前列腺素及其受體在月經(jīng)發(fā)生中對(duì)子宮內(nèi)膜崩解脫落作用機(jī)制的研究
【學(xué)位單位】:北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位年份】:2018
【中圖分類】:R711
【部分圖文】:
on-peccnng、,oacvy、逡逑BO邋(MaximumBinding)、標(biāo)準(zhǔn)品(Standards)和樣品孔;逡逑(3)每個(gè)孔根據(jù)不同試劑盒的要求加入相應(yīng)的試劑,NSB、Blk、B0和Sample/std逡逑分解加入邋Elisa邋Buffer。B0邋和邋Sample/std邋加入邋Primary邋Antibody邋solution邋后,逡逑室溫孵育1邋h,后直接加入Conjunction邋solution,室溫孵育2邋h,同時(shí)配置逡逑Washing邋Buffer和Substation邋Solution。洗板4次,每次洗板后在紙巾上輕拍。逡逑加入Substation邋Solution室溫避光孵育;逡逑(4)最后一步顯色完成后30邋min內(nèi),根據(jù)試劑盒所需的波長(zhǎng)下測(cè)定每孔的OD逡逑值;逡逑(5)根據(jù)每個(gè)試劑盒的不同要求擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)公式計(jì)算得到組織均漿中每逡逑毫克組織標(biāo)本中含有前列腺素的量;逡逑(6)邐3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)得到的相對(duì)表達(dá)量,用平均值±SEM值作圖表示。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分逡逑析用t檢驗(yàn)(Student’s邋t-test)或單因素方差分析(one-way邋analysis)檢驗(yàn)其逡逑差異性。非正態(tài)分布數(shù)據(jù)用秩和檢驗(yàn)(ranksumtest)。當(dāng)戶<0.05視為差異逡逑顯著,戶<0.01差異極顯著;逡逑(7)每個(gè)前列腺素檢測(cè)的ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖1-2):逡逑A邋120邐X—,邐........—...........邋8邋100逡逑
4)數(shù)據(jù)分析(AACt法)逡逑利用Step-One?實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀后,得到各個(gè)樣品所擴(kuò)增基因的Ct逡逑值,擴(kuò)增曲線和熔解曲線(見圖1-3)。逡逑A邐Melt邋Curve邐B邐Amplification邋Plot逡逑100邋?逡逑-一逡逑-邐I邋'逡逑i=邋r;邋Ajf逡逑—邐j邋;邐ow,邐/邋/-y逡逑…。邐h丨丨邐_邋f逡逑I邋I逡逑二一邋,/邐0邋00001逡逑iooooo逡逑,逡逑、邋0000001邋-邋邐邋—-—邋-邋-逡逑^邐X.邐邋2邐?邐?邐?邋Nnu?i<?sa?aai>xiMaBa逡逑mo邐roo邐rso邐^邋■0邋o邐mb邐■00邐mo邐Cytld逡逑■二滝B邋灥C?BD邋畫邋EHIF邐■*邋1邋B邋?C邋■0逡逑|邐_E邋_P邐逡逑圖1-3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增曲線圖(A),實(shí)時(shí)PCR熔解曲線(B)。逡逑根據(jù)擴(kuò)增曲線得到目的基因的Ct值,代入公式:逡逑/\Ct=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因逡逑AACt=ACt實(shí)驗(yàn)組-ACt實(shí)驗(yàn)對(duì)照組逡逑實(shí)驗(yàn)對(duì)照組為實(shí)驗(yàn)處理的對(duì)照組,如孕酮撤退前的Oh。逡逑mRNA邋Relative邋expression邋=邋2 ̄AACt逡逑三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)得到的某個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量,用平均值±SEM值作圖表示。數(shù)逡逑據(jù)統(tǒng)計(jì)分析用t檢驗(yàn)(Student’s邋t-test)或單因素方差分析(one-way邋analysis)檢驗(yàn)逡逑其差異性。經(jīng)檢驗(yàn)非正態(tài)分布數(shù)據(jù)用秩和檢驗(yàn)(rank邋sum邋test)。當(dāng)P<0.05視為差異逡逑顯者
京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院邐博士研究生學(xué)位論文逡逑b.細(xì)胞核蛋白提取逡逑將提取過細(xì)胞質(zhì)蛋白的沉淀,加入500邋mL預(yù)冷的1XPBS,邋12000邋g離心2邋min。逡逑輕吸走液體,棄上清。每個(gè)樣本加入300邋|iL預(yù)冷的細(xì)胞核提取液,置于振蕩器上逡逑分震蕩15邋sec,后冰上放置2邋min。重復(fù)4次。后在冰上靜止10邋min。分別取2邋pL的逡逑胞質(zhì)蛋白液體和2邋pL邋2%臺(tái)盼藍(lán)染液,充分混勻,靜止2邋min后。滴在載玻片上,逡逑并蓋上24X24邋mm的蓋玻片,在20邋X普通光學(xué)顯微鏡下鏡檢。觀察細(xì)胞核膜是否破逡逑,細(xì)胞核蛋白完全釋放出來。12000邋g離心6邋min,輕輕吸出上清即為細(xì)胞核蛋白逡逑(見圖1-4)。離心后的上清液迅速轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的新離心管中,液氮速凍,-80°C冰逡逑保存。逡逑^胞質(zhì)蛋白邐邐胞核蛋白逡逑
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本文編號(hào):2826952
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