目的:多囊卵巢綜合征(Polycystic Ovary Syndrome,PCOS)是青春期及育齡期女性中常見的一種內(nèi)分泌異常疾病,其病理生理變化非常復(fù)雜,發(fā)病機(jī)制至今還未十分明確。肥胖是PCOS的主要臨床體征之一,約30%-75%的PCOS患者存在超重或肥胖,脂肪細(xì)胞在內(nèi)分泌系統(tǒng)調(diào)節(jié)功能中扮演著重要角色,推測肥胖PCOS患者與正常體重的PCOS患者的發(fā)病機(jī)制可能有差異。同位素相對標(biāo)記與絕對定量技術(shù)(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)是一項(xiàng)新興的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),本研究旨在利用iTRAQ技術(shù)對肥胖型與非肥胖型PCOS患者進(jìn)行血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究,探討PCOS相關(guān)差異表達(dá)蛋白與發(fā)病機(jī)制的關(guān)系,為PCOS的病因?qū)W研究和尋找診斷標(biāo)志物等提供更多的線索。方法:選取來自廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院2017年01月至2017年05月的婦科門診患者和正常體檢的健康女性,共64例,包括肥胖PCOS患者16例,非肥胖PCOS患者16例;正常對照女性16例,肥胖正常對照女性16例。收集各組血清,血清去除高豐度蛋白,對其濾出液進(jìn)行蛋白還原烷基化及胰蛋白酶酶解,之后進(jìn)行iTRAQ試劑標(biāo)記,結(jié)合色譜分離技術(shù)體系進(jìn)行蛋白鑒定和定量分析,最后對獲得的差異蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果:經(jīng)過篩選鑒定發(fā)現(xiàn),非肥胖PCOS組和正常對照組相比有93個(gè)差異表達(dá)蛋白,差異倍數(shù)排名前兩位分別是人非紅細(xì)胞血影蛋白-β4(SPTBN4)、鈣蛋白酶-2(CAPN2);肥胖PCOS組和正常對照組相比有179個(gè)差異表達(dá)蛋白,差異倍數(shù)排名前兩位分別是驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員-15(KIF15)、鈣蛋白酶-2(CAPN2);與非肥胖PCOS組相比,肥胖PCOS組有67個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì),差異倍數(shù)最大的是KIF15;與肥胖正常組相比,肥胖PCOS組共鑒定得到10個(gè)差異蛋白,差異倍數(shù)最大的是KIF15。細(xì)胞組分分析顯示:肥胖PCOS與非肥胖PCOS的差異蛋白主要存在于細(xì)胞外間隙;分子功能分析顯示:肥胖PCOS與非肥胖PCOS的差異蛋白主要參與蛋白結(jié)合;生物學(xué)過程分析顯示:肥胖PCOS與非肥胖PCOS的差異蛋白主要參與創(chuàng)傷反應(yīng)、防御反應(yīng)等應(yīng)激反應(yīng)過程。KEGG信號(hào)通路分析顯示:非肥胖PCOS組參與的信號(hào)通路有70種,肥胖PCOS組參與的信號(hào)通路有158種。其中兩組共同參與的顯著性信號(hào)通路(P0.05)是補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)信號(hào)通路。肥胖PCOS組分別與非肥胖PCOS組和肥胖正常對照組比較,其差異蛋白參與的信號(hào)通路涉及多個(gè)糖代謝通路的異常。結(jié)論:1.本研究采用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對PCOS患者進(jìn)行血清蛋白質(zhì)輪廓掃描,成功建立了肥胖PCOS與非肥胖PCOS的血清差異表達(dá)蛋白譜。2.PCOS患者的血清差異蛋白主要涉及蛋白水解、防御反應(yīng)、創(chuàng)傷反應(yīng)、蛋白激活級(jí)聯(lián)、急性炎癥反應(yīng)、補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)信號(hào)通路途徑,提示慢性低度炎癥參與了PCOS的發(fā)生與發(fā)展。肥胖PCOS組參與的通路途徑有158種,而非肥胖PCOS組參與的通路途徑只有70種,提示肥胖PCOS與非肥胖PCOS具有不同的調(diào)控機(jī)制。其中,KIF15是與肥胖型PCOS相關(guān)的血清差異蛋白;CAPN2是潛在的PCOS候選標(biāo)記物。
【學(xué)位單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R711.75
【部分圖文】：

圖 3. 高 pH 反相色譜分離肽段2.8 質(zhì)譜分析：一維色譜分離的多肽樣品經(jīng)離心干燥后，重新溶解于25 μL的0.1%甲酸/2%乙腈/98%水溶液中，取10 μL樣品在Eksigent nanoLC-Ultra 二維納升液相色譜系統(tǒng)并聯(lián)合TripleTOF 5600 plus質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行分析。首先加樣品至納升流量的捕集柱（3 μm， 120 ）上，上樣泵以A液（0.1%甲酸/2%乙腈/98%水溶液）流速為3.0 μL/min進(jìn)行脫鹽10分鐘，然后以B液（0.1%甲酸/2%水/98%乙腈溶液）溶液進(jìn)行梯度洗脫，同時(shí)進(jìn)行質(zhì)譜掃描分析。液相洗脫梯度為70分鐘內(nèi)線性梯度B液從5-40%，（分析柱為75 μm×15 cm ，C18-3 μm 120 ， ChromXP Eksigent 公司）。質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置為：納噴電壓為2.5 kV，霧化氣5 psi，氣簾氣35 psi，離子源加熱溫度為150℃，質(zhì)譜掃描方式為IDA掃描模式，掃描范圍為400-1250 m/z，一級(jí)掃描累加250毫秒，一次一級(jí)質(zhì)譜掃描最多選取30個(gè)母離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，累計(jì)

廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3.2 四組樣品高豐度蛋白去除效果高豐度蛋白去除效果如圖示（圖 4），與原始血清 A（肥胖 PCOS 組）、B（正常對照組）、C（非肥胖 PCOS 組）、D（肥胖正常對照組）相比，四組樣品 A-de、B-de、C-de、D-de 的高豐度蛋白去除效果顯著，考馬斯亮藍(lán)染色可見多條新出現(xiàn)的蛋白條帶。

第一部分 多囊卵巢綜合征患者血清的定量蛋白組學(xué)檢測結(jié)果驗(yàn)共定性鑒定了 1690 個(gè)蛋白質(zhì)，其中有定量信息的蛋白質(zhì)為 343 個(gè)果 P 值與定性鑒定蛋白質(zhì)分布火山圖（圖 5）可以看出，四組樣品定量結(jié)果數(shù)目約占 50%左右，在 P<0.0001 的結(jié)果為 30%左右，表明結(jié)果良好。1Volcano Plot ‐ All Ratios, All Proteins
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