研究背景和目的體外受精-胚胎移植(IVF-ET)過程中,輸卵管炎性病變?nèi)绶e液等可能影響宮腔環(huán)境及子宮內(nèi)膜容受性,降低胚胎著床率和臨床妊娠率,增加自然流產(chǎn)率和異位妊娠率。研究顯示,IVF-ET前對(duì)積液輸卵管進(jìn)行處理,如手術(shù)結(jié)扎、切除輸卵管或穿刺抽吸積液等,患者的繼續(xù)妊娠率遠(yuǎn)高于未行任何干預(yù)的女性。目前,常規(guī)的積液輸卵管處理方式有:開腹或腹腔鏡下輸卵管切除術(shù)、輸卵管近端結(jié)扎術(shù)、輸卵管遠(yuǎn)端造口術(shù)及陰道超聲引導(dǎo)下輸卵管積液穿刺抽吸術(shù)等。這些方法各有利弊,主要弊端有,切除或結(jié)扎輸卵管可能因血管神經(jīng)的損傷而影響卵巢功能,輸卵管造口術(shù)和積液抽吸術(shù)容易復(fù)發(fā);有些患者因各種原因不適合手術(shù)治療等。本研究即探討一種非手術(shù)處理積液輸卵管、不影響卵巢功能、復(fù)發(fā)率低的方法。設(shè)定研究方向?yàn)椴捎靡环N新型配方的醫(yī)用膠,通過栓堵方式阻斷輸卵管與子宮的交通,去除輸卵管積液對(duì)胚胎著床的不利影響。關(guān)于IVF-ET前積液輸卵管的栓堵,尚不屬于常規(guī)處理方法,多為介入下機(jī)械性栓堵物如微彈簧圈的栓堵等。將此醫(yī)用膠用于IVF-ET前積液輸卵管的栓堵未見報(bào)道。為驗(yàn)證其有效性及安全性,本研究為前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。選擇與人類輸卵管管腔大小結(jié)構(gòu)相近的新西蘭兔子宮為研究對(duì)象,先通過注菌方式建立兔子宮積液模型,再應(yīng)用α-氰基丙烯酸酯醫(yī)用膠,對(duì)兔的積液子宮進(jìn)行栓堵。術(shù)后通過子宮輸卵管造影評(píng)價(jià)醫(yī)用膠對(duì)兔積液子宮的堵塞效果,并觀察栓堵后子宮、輸卵管及卵巢的組織形態(tài)學(xué)變化、進(jìn)行組織的免疫組化檢測、凋亡檢測和電鏡觀察等,評(píng)價(jià)此醫(yī)用膠的栓堵效果及對(duì)兔子宮等器官組織的影響,以期為臨床上IVF-ET前積液輸卵管的處理提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法選擇新西蘭成年雌兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,建立兔子宮積液模型,再對(duì)積液子宮進(jìn)行醫(yī)用膠栓堵。為摒除兔動(dòng)情周期不同時(shí)期激素對(duì)所觀察指標(biāo)的影響,對(duì)所有兔進(jìn)行外陰粘膜觀察和陰道脫落細(xì)胞學(xué)觀察,判定動(dòng)情周期,將研究的取材時(shí)間設(shè)定在兔的動(dòng)情初-中期階段。1.兔子宮積液模型的建立通過從兔陰門插管至陰道、宮頸及宮腔并開腹觀察輔助的方式,向?qū)m腔內(nèi)注入菌液,建立兔子宮積液模型。所注菌液分別為1.5 ×108/ml金黃色葡萄球菌菌液、大腸埃希菌菌液及1:1混合的金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌菌液;術(shù)后觀察時(shí)間分別為1周、2周和3周。通過對(duì)不同時(shí)間積液子宮的大體形態(tài)學(xué)、組織學(xué)觀察及肌層厚度比較,確定合適的菌液和觀察時(shí)間建立兔子宮積液模型。2.醫(yī)用膠栓堵兔積液子宮選擇35只雙側(cè)子宮積液形成良好的兔,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(23只)和對(duì)照組(12只),另取12只正常兔(無子宮積液)作為空白對(duì)照組。通過兔陰門插管至陰道、宮腔并開腹輔助的方法,對(duì)兔積液子宮的近端進(jìn)行醫(yī)用膠栓堵。對(duì)照組和空白對(duì)照組僅行插管手術(shù),不進(jìn)行醫(yī)用膠栓堵。每組再分為2個(gè)亞組,分別于術(shù)后1個(gè)月、6個(gè)月與術(shù)前比較體重變化;術(shù)后1個(gè)月、6個(gè)月實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兔均行子宮輸卵管造影檢查,進(jìn)行子宮腔栓堵率的比較。術(shù)后1個(gè)月和6個(gè)月,實(shí)驗(yàn)組分別各處死3只兔(均為雙側(cè)子宮腔均栓堵成功的兔);對(duì)照組和空白對(duì)照組各處死2只兔。觀察子宮、輸卵管和卵巢的組織學(xué)改變、比較子宮肌層厚度等。術(shù)后6個(gè)月兔再進(jìn)行組織的雌孕激素受體測定和比較、凋亡檢測及透射電鏡觀察等,以此綜合評(píng)價(jià)醫(yī)用膠對(duì)子宮腔的栓堵效果及對(duì)子宮等器官組織學(xué)變化的影響。結(jié)果1.兔子宮積液模型的建立造模成功的兔子宮明顯擴(kuò)張,內(nèi)膜及肌層變薄,見炎細(xì)胞浸潤。子宮肌層厚度,術(shù)后1周與術(shù)后2周和3周比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;術(shù)后2周與術(shù)后3周比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。術(shù)后2周子宮積液形成程度可以滿足實(shí)驗(yàn)要求。結(jié)合注入菌液情況,認(rèn)為注入1.5×108/ml金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌1:1混合菌液組,于術(shù)后2周可建立良好的子宮積液模型。2.積液子宮的醫(yī)用膠栓堵(1)兔存活情況及體重變化:35只子宮積液兔中成功進(jìn)行醫(yī)用膠栓堵手術(shù)且術(shù)后正常存活的有31只,實(shí)驗(yàn)組20只,對(duì)照組11只。兩組死亡率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;術(shù)后1個(gè)月和6個(gè)月,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兔體重均有增加,兩組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后1個(gè)月及6個(gè)月分別與術(shù)前體重比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)子宮輸卵管造影:實(shí)驗(yàn)組術(shù)后1個(gè)月,子宮堵塞率95.00%;術(shù)后6個(gè)月,子宮堵塞率85.00%。對(duì)照組術(shù)后1個(gè)月和6個(gè)月,堵塞率為0。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組比較,子宮堵塞率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組不同時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)比較,子宮堵塞率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(3)大體觀察:對(duì)照組積液子宮增粗,擴(kuò)張;輸卵管及卵巢無明顯改變。實(shí)驗(yàn)組栓堵即時(shí)子宮腔略增粗,表面光滑;術(shù)后1個(gè)月,栓堵部位長度略縮小,皺縮質(zhì)硬,子宮腔內(nèi)見膠聚合體;術(shù)后6個(gè)月,栓堵部位子宮明顯皺縮;輸卵管卵巢無明顯改變;積液部位子宮無明顯改變。(4)組織形態(tài)學(xué):分別觀察空白對(duì)照組正常子宮、對(duì)照組積液子宮、對(duì)照組積液部位近端子宮、實(shí)驗(yàn)組栓堵部位子宮、實(shí)驗(yàn)組栓堵部位近端子宮等。子宮:對(duì)照組術(shù)后1個(gè)月和6個(gè)月,積液子宮明顯擴(kuò)張,內(nèi)膜變薄,內(nèi)膜下見炎細(xì)胞浸潤。積液部位近端子宮,子宮內(nèi)膜明顯增厚,內(nèi)膜固有層內(nèi)血管擴(kuò)張、充血,內(nèi)膜上皮下可見散在的炎細(xì)胞浸潤。實(shí)驗(yàn)組栓堵后1個(gè)月,栓堵部位子宮腔擴(kuò)張,腔內(nèi)可見大量絲網(wǎng)狀物(膠聚合體),粘膜上皮見紊亂的復(fù)層上皮細(xì)胞、或有局部上皮缺失,見少量炎細(xì)胞浸潤及纖維化。栓堵部位近端子宮,子宮內(nèi)膜呈單層立方狀上皮,固有層散在極少量嗜酸性粒細(xì)胞,未見明顯病理學(xué)改變。實(shí)驗(yàn)組栓堵后6個(gè)月,栓堵部位鏡下結(jié)構(gòu)雜亂模糊,子宮內(nèi)膜正常結(jié)構(gòu)消失,無明顯上皮組織,見肉芽組織增生及纖維化。栓堵部位近端子宮,術(shù)后1個(gè)月與術(shù)后6個(gè)月的組織形態(tài)學(xué)類似,均無明顯病理學(xué)改變。子宮肌層厚度比較,實(shí)驗(yàn)組術(shù)后1個(gè)月,子宮肌層變薄,與術(shù)后6個(gè)月比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);術(shù)后1個(gè)月實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),術(shù)后6個(gè)月無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。余無明顯病理學(xué)變化。輸卵管:對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,輸卵管外膜血管擴(kuò)張、充血,腔內(nèi)見少量炎細(xì)胞浸潤等。余無明顯病理學(xué)變化。卵巢:各組均無明顯病理學(xué)改變。(5)雌孕激素受體(ER、PR)測定與凋亡檢測:子宮ER、PR測定及凋亡檢測顯示,積液子宮、栓堵部位子宮、積液部位近端子宮ER表達(dá)減弱,PR表達(dá)增強(qiáng);凋亡表達(dá)增強(qiáng)。正常子宮與積液子宮、正常子宮與栓堵部位子宮、正常子宮與積液部位近端子宮ER、PR測定平均光密度值、凋亡檢測平均光密度值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,栓堵部位近端子宮與積液部位近端子宮ER比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;其余比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。輸卵管ER、PR測定及凋亡檢測顯示,與空白對(duì)照組輸卵管比較,實(shí)驗(yàn)組輸卵管ER表達(dá)減弱,平均光密度值測定有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組輸卵管PR表達(dá)均增強(qiáng),與空白對(duì)照組比較平均光密度值測定均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其余比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。凋亡檢測平均光密度值均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。卵巢ER、PR測定及凋亡檢測顯示,各組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(6)透射電鏡觀察:積液子宮顯示上皮細(xì)胞腫脹、微絨毛缺失,細(xì)胞器如線粒體等出現(xiàn)空泡化。栓堵后子宮,結(jié)構(gòu)紊亂,細(xì)胞核染色質(zhì)減少、呈核溶解狀態(tài),可見吞噬細(xì)胞等。對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組輸卵管細(xì)胞器如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等輕微空泡化。各組卵巢各類細(xì)胞和細(xì)胞器結(jié)構(gòu)清晰正常,偶見線粒體損傷。結(jié)論1.通過陰道插管并開腹手術(shù)輔助的方式向兔子宮腔內(nèi)注入1.5×108/ml的1:1混合的金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌菌液,2周左右時(shí)間可建立較為穩(wěn)定的子宮積液模型。2.醫(yī)用膠能有效栓堵兔積液子宮,對(duì)兔健康存活無不良影響;栓堵對(duì)兔子宮的主要影響即栓堵部位的組織壓迫及粘連改變,對(duì)周圍組織及器官無明顯有害影響;栓堵后子宮、輸卵管及卵巢的組織學(xué)、免疫組化、凋亡及電鏡觀察結(jié)果顯示,栓堵不影響受體表達(dá),可以有效去除積液對(duì)宮腔的不良影響,有利于宮腔環(huán)境的改善;栓堵對(duì)卵巢無明顯影響。3.兔子宮與人類輸卵管的管腔大小和組織結(jié)構(gòu)相近,故兔子宮可以作為人類輸卵管的研究模型。對(duì)醫(yī)用膠栓堵兔子宮可行性、有效性和不良影響的研究顯示,醫(yī)用膠用于人類IVF-ET前積液輸卵管的栓堵具有可行性。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R714.8
【部分圖文】：

兔子宮輸卵管卵巢Figure1Theutems,fallopiantubeandovaryofrabbit

圖１兔子宮輸卵管卵巢逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｔｈｅ邋ｕｔｅｒａｓ，邋ｆａｌｌｏｐｉａｎ邋ｔｕｂｅ邋ａｎｄ邋ｏｖａｒｙ邋ｏｆ邋ｒａｂｂｉｔ逡逑

表層細(xì)胞為主，細(xì)胞大，核小而致密（２０0ｘ）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｖａｇｉｎａ邋ｅｘｆｏｌｉｏｃｙｔｏｌｏｇｙ邋Ｅｓｔｒｕｓ．逡逑ｈｅ邋ｓｕｒｆａｃｅ邋ｃｅｌｌｓ邋ａｒｅ邋ｄｏｍｉｎａｎｔ，邋ｔｈｅ邋ｃｅｌｌｓ邋ａｒｅ邋ｌａｒｇｅ，邋ｐｏｌｙｇｏｎａｌ，邋ａｎｄ邋ｔｈｅ邋ｎｕｃｌｅｕｓ邋ｉｓ邋ｓｄｅｎｓｅ邋（２０0ｘ）逡逑子宮積液統(tǒng)計(jì)圖逡逑邐Ｍ金黃色■邐「｜廠｜邐□大腸ｎ邐１邐□混合邐Ｋｎ邐Ｋ逡逑Ｉ邋媝逡逑

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本文編號(hào)：2831731