研究目的:本研究評估對無精子癥患者行睪丸穿刺取精術(shù)(TESA)獲取的微量精子在超低溫冷凍后的復(fù)蘇效率,并比較凍融后的TESA來源精子與新鮮TESA精子在行卵胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)治療后的臨床結(jié)局。研究方法:超低溫冷凍技術(shù)在人類輔助生殖中應(yīng)用十分廣泛,包括卵細(xì)胞,精子,胚胎冷凍等。正常男性精子冷凍技術(shù)十分成熟,廣泛應(yīng)用于各大人類精子庫。但是無精子癥患者行TESA后獲得的精子由于精子密度低,活率差,采用常規(guī)精子冷凍方法效果不理想。本研究摸索了微量精子冷凍技術(shù),結(jié)合ICSI應(yīng)用于嚴(yán)重男性因素不孕癥患者,進(jìn)行臨床治療�；仡櫺苑治�2015年1月至2016年12月在山東大學(xué)附屬生殖醫(yī)院接受ICSI治療的273例無精子癥患者共273個(gè)治療周期的臨床資料,根據(jù)行ICSI治療精子來源不同,分為冷凍TESA精子組和新鮮TESA精子組。將無精子癥患者行睪丸穿刺活檢所獲的TESA精子提前冷凍,在取卵日將冷凍精子解凍后找到可用精子行ICSI,這部分治療周期歸為冷凍TESA精子組,共79個(gè)周期。將新鮮TESA來源精子行ICSI治療的周期歸為新鮮TESA精子組,共194個(gè)周期。比較兩組的雙原核(2PN)受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、囊胚形成率、種植率、臨床妊娠率、流產(chǎn)率、活產(chǎn)率有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。研究結(jié)果:1.冷凍TESA精子組與新鮮TESA精子組間男女方平均年齡、女方平均身體質(zhì)量指數(shù)、平均不孕年限、基礎(chǔ)促卵泡激素(FSH)水平、hCG日雌二醇(E2)水平、Gn使用總劑量、卵巢刺激持續(xù)時(shí)間、hCG日子宮內(nèi)膜厚度等基礎(chǔ)臨床資料數(shù)據(jù)相比,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.冷凍TESA精子組的正常雙原核受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、優(yōu)質(zhì)囊胚率(73.4%、54.5%、60.1%)與新鮮TESA精子組(71.4%、55.3%、60.9%)相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.比較兩組中質(zhì)量差的胚胎發(fā)育形成囊胚的囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)囊胚率。冷凍TESA精子組囊胚形成率、優(yōu)質(zhì)囊胚率(56.7%、29.0%)與新鮮TESA精子組(50.4%、27.2%)相比,冷凍組的囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)囊胚率均高于新鮮精子組,但是差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.冷凍TESA精子組總胚胎種植率、臨床妊娠率、自然流產(chǎn)率、出生率分別為42.7%、55.1%、14.8%、45.7%,新鮮TESA精子組總胚胎種植率、臨床妊娠率、自然流產(chǎn)率、出生率分別為47.3%、61.7%、13.6%、51.1%,兩組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:微量TESA精子冷凍復(fù)蘇后行ICSI治療可以獲得較好的臨床妊娠結(jié)局,可以避免反復(fù)穿刺取精對睪丸帶來的損傷,減少患者經(jīng)濟(jì)和精神上的負(fù)擔(dān),對無精子癥患者來說是一種安全有效的治療方法。但是關(guān)于微量TESA精子冷凍復(fù)蘇后行ICSI治療對新生兒個(gè)體發(fā)育的影響,還需要更多的基礎(chǔ)研究和臨床結(jié)果追蹤加以探討及驗(yàn)證。意義:微量精子冷凍,能夠減少反復(fù)手術(shù)對男性患者身體的傷害,極大程度保存了患者生育力,具有極高的臨床應(yīng)用價(jià)值。目前國內(nèi)生殖中心正式開展這項(xiàng)技術(shù)的并不多,本研究為微量精子冷凍在臨床上的應(yīng)用,提供了較為豐富的臨床資料和經(jīng)驗(yàn),為微量精子冷凍的技術(shù)發(fā)展提供了很好的思路。本研究首次采用麥管為冷凍載體,結(jié)合冷凍保護(hù)劑冷凍微量睪丸精子。這種冷凍方法的精子回收率與正常精子冷凍相比無顯著性差異。經(jīng)過前期大量預(yù)實(shí)驗(yàn),精子回收率較高,并且操作簡便,適合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際工作需要。同時(shí)研究中使用復(fù)蘇后的精子行ICSI治療取得了較為理想的臨床結(jié)局,各項(xiàng)數(shù)據(jù)都無顯著性差異。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R714.8
【部分圖文】：

精子發(fā)生是睪丸曲精小管中的原始生殖細(xì)胞經(jīng)過高度復(fù)雜的細(xì)胞分裂和細(xì)胞逡逑分化過程，在男性性腺睪丸中完成。該過程主要分為有絲分裂，減數(shù)分裂和精子逡逑形成三個(gè)階段（如圖１．１所示）。①有絲分裂期：位于生精小管基底膜附近的精逡逑原干細(xì)胞經(jīng)過有絲分裂產(chǎn)生兩種類型的細(xì)胞，即Ａ型細(xì)胞補(bǔ)充干細(xì)胞和Ｂ型細(xì)逡逑胞，Ａ型細(xì)胞不進(jìn)入細(xì)胞分化途徑，繼續(xù)進(jìn)行有絲分裂，Ｂ型細(xì)胞進(jìn)入分化途徑，逡逑分化為初級精母細(xì)胞。②減數(shù)分裂期：初級精母細(xì)胞經(jīng)過第一次減數(shù)分裂形成兩逡逑個(gè)次級精母細(xì)胞，每個(gè)次級精母細(xì)胞通過減數(shù)分裂第二次分裂形成兩個(gè)相同的單逡逑倍體精子細(xì)胞。因此，初級精母細(xì)胞產(chǎn)生兩個(gè)細(xì)胞，即次級精母細(xì)胞，兩個(gè)次級逡逑精母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂產(chǎn)生四個(gè)精子細(xì)胞，由原來的二倍體細(xì)胞（２ｎ）變成單倍逡逑體細(xì)胞（Ｉｎ）。③精子形成期：圓形精子細(xì)胞經(jīng)過變形形成流線型、有活動力的逡逑精子的過程。該過程主要包括，核染色質(zhì)高度濃縮形成精子的頭部，高爾基復(fù)合逡逑體形成頂體，中心體遷移到頂體對側(cè)，中心粒形成軸絲，成為精子尾部的主要結(jié)逡逑構(gòu)

圖２．１微？精子冷凍過程逡逑２．邋３．邋２微量睪丸精子復(fù)蘇逡逑（１）、如果患者取卵日有成熟的卵子，便可對提前冷凍的睪丸精子進(jìn)行復(fù)蘇，逡逑將冷凍麥管從液氮罐中取出，放置在室溫下５ｍｍ，等冷凍標(biāo)本完全溶解；逡逑⑵、剪開麥管，立即將冷凍標(biāo)本打入到１５ｍｌ離心管中，在半分鐘內(nèi)加入５－１０逡逑倍體積的精子處理液Ｓｐｅｒｍｒｉｎｓｅ，充分混合均勻，進(jìn)行微量密度梯度離心洗滌，逡逑共洗滌兩次。離心后的沉淀中加入0．５ｍｌ精子處理液，重懸沉淀。逡逑⑶、取出５０微升懸浮液在倒置顯微鏡下觀察是否有活動精子，如果有，可逡逑以在取卵后的４ｈ行ＩＣＳＩ治療；如果沒有活動精子或活動精子數(shù)量極少則重新行逡逑ＴＥＳＡ取精。逡逑２．邋４超促排卵和卵子獲取逡逑

逑中所有ＯＣＣＣ迅速轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中。待撿出所有ＯＣＣＣ后，在體視鏡下計(jì)數(shù)，逡逑放入６％Ｃ0２培養(yǎng)箱培養(yǎng)。（如圖２．２所示）逡逑‘邐町Ｃ逡逑圖２．邋２卵子獲取過程逡逑２．４．３卵子脫顆粒逡逑⑴每位患者準(zhǔn)備一個(gè)四孔皿，提前放到工作臺上預(yù)溫。提前將５％Ｇ－Ｍｏｐｓ逡逑適量加入四孔皿的三個(gè)孔中，每孔用量０．８－ｌｍｌ，上面封礦物油，放到無二氧化逡逑碳的培養(yǎng)箱內(nèi)備用。逡逑⑵準(zhǔn)備２根巴斯德管：第１根不需拉制，用于吸取５％Ｇ－Ｍｏｐｓ、透明質(zhì)酸酶逡逑和ＯＣＣＣ；第２根拉制稍細(xì)，用于轉(zhuǎn)移消化后卵子并脫掉近卵丘細(xì)胞，其直徑約逡逑為１６０－１７０ｕｍ，不能損傷卵細(xì)胞。逡逑⑶準(zhǔn)備開始消化ＯＣＣＣ逡逑①

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本文編號：2834579