個果 P 值與定性鑒定蛋白質(zhì)分布火山圖（圖 5）可以看出，四組樣品定量結果數(shù)目約占 50%左右，在 P<0.0001 的結果為 30%左右，表明結果良好。1Volcano Plot ‐ All Ratios, All Proteins
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李昕;;多囊卵巢綜合征心理問題及管理[J];中國實用婦科與產(chǎn)科雜志;2019年03期

2 王雪;趙敏;連小龍;劉景楠;韓濤;;不同方式治療多囊卵巢綜合征相關實驗研究概述[J];山西中醫(yī);2019年03期

3 董瑩;;人絕經(jīng)期促性腺激素聯(lián)合注射用醋酸亮丙瑞林微球?qū)Χ嗄衣殉簿C合征患者血清性激素水平及妊娠率的影響[J];北方藥學;2019年05期

4 劉蕾;郭志利;;多囊卵巢綜合征的臨床診斷及治療[J];臨床醫(yī)藥文獻電子雜志;2019年08期

5 陳婷;;亞臨床甲狀腺功能減退對多囊卵巢綜合征患者代謝紊亂的具體作用[J];世界最新醫(yī)學信息文摘;2019年13期

6 李娟;;飲食指導對多囊卵巢綜合征的影響[J];醫(yī)學理論與實踐;2017年24期

7 于小青;;多囊卵巢綜合征的致病因素與護理措施研究[J];實用婦科內(nèi)分泌雜志(電子版);2017年27期

8 馬金利;;多囊卵巢綜合征合并2型糖尿病臨床治療觀察[J];糖尿病新世界;2017年17期

9 孫迪;李蓉;;慢性非特異性炎癥在多囊卵巢綜合征發(fā)病作用中的研究進展[J];中國婦產(chǎn)科臨床雜志;2018年02期

10 王麗娜;;卵巢多囊樣改變就是多囊卵巢綜合征嗎[J];江蘇衛(wèi)生保健;2018年01期

相關博士學位論文 前10條

1 王穎;多囊卵巢綜合征合并代謝綜合征患者臨床特征及血清代謝組學研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2015年

2 林圣朝（Scott Ling）;加味五苓散聯(lián)合針灸對腎虛痰瘀型多巢綜合征的臨床療效觀察[D];廣州中醫(yī)藥大學;2017年

3 李沖;艾塞那肽聯(lián)合二甲雙胍對多囊卵巢綜合征的干預作用[D];鄭州大學;2017年

4 劉艷巧;劉潤俠教授治療多囊卵巢綜合征不孕的學術思想和臨床經(jīng)驗研究[D];中國中醫(yī)科學院;2012年

5 石玉華;中國人多囊卵巢綜合征相關因素系列研究[D];山東大學;2004年

6 桑霞;疏肝瀉火法治療多囊卵巢綜合征的臨床及實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2005年

7 陸秀娥;多囊卵巢綜合征患者顆粒細胞AQP9、RESISTIN表達及對體外受精結局的影響[D];浙江大學;2006年

8 陳友國;脂聯(lián)素在多囊卵巢綜合征及其脂代謝中的作用[D];蘇州大學;2006年

9 趙君利;多囊卵巢綜合征的流行病學調(diào)查及相關基礎研究[D];山東大學;2006年

10 李昕;PPARγ及apM1基因多態(tài)性與多囊卵巢綜合征肥胖異質(zhì)性的相關研究[D];復旦大學;2006年

相關碩士學位論文 前10條

1 常晶;PCOSAct組織結構與實施內(nèi)容的研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2015年

2 郭麗;多囊卵巢綜合征合并高胰島素血癥體質(zhì)及熱代謝特點的研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2016年

3 楊頤紋;多囊卵巢綜合征的中醫(yī)證治文獻研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2017年

4 謝麗珍;基于定量蛋白質(zhì)組學技術的肥胖多囊卵巢綜合征患者血清差異蛋白生物信息學分析[D];廣州醫(yī)科大學;2018年

5 劉雪;丹參酮治療多囊卵巢綜合征子宮內(nèi)膜增生病變的臨床觀察[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2014年

6 蔡淑俠;補腎調(diào)沖法治療腎虛血瘀型多囊卵巢綜合征臨床研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2018年

7 張晶;多囊卵巢綜合征不同中醫(yī)證型的特征及與臨床指標的相關性研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2018年

8 賈淑淋;147例多囊卵巢綜合征患者LH水平與中醫(yī)體質(zhì)、證型及影響因素的相關性研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2018年

9 黃娟;基于人工周期療法電針治療多囊卵巢綜合征的臨床隨機對照研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2018年

10 陳新衛(wèi);血清骨橋蛋白、骨膜蛋白與多囊卵巢綜合征相關性研究[D];河北醫(yī)科大學;2018年

本文編號：2835843