【目的】為進一步提高體外受精-胚胎移植的臨床妊娠率,從分子生物學角度探索不孕癥的發(fā)病機制,通過篩選微小染色體維持蛋白4(minichromosome maintenance protein 4,MCM4)所對應的基因為研究對象,明確其在體外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)周期中的動態(tài)變化,分析MCM4及相關因素對IVF-ET妊娠結局的影響及在IVF-ET周期中的變化原因,為臨床的診斷和治療提供思路和依據。【方法】以2017年6月-2017年12月于大理大學第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學科行體外受精-胚胎移植的不孕癥患者為研究對象,根據IVF-ET的妊娠結局分為妊娠成功組和妊娠失敗組,每組各20例患者。所有患者均采用標準長方案進行控制性超促排卵,經陰道超聲監(jiān)測卵泡發(fā)育,卵泡成熟后在超聲引導下行穿刺取卵,常規(guī)體外受精18小時后,觀察受精結果,66-68小時后進行碎片評估和胚胎分級,并選擇優(yōu)質胚胎進行移植,于移植15天后,通過血清β-hCG檢測結果判斷是否妊娠成功。收集所有研究對象的相關臨床資料(年齡、不孕年限、體重指數、抗苗勒管激素、卵泡刺激素、黃體生成素、雌二醇、孕酮、人絨毛膜促性腺激素、促性腺激素總用量(Gn總用量)、控制性超促排卵天數(COH天數)、竇卵泡計數、獲卵數、受精率、獲胚數、優(yōu)質胚胎數、優(yōu)質胚胎形成率、移植胚胎數、移植胚胎中優(yōu)質胚胎占比妊娠結局等)。同時收集兩組患者治療過程中不同時期(行IVF-ET治療前階段,Stage I;卵巢刺激開始階段,Stage II;胚胎移植后15天確認生化妊娠階段,Stage III)的外周血樣本分離淋巴細胞,提取細胞中RNA,然后進行熒光定量PCR檢測其MCM4 mRNA表達情況。對相關臨床資料及MCM4結果進行分析�！窘Y果】1、兩組患者一般資料的比較:兩組患者一般資料,年齡、體重指數(BMI)、不孕年限和抗苗勒管激素水平的比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2、各實驗階段患者激素水平對比:兩組患者Stage I和Stage II的卵泡刺激素、黃體生成素、孕酮、雌二醇水平對比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),Stage III的孕酮和人絨毛膜促性腺激素水平對比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3、促排卵情況對比:兩組患者促排卵過程中Gn總用量和COH天數對比,妊娠失敗組的Gn總用量和COH天數均多于妊娠成功組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);兩組患者竇卵泡計數的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、獲卵及胚胎情況對比:兩組患者獲卵總數及獲胚數對比,妊娠成功組獲得MII卵子數、獲得胚胎數及優(yōu)質胚胎數多于妊娠失敗組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);但兩組患者的獲卵總數、受精率和優(yōu)質胚胎形成率差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。5、移植情況對比:兩組患者的移植胚胎數和移植時子宮內膜厚度對比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。兩組移植時的優(yōu)胚占比、子宮內膜分型和移植中粘液出血情況,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。6、各實驗階段患者MCM4表達情況對比:經過比較Ct法換算后,Stage I和Stage III時妊娠成功組患者MCM4 mRNA的表達量顯著高于妊娠失敗組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);妊娠成功組在Stage III時期MCM4 mRNA的表達量顯著低于該組Stage I時,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)�！窘Y論】1、本次研究中不孕癥患者基礎激素水平無法預測IVF-ET妊娠結局。2、較高的Gn用量和較長的COH時長會影響不孕癥患者的卵子成熟度和卵子質量。3、在移植的胚胎數目和質量大致相當且子宮內膜厚度≥8mm的情況下,移植時子宮內膜厚度無法預測IVF-ET妊娠結局。應考慮應用全程動態(tài)的子宮內膜檢測,并在需要時給予人工干預。4、較高的HCG、孕酮水平,較多的MII卵子數、獲得胚胎數、優(yōu)質胚胎數,以及Stage I期和Stage II期MCM4的高表達是妊娠的保護因素;較高的Gn用量和較長的COH時長是妊娠的危險因素。
【學位單位】：大理大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R714.8
【部分圖文】：

RH-a 后第 10-14 日檢查血清卵泡刺激素（FSH）、黃體生成素（LE2）及人絨毛膜促性腺激素（HCG），并進行經陰道超聲監(jiān)測(Tranund,TVS)。當結果符合垂體降調節(jié)標準（子宮內膜≤5 mm，卵泡直血清 FSH＜5 IU/ml，LH＜5 IU/ml，E2＜50 pg/ml）時可以開始 G起始劑量常為 150-225 U/d，我科的常用藥有麗申寶、果納芬和尿an menopausal gonadotropin，HMG），一般根據患者情況給予個體，啟動后第 5 天行 TVS 監(jiān)測卵泡發(fā)育情況，并檢測血清 FSH、平，根據卵泡發(fā)育情況及時調整 Gn 用量，此后隔日復查血 FSH、日或每日行 TVS 監(jiān)測卵泡發(fā)育（如圖 2.1），并酌情調整 Gn 用量G 當天。HCG 注射時機：TVS 顯示有 1 個直徑≥19 mm 的優(yōu)勢卵）或 2-3 個直徑≥17 mm的優(yōu)勢卵泡或直徑≥16 mm 的期望卵泡比例0%-70%，血 E2水平達到平均每個優(yōu)勢卵泡 200 pg/ml 時，停止注G，當晚注射 HCG 250 μg，注射 32-36 h后行經陰道超聲引導下穿刺卵巢過度刺激綜合征（ovarian hyper stimulationsyndrome，OHSS）風 HCG 用量。

圖 2.2 優(yōu)勢卵泡圖2.3.2 卵子和精液的處理一、卵子處理（1）培養(yǎng)皿的配置：用預先配制好并于6%濃度的CO2培養(yǎng)箱（Thermo Forma3111，美國）中過夜平衡至 37 ℃的 M-HTF+10%SSS 培養(yǎng)液、HTF+10%SSS 培養(yǎng)液和 Oil（Irvine Scientific，美國）加入 Falcon3037 培養(yǎng)皿（Falcon，美國）中 制 成 不同 的培 養(yǎng) 皿。 每 位取 卵者 準 備漂 洗 皿 1 個： 中 央圈 加 入1mlM-HTF+10%SSS，外圈加入 1-3mlM-HTF+10%SSS；授精皿 1 個：中央圈加入 1mlHTF+10%SSS，外圈加入 1mlHTF+10%SSS；培養(yǎng)皿 1 個：中央圈加入0.7mlHTF+10%SSS，再在其上覆蓋 0.3ml Oil。（2）卵子漂洗：將卵泡液中找到的卵子收集到漂洗皿的外圈，用巴氏管反復抽吸清除血細胞和污漬，再轉移至漂洗皿中央圈，直到取卵結束將中央圈中收集到的全部卵子再次進行抽吸清洗，并轉移至授精皿外圈進行第三次清洗后再轉

圖 2.3 2PN 受精卵優(yōu)選胎評級和選擇用Peter卵裂期胚胎評分系統(tǒng)對胚胎進行分級[23]：I級胚胎 個細胞，且細胞大小均勻，形態(tài)規(guī)則，透明帶完整，胞空泡現(xiàn)象，碎片量在 0-10%之間。II 級胚胎（如圖 2.5）：細胞大小略不均勻，形態(tài)略不規(guī)則，胞質可有少量顆粒之間。III 級胚胎（如圖 2.6）：第 3 日有 5-6 個細胞，但可有明顯的形狀不規(guī)則，胞質可有顆�；蚩张荩槠刻ィㄈ鐖D 2.7）：第 3 日細胞數≤4 個或細胞大小嚴重不均現(xiàn)象，碎片量在 50%以上。其中 I、II 級胚胎為優(yōu)質胚胎選取兩枚評級最好的胚胎進行移植，年齡大于 35 歲的高的患者可一次移植三枚胚胎，子宮內膜或身體條件不適的

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

1 薛翔;劉紅梅;邵旦兵;唐文杰;聶時南;;JAK/STAT信號通路調節(jié)機制的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2015年11期

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本文編號：2822670