【目的】為進(jìn)一步提高體外受精-胚胎移植的臨床妊娠率,從分子生物學(xué)角度探索不孕癥的發(fā)病機(jī)制,通過篩選微小染色體維持蛋白4(minichromosome maintenance protein 4,MCM4)所對(duì)應(yīng)的基因?yàn)檠芯繉?duì)象,明確其在體外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)周期中的動(dòng)態(tài)變化,分析MCM4及相關(guān)因素對(duì)IVF-ET妊娠結(jié)局的影響及在IVF-ET周期中的變化原因,為臨床的診斷和治療提供思路和依據(jù)�！痉椒ā恳�2017年6月-2017年12月于大理大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科行體外受精-胚胎移植的不孕癥患者為研究對(duì)象,根據(jù)IVF-ET的妊娠結(jié)局分為妊娠成功組和妊娠失敗組,每組各20例患者。所有患者均采用標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)方案進(jìn)行控制性超促排卵,經(jīng)陰道超聲監(jiān)測(cè)卵泡發(fā)育,卵泡成熟后在超聲引導(dǎo)下行穿刺取卵,常規(guī)體外受精18小時(shí)后,觀察受精結(jié)果,66-68小時(shí)后進(jìn)行碎片評(píng)估和胚胎分級(jí),并選擇優(yōu)質(zhì)胚胎進(jìn)行移植,于移植15天后,通過血清β-hCG檢測(cè)結(jié)果判斷是否妊娠成功。收集所有研究對(duì)象的相關(guān)臨床資料(年齡、不孕年限、體重指數(shù)、抗苗勒管激素、卵泡刺激素、黃體生成素、雌二醇、孕酮、人絨毛膜促性腺激素、促性腺激素總用量(Gn總用量)、控制性超促排卵天數(shù)(COH天數(shù))、竇卵泡計(jì)數(shù)、獲卵數(shù)、受精率、獲胚數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎形成率、移植胚胎數(shù)、移植胚胎中優(yōu)質(zhì)胚胎占比妊娠結(jié)局等)。同時(shí)收集兩組患者治療過程中不同時(shí)期(行IVF-ET治療前階段,Stage I;卵巢刺激開始階段,Stage II;胚胎移植后15天確認(rèn)生化妊娠階段,Stage III)的外周血樣本分離淋巴細(xì)胞,提取細(xì)胞中RNA,然后進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)其MCM4 mRNA表達(dá)情況。對(duì)相關(guān)臨床資料及MCM4結(jié)果進(jìn)行分析�！窘Y(jié)果】1、兩組患者一般資料的比較:兩組患者一般資料,年齡、體重指數(shù)(BMI)、不孕年限和抗苗勒管激素水平的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、各實(shí)驗(yàn)階段患者激素水平對(duì)比:兩組患者Stage I和Stage II的卵泡刺激素、黃體生成素、孕酮、雌二醇水平對(duì)比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Stage III的孕酮和人絨毛膜促性腺激素水平對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、促排卵情況對(duì)比:兩組患者促排卵過程中Gn總用量和COH天數(shù)對(duì)比,妊娠失敗組的Gn總用量和COH天數(shù)均多于妊娠成功組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);兩組患者竇卵泡計(jì)數(shù)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、獲卵及胚胎情況對(duì)比:兩組患者獲卵總數(shù)及獲胚數(shù)對(duì)比,妊娠成功組獲得MII卵子數(shù)、獲得胚胎數(shù)及優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)多于妊娠失敗組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);但兩組患者的獲卵總數(shù)、受精率和優(yōu)質(zhì)胚胎形成率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5、移植情況對(duì)比:兩組患者的移植胚胎數(shù)和移植時(shí)子宮內(nèi)膜厚度對(duì)比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。兩組移植時(shí)的優(yōu)胚占比、子宮內(nèi)膜分型和移植中粘液出血情況,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6、各實(shí)驗(yàn)階段患者M(jìn)CM4表達(dá)情況對(duì)比:經(jīng)過比較Ct法換算后,Stage I和Stage III時(shí)妊娠成功組患者M(jìn)CM4 mRNA的表達(dá)量顯著高于妊娠失敗組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);妊娠成功組在Stage III時(shí)期MCM4 mRNA的表達(dá)量顯著低于該組Stage I時(shí),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�！窘Y(jié)論】1、本次研究中不孕癥患者基礎(chǔ)激素水平無(wú)法預(yù)測(cè)IVF-ET妊娠結(jié)局。2、較高的Gn用量和較長(zhǎng)的COH時(shí)長(zhǎng)會(huì)影響不孕癥患者的卵子成熟度和卵子質(zhì)量。3、在移植的胚胎數(shù)目和質(zhì)量大致相當(dāng)且子宮內(nèi)膜厚度≥8mm的情況下,移植時(shí)子宮內(nèi)膜厚度無(wú)法預(yù)測(cè)IVF-ET妊娠結(jié)局。應(yīng)考慮應(yīng)用全程動(dòng)態(tài)的子宮內(nèi)膜檢測(cè),并在需要時(shí)給予人工干預(yù)。4、較高的HCG、孕酮水平,較多的MII卵子數(shù)、獲得胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù),以及Stage I期和Stage II期MCM4的高表達(dá)是妊娠的保護(hù)因素;較高的Gn用量和較長(zhǎng)的COH時(shí)長(zhǎng)是妊娠的危險(xiǎn)因素。
【學(xué)位單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R714.8
【部分圖文】：

RH-a 后第 10-14 日檢查血清卵泡刺激素（FSH）、黃體生成素（LE2）及人絨毛膜促性腺激素（HCG），并進(jìn)行經(jīng)陰道超聲監(jiān)測(cè)(Tranund,TVS)。當(dāng)結(jié)果符合垂體降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)（子宮內(nèi)膜≤5 mm，卵泡直血清 FSH＜5 IU/ml，LH＜5 IU/ml，E2＜50 pg/ml）時(shí)可以開始 G起始劑量常為 150-225 U/d，我科的常用藥有麗申寶、果納芬和尿an menopausal gonadotropin，HMG），一般根據(jù)患者情況給予個(gè)體，啟動(dòng)后第 5 天行 TVS 監(jiān)測(cè)卵泡發(fā)育情況，并檢測(cè)血清 FSH、平，根據(jù)卵泡發(fā)育情況及時(shí)調(diào)整 Gn 用量，此后隔日復(fù)查血 FSH、日或每日行 TVS 監(jiān)測(cè)卵泡發(fā)育（如圖 2.1），并酌情調(diào)整 Gn 用量G 當(dāng)天。HCG 注射時(shí)機(jī)：TVS 顯示有 1 個(gè)直徑≥19 mm 的優(yōu)勢(shì)卵）或 2-3 個(gè)直徑≥17 mm的優(yōu)勢(shì)卵泡或直徑≥16 mm 的期望卵泡比例0%-70%，血 E2水平達(dá)到平均每個(gè)優(yōu)勢(shì)卵泡 200 pg/ml 時(shí)，停止注G，當(dāng)晚注射 HCG 250 μg，注射 32-36 h后行經(jīng)陰道超聲引導(dǎo)下穿刺卵巢過度刺激綜合征（ovarian hyper stimulationsyndrome，OHSS）風(fēng) HCG 用量。

圖 2.2 優(yōu)勢(shì)卵泡圖2.3.2 卵子和精液的處理一、卵子處理（1）培養(yǎng)皿的配置：用預(yù)先配制好并于6%濃度的CO2培養(yǎng)箱（Thermo Forma3111，美國(guó)）中過夜平衡至 37 ℃的 M-HTF+10%SSS 培養(yǎng)液、HTF+10%SSS 培養(yǎng)液和 Oil（Irvine Scientific，美國(guó)）加入 Falcon3037 培養(yǎng)皿（Falcon，美國(guó)）中 制 成 不同 的培 養(yǎng) 皿。 每 位取 卵者 準(zhǔn) 備漂 洗 皿 1 個(gè)： 中 央圈 加 入1mlM-HTF+10%SSS，外圈加入 1-3mlM-HTF+10%SSS；授精皿 1 個(gè)：中央圈加入 1mlHTF+10%SSS，外圈加入 1mlHTF+10%SSS；培養(yǎng)皿 1 個(gè)：中央圈加入0.7mlHTF+10%SSS，再在其上覆蓋 0.3ml Oil。（2）卵子漂洗：將卵泡液中找到的卵子收集到漂洗皿的外圈，用巴氏管反復(fù)抽吸清除血細(xì)胞和污漬，再轉(zhuǎn)移至漂洗皿中央圈，直到取卵結(jié)束將中央圈中收集到的全部卵子再次進(jìn)行抽吸清洗，并轉(zhuǎn)移至授精皿外圈進(jìn)行第三次清洗后再轉(zhuǎn)

圖 2.3 2PN 受精卵優(yōu)選胎評(píng)級(jí)和選擇用Peter卵裂期胚胎評(píng)分系統(tǒng)對(duì)胚胎進(jìn)行分級(jí)[23]：I級(jí)胚胎 個(gè)細(xì)胞，且細(xì)胞大小均勻，形態(tài)規(guī)則，透明帶完整，胞空泡現(xiàn)象，碎片量在 0-10%之間。II 級(jí)胚胎（如圖 2.5）：細(xì)胞大小略不均勻，形態(tài)略不規(guī)則，胞質(zhì)可有少量顆粒之間。III 級(jí)胚胎（如圖 2.6）：第 3 日有 5-6 個(gè)細(xì)胞，但可有明顯的形狀不規(guī)則，胞質(zhì)可有顆�；蚩张荩槠刻ィㄈ鐖D 2.7）：第 3 日細(xì)胞數(shù)≤4 個(gè)或細(xì)胞大小嚴(yán)重不均現(xiàn)象，碎片量在 50%以上。其中 I、II 級(jí)胚胎為優(yōu)質(zhì)胚胎選取兩枚評(píng)級(jí)最好的胚胎進(jìn)行移植，年齡大于 35 歲的高的患者可一次移植三枚胚胎，子宮內(nèi)膜或身體條件不適的

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 薛翔;劉紅梅;邵旦兵;唐文杰;聶時(shí)南;;JAK/STAT信號(hào)通路調(diào)節(jié)機(jī)制的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2015年11期

2 張夢(mèng)婷;高盼;楊永秀;;微小染色體維持蛋白在卵巢癌中的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2014年23期

3 宋慧玲;郭藝紅;孫瑩璞;蘇迎春;;女性體重對(duì)IVF-ET治療結(jié)局影響的臨床觀察[J];中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志;2011年05期

4 王秀秀;李威;劉逸超;侯麗輝;吳效科;;小檗堿對(duì)胰島素抵抗卵巢甾體激素體外合成和代謝的調(diào)控作用[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年02期

本文編號(hào)：2822670