【目的】本實(shí)驗(yàn)通過制備金納米顆粒(gold nanoparticles GNPs),并在其表面修飾宮頸癌特異性結(jié)合肽(cervical cancer specific binding peptide,CSP),合成對人宮頸癌具有靶向性的金納米顆粒復(fù)合物CSP-GNPs,研究不同濃度GNPs、CSP-GNPs對人宮頸癌SiHa細(xì)胞存活率的影響,初步探討其對SiHa細(xì)胞的毒性,為后續(xù)進(jìn)行宮頸癌靶向放射增敏實(shí)驗(yàn)研究提供參考依據(jù)。【方法】(1)檸檬酸三鈉還原法制備GNPs,并在室溫下將末端帶有半胱氨酸的CSP與GNPs以Au-S鍵偶聯(lián),合成CSP-GNPs復(fù)合物;并通過調(diào)節(jié)反應(yīng)體系pH值、多肽溶液/金納米顆粒溶液體積比及反應(yīng)時(shí)攪拌轉(zhuǎn)速,研究其對CSP-GNPs分散性及穩(wěn)定性的影響;采用馬爾文粒度儀、透射電子顯微鏡(TEM)、掃描電子顯微鏡(SEM)、紫外可見分光光度計(jì)(UV-Vis)等對金納米材料進(jìn)行測試與表征,電感耦合等離子發(fā)射光譜儀(ICP-AES)檢測金納米顆粒溶液中金元素濃度,傅里葉紅外光譜儀、X射線光電子能譜儀(XPS)驗(yàn)證GNPs與CSP連接成功與否。(2)取對數(shù)生長期的人宮頸癌SiHa細(xì)胞,以含有不同濃度的GNPs、CSP-GNPs的無血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)24h、48h后,用臺盼藍(lán)染色法檢測GNPs、CSP-GNPs對SiHa的毒性作用�！窘Y(jié)果】(1)成功制備出平均粒徑大小約16.7nm的GNPs,ICP-AES測定制備的GNPs溶液中金濃度為66.3mg/L。(2)制備出分散性、穩(wěn)定性均較好的CSP-GNPs復(fù)合物。(3)不同濃度的GNPs及CSP-GNPs對SiHa細(xì)胞增殖無明顯抑制作用(P0.05)�！窘Y(jié)論】(1)檸檬酸三鈉還原法制備的GNPs穩(wěn)定性、分散性好,粒徑大小易調(diào)控。(2)成功合成穩(wěn)定性及分散性好的CSP-GNPs復(fù)合物。(3)濃度小于0.336mmol/L的GNPs、CSPGNPs對人宮頸癌SiHa細(xì)胞無明顯細(xì)胞毒性。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

金納米顆粒（GNPs）的制備 所有玻璃實(shí)驗(yàn)儀器及磁力攪拌子均需王水浸泡 6h 后在避光環(huán)境中（四氯金酸水合物不穩(wěn)定）。 磁力攪拌器通電后，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速(300r/m）及加熱溫度蛇形冷凝管及橡膠管連接形成冷凝回流裝置，冷凝管口接橡膠排水管。 向錐形平底燒瓶加入 25mL 三蒸水，放入磁珠，連接冷，邊加熱磁珠邊攪拌，接著向錐形平底燒瓶中加入 0.液體沸騰持續(xù) 10min 后迅速加入 2.5mL 34mmol/L 檸檬沸騰并持續(xù) 10min，停止加熱，磁珠繼續(xù)攪拌反應(yīng)溶液 制備后的 GNPs 溶液用 0.22um 過濾器過濾并于棕色瓶 馬爾文納米粒度儀檢測 GNPs 粒徑大小、TEM 觀察其形吸收光譜，ICP-AES 檢測 GNPs 溶液中金濃度。

圖 3.2 Cys-CSP 的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖2） 多肽的溶解：從-20℃冰箱中取出多肽，常溫放置 20mi心管管底，緩慢打開蓋子，加入 980uL 三蒸水溶解，再加入搖勻，溶解濃度為 1mg/mL，置于 4℃冰箱備用。3） 取上述方法制備的金納溶液 3mL 放至 3 個(gè) 1.5mL 離心管高速離心機(jī)中，8000r/m 離心重懸 5min，去上清液后重懸，酒紅色物質(zhì)沉于管底，棄去淡紅色液體,加入 900uL 三蒸水心管內(nèi)加入 100uL 100umol/L、10umol/L、1umol/L 多肽溶 2h，取樣檢測其紅外光譜及 X 射線光電子能譜圖。 影響 CSP-GNPs 穩(wěn)定性、分散性的研究1） pH 值的影響：將 12 管 1 mLGNPs 溶液，高速離心去除上uL pH 值為 5-12 的水溶液重懸，后再加入 100 umol/L 的CSP

GNPs透射電子顯微鏡圖

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1 李超;GNPs、CSP-GNPs的制備及其對人宮頸癌SiHa細(xì)胞毒性的初步研究[D];南華大學(xué);2019年

本文編號：2834985