目的:(1)研究單藥Apatinib對宮頸癌的抑制作用。(2)研究SiHa細(xì)胞在Apatinib作用前后基因表達(dá)譜的差異。(3)研究Apatinib與傳統(tǒng)化療藥物聯(lián)合使用對宮頸癌細(xì)胞及裸鼠移植瘤模型的抑制作用,并分析聯(lián)合效應(yīng)。方法:(1)采用CCK8及克隆形成實驗檢測不同濃度Apatinib對宮頸癌細(xì)胞增殖能力的影響,繪制生長曲線,計算半數(shù)抑制濃度IC50;(2)通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測Apatinib對宮頸癌SiHa和Hcc94細(xì)胞凋亡及周期的影響;(3)通過Westem-blot檢測Apatinib對宮頸癌SiHa和Hcc94細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)蛋白以及VEGFR2及下游信號通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)和磷酸化激活情況;(4)通過基因表達(dá)譜芯片篩選Apatinib處理SiHa細(xì)胞前后的差異基因,并對其進(jìn)行GO分析和Pathway分析,通過RT-PCR進(jìn)行mRNA水平的驗證;(5)CCK-8實驗檢測Apatinib與化療藥(順鉑和紫杉醇)分別單獨(dú)和聯(lián)合使用時對宮頸癌細(xì)胞SiHa和Hcc94的抑制增殖情況,,并判斷其聯(lián)用效應(yīng);(6)構(gòu)建SiHa細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型,研究Apatinib與紫杉醇分別單獨(dú)與聯(lián)合使用對腫瘤的抑制情況。結(jié)果:(1)CCK-8實驗顯示Apatinib呈劑量依賴性的抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖,IC50分別為SiHa:13.9±2.4μM,Hcc94:21.8±3.4μM,C33A:26.6±3.1μM,HeLa:31.2±3.5μM;克隆形成實驗顯示Apatinib抑制宮頸癌細(xì)胞SiHa和Hcc94的克隆形成能力(P0.01,P0.01)。(2)流式細(xì)胞分析結(jié)果表明Apatinib誘導(dǎo)SiHa和Hcc94細(xì)胞發(fā)生凋亡(P0.01,P0.01)和G0/G1期阻滯(P0.01,P=0.016)。(3)Apatinib處理宮頸癌SiHa和Hcc94細(xì)胞36 h后,顯著抑制VEGFR2、ERK和AKT的磷酸化。(4)表達(dá)譜芯片顯示,部分參與細(xì)胞周期進(jìn)展(CDK1,CCNC和CCND3)、細(xì)胞凋亡(DAD1和BAG1)和擴(kuò)散(PCNA)的基因顯著下調(diào)。MAPK/ERK(MAPK3、MAPK8和MAPK3K1)和TGF(TGFB1)信號通路的幾個關(guān)鍵基因受到抑制。此外,Apatinib嚴(yán)重影響p53,蛋白酶體,轉(zhuǎn)化生長因子-β,細(xì)胞周期,同源重組和錯配修復(fù)信號通路并調(diào)控參與細(xì)胞周期、細(xì)胞分裂、DNA修復(fù)和細(xì)胞增殖的基因表達(dá)。(5)Apatinib與紫杉醇聯(lián)合使用較單獨(dú)使用兩種藥物具有更顯著的抗腫瘤作用,表現(xiàn)為協(xié)同作用;而Apatinib與順鉑聯(lián)合使用則表現(xiàn)為疊加效應(yīng)。(6)體內(nèi)實驗顯示,與對照組相比,Apatinib組、紫杉醇組以及聯(lián)用組小鼠腫瘤體積均減小(P=0.043,P=0.031,P0.01),Apatinib組、紫杉醇組以及聯(lián)用組小鼠腫瘤重量也明顯小于對照組(P=0.045,P=0.024,P0.01);與對照組相比,紫杉醇組VEGFR2的磷酸化水平無明顯變化,Apatinib組和聯(lián)用組VEGFR2的磷酸化水平顯著降低(P=0.033,P=0.019);Apatinib組、紫杉醇組和聯(lián)用組Ki67表達(dá)均低于對照組(P=0.041,P=0.029,P0.01)。結(jié)論:Apatinib單獨(dú)使用對體內(nèi)外宮頸癌細(xì)胞均有顯著的抑制增殖作用,和紫杉醇聯(lián)用時產(chǎn)生良好的協(xié)同抗腫瘤效應(yīng),因此,Apatinib可能成為臨床治療宮頸癌的新選擇。
【學(xué)位單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

并繪制細(xì)胞生存曲線（圖 2），實驗癌細(xì)胞 HeLa、SiHa、Hcc94、C33A 的增殖，其.4）μM、（26.6±3.1）μM、（21.8±3.43）μ宮頸癌細(xì)胞單細(xì)胞增殖能力的影響，我們選 更敏感的細(xì)胞株SiHa和Hcc94 進(jìn)行了克隆形a 和 Hcc94 細(xì)胞的克隆形成能力，t 檢驗結(jié)果顯異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義（SiHa:P＜0.01；Hcc

頸癌細(xì)胞 HeLa、SiHa、Hcc94、C33A 的增殖，其 I±2.4）μM、（26.6±3.1）μM、（21.8±3.43）μMb 對宮頸癌細(xì)胞單細(xì)胞增殖能力的影響，我們選擇nib 更敏感的細(xì)胞株SiHa和Hcc94 進(jìn)行了克隆形成iHa 和 Hcc94 細(xì)胞的克隆形成能力，t 檢驗結(jié)果顯示差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義（SiHa:P＜0.01；Hcc94:a、SiHa、Hcc94、C33A 四種細(xì)胞株中 VEGFR2 和 p-VEG

圖 3.Apatinib 抑制宮頸癌細(xì)胞克隆形成注：*與對照組相比，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。.2 Apatinib 誘導(dǎo) SiHa 和 Hcc94 細(xì)胞發(fā)生周期阻滯我們通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測 0 μMApatinib，10 μMApatinib，20 μMApatinib 分SiHa 和 Hcc96 細(xì)胞 36 h 后細(xì)胞周期分布情況，實驗結(jié)果顯示 Apatinib 處理組 G比例明顯高于對照組，表明 Apatinib 可誘導(dǎo)宮頸癌 SiHa 和 Hcc94 細(xì)胞發(fā)生 G滯（SiHa:P<0.01；Hcc94:P<0.05）（圖 4A 和 4B）。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2813197