發(fā)布時(shí)間：2020-09-27 07:59

　　 目的：子宮內(nèi)膜異位癥是好發(fā)于育齡期婦女的一種婦科常見疾病，臨床癥狀主要表現(xiàn)為明顯的痛經(jīng)、月經(jīng)增多及不孕等，嚴(yán)重的影響了患者的生活質(zhì)量。目前，其發(fā)病機(jī)制仍不明確。子宮內(nèi)膜異位癥的惡變率很低，但是臨床研究顯示，其可以表現(xiàn)出侵襲轉(zhuǎn)移等惡性腫瘤的特性。因此，介導(dǎo)侵襲轉(zhuǎn)移的基因可能在其發(fā)病過程中起到了重要的作用。 E-鈣粘蛋白，是一種跨膜糖蛋白，在細(xì)胞間的粘附過程中起重要作用，其表達(dá)水平的下調(diào)可導(dǎo)致細(xì)胞間的粘附能力降低，而細(xì)胞的活動(dòng)性也將隨之增加。在上皮性腫瘤中，E-鈣粘蛋白的表達(dá)下降可以直接促進(jìn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲�；騿�(dòng)子區(qū)的高甲基化是E-鈣粘蛋白下調(diào)甚至失活的重要途徑，在諸多腫瘤組織中都檢測到其基因CDH1啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化，并且mRNA和蛋白的表達(dá)量也會(huì)隨之下降。對(duì)于子宮內(nèi)膜異位癥的研究發(fā)現(xiàn)，在E-鈣粘蛋白表達(dá)下調(diào)的異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞株中檢測到CDH1基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化，應(yīng)用曲古抑菌素A（去甲基化藥物）處理后，E-鈣粘蛋白恢復(fù)高表達(dá)，同時(shí)細(xì)胞的侵襲性減弱。 本研究旨在探討CDH1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病中的作用，意義在于從分子機(jī)制上更為深入地探究其發(fā)病機(jī)制，也為臨床上治療該疾病提供新的靶點(diǎn)。 方法： 1標(biāo)本采集：病例組：2012.8—2013.3在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院婦科就診并行手術(shù)治療的卵巢子宮內(nèi)膜異位癥（卵巢巧克力囊腫）患者的異位內(nèi)膜及其在位內(nèi)膜組織各50例，患者的平均年齡為36.74±6.76歲，術(shù)后病理診斷全部是子宮內(nèi)膜異位癥，術(shù)前從未接受過激素治療。對(duì)照組：收集在同一家醫(yī)院同期因CINⅢ做全子宮切除術(shù)患者的子宮內(nèi)膜組織50例，患者的平均年齡為43.57±5.02歲，均經(jīng)病理證實(shí)是正常子宮內(nèi)膜組織，無惡變及子宮內(nèi)膜異位癥。 2實(shí)驗(yàn)步驟 2.1標(biāo)本處理：病例組與對(duì)照組標(biāo)本離體后，即刻浸泡在事先準(zhǔn)備好的RNA later液中，并馬上轉(zhuǎn)移到4℃冰箱中過夜，后放在-20℃冰箱中貯存以備用。 2.2DNA提取：將病例組與對(duì)照組標(biāo)本各取出50-100mg，分別進(jìn)行組織研磨，提取組織DNA。 2.3E-鈣粘蛋白基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)檢測：利用甲基化特異性PCR技術(shù)（MSP）檢測所有標(biāo)本的組織DNA中的甲基化情況，分別計(jì)算兩組的甲基化率。 2.4MSP結(jié)果驗(yàn)證：隨機(jī)抽取甲基化陽性和陰性樣本，PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆和測序，驗(yàn)證MSP結(jié)果的準(zhǔn)確性。 2.5RNA提取：將病例組與對(duì)照組標(biāo)本各取出50-100mg，在冰上研磨，提取組織RNA。 2.6E-鈣粘蛋白基因mRNA表達(dá)水平的檢測：利用RT-PCR方法分別檢測甲基化陽性和甲基化陰性的標(biāo)本中E-鈣粘蛋白基因mRNA的表達(dá)情況。 2.7E-鈣粘蛋白表達(dá)水平的檢測：應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測甲基化陽性和甲基化陰性的標(biāo)本中E-鈣粘蛋白的表達(dá)情況。 2.8數(shù)據(jù)分析：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS軟件分析。 結(jié)果: 1病例組與對(duì)照組中CDH1基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化情況 異位、在位和正常內(nèi)膜組織中，CDH1基因的甲基化率分別是32%（16/50）、26%（13/50）和8%（4/50）。與正常內(nèi)膜組織相比，異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜組織中的甲基化率均明顯升高（χ2=9.00，P=0.003；χ2=5.74，P=0.017）。在位內(nèi)膜組織與異位內(nèi)膜組織相比，無明顯差異（χ2=0.44，P=0.509）。 2甲基化陽性和甲基化陰性的組織中CDH1基因mRNA表達(dá)量的比較 甲基化陽性的組織中，CDH1基因mRNA的平均表達(dá)量為0.41±0.20；甲基化陰性的組織中，CDH1基因mRNA的平均表達(dá)量為0.55±0.07。經(jīng)t檢驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)，甲基化陽性組織中mRNA的表達(dá)量明顯低于甲基化陰性組織（t=-2.50，P=0.023）。 3甲基化陽性和甲基化陰性的組織中E-鈣粘蛋白表達(dá)量的比較 甲基化陽性組織中，E-鈣粘蛋白的平均表達(dá)率為9.58±8.08%；甲基化陰性的組織中，E-鈣粘蛋白的平均表達(dá)率為18.72±12.70%。經(jīng)t檢驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)，甲基化陽性組織中E-鈣粘蛋白的表達(dá)率明顯低于甲基化陰性組織（t=-2.35，P=0.027）。 4甲基化陽性和甲基化陰性的組織中CDH1基因mRNA表達(dá)量和E-鈣粘蛋白表達(dá)率的相關(guān)性比較 經(jīng)Pearson Correlation Coefficients檢驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)，CDH1基因mRNA的表達(dá)量和其對(duì)應(yīng)的E-鈣粘蛋白的表達(dá)率密切相關(guān)（r=0.43，P=0.017）。 結(jié)論： 卵巢子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位內(nèi)膜CDH1基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化可能通過下調(diào)其mRNA的表達(dá)水平，導(dǎo)致E-鈣粘蛋白表達(dá)的減少，從而增加了婦女卵巢子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R711.71
【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
材料與方法
結(jié)果
附圖
附表
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 E-鈣粘蛋白與子宮內(nèi)膜異位癥
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致謝
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