【目的】探究卵母細(xì)胞體外成熟不同時期對應(yīng)的卵丘顆粒細(xì)胞總體巴豆�；揎椉按呋傅牟町�,進(jìn)而探究巴豆酰化修飾對卵母細(xì)胞體外成熟的影響,為完善卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)體系提供研究基礎(chǔ)。【方法】1、通過GEO數(shù)據(jù)庫挖掘及統(tǒng)計分析,比較人卵母細(xì)胞體內(nèi)成熟不同時期對應(yīng)的卵丘顆粒細(xì)胞巴豆酰化修飾催化酶(EP300、CBP、SIRT1、SIRT2、SIRT3、HDAC3、CDYL)的差異;2、通過收集臨床樣本,采用點(diǎn)雜交檢測卵母細(xì)胞體外成熟不同時期對應(yīng)的卵丘顆粒細(xì)胞總體巴豆�；揎棽町�;通過Q-PCR檢測不同時期卵丘顆粒細(xì)胞巴豆�；揎棿呋�(EP300、CBP、SIRT1、SIRT2、SIRT3、HDAC3、CDYL)的差異;以及與卵丘擴(kuò)展的相關(guān)性;3、通過對原代培養(yǎng)的卵丘顆粒細(xì)胞進(jìn)行巴豆酸鈉處理,利用點(diǎn)雜交、PCR、WB檢測巴豆酸鈉對卵丘顆粒細(xì)胞巴豆�；揎椝郊鞍投辊；D(zhuǎn)移酶EP300、CBP的影響;通過CCK8檢測巴豆�；揎棇β亚痤w粒細(xì)胞和293T細(xì)胞系增殖率的影響;通過WB檢測巴豆酰化修飾對卵丘顆粒細(xì)胞和293T細(xì)胞系凋亡的影響;通過PCR檢測卵丘擴(kuò)展基因(HAS2、PGR、PTGS2、PTX3、TNFAIP6)的表達(dá)。4、通過小鼠IVM模型,比較巴豆�；瘜嶒灲M與對照組卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)成熟率�！窘Y(jié)果】1、GEO數(shù)據(jù)庫挖掘的統(tǒng)計分析結(jié)果顯示MII期巴豆�；揎椝厦�(CDYL)表達(dá)量明顯低于GV期,表明卵母細(xì)胞體內(nèi)成熟不同時期對應(yīng)的卵丘顆粒細(xì)胞巴豆酰化修飾酶的表達(dá)存在差異;2、收集人IVM過程中卵母細(xì)胞成熟不同時期對應(yīng)的卵丘顆粒細(xì)胞,點(diǎn)雜交結(jié)果顯示成熟的卵丘顆粒細(xì)胞的總體巴豆�；街饾u增加,Q-PCR技術(shù)檢測巴豆酰基轉(zhuǎn)移酶EP300在成熟卵丘顆粒細(xì)胞中顯著上調(diào);且EP300的表達(dá)量與卵丘擴(kuò)展程度及巴豆�；揎椝酱嬖谡嚓P(guān)性;3、通過對原代培養(yǎng)的卵丘顆粒細(xì)胞進(jìn)行巴豆酸鈉處理,點(diǎn)雜交、PCR檢測結(jié)果顯示巴豆酸鈉可促進(jìn)卵丘顆粒細(xì)胞總體巴豆�；揎椝皆黾蛹癊P300表達(dá)上調(diào);WB檢測結(jié)果顯示巴豆�；揎椏纱龠M(jìn)卵丘顆粒細(xì)胞增殖抑制其凋亡,對293T細(xì)胞的作用相類似;且可上調(diào)卵丘擴(kuò)展基因的表達(dá),加速卵丘顆粒細(xì)胞的擴(kuò)展,恢復(fù)卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程;4、通過小鼠IVM模型,統(tǒng)計分析結(jié)果顯示巴豆�；瘜嶒灲M較對照組卵母細(xì)胞體外成熟率明顯增高,表明增加巴豆酰化修飾可促進(jìn)卵母細(xì)胞體外成熟。【結(jié)論】在卵母細(xì)胞體外成熟過程中,卵母細(xì)胞不同時期對應(yīng)的卵丘顆粒細(xì)胞通過上調(diào)巴豆�；D(zhuǎn)移酶EP300增強(qiáng)巴豆酰化修飾水平,加速卵丘擴(kuò)展,促進(jìn)卵母細(xì)細(xì)胞體外成熟。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R714.8
【部分圖文】：

（CBP/EP300）、去巴豆�；福⊿IRT1、SIRT2、SIRT3、水合酶 CDYL。卵丘顆粒細(xì)胞的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析結(jié)果提示卵母巴豆酰化修飾催化酶存在差異：GV 期未成熟卵丘顆粒細(xì)胞胞之間，其調(diào)控蛋白質(zhì)賴氨酸巴豆酰化修飾（Kcr）目的基差異。MII 期巴豆�；揎椝厦福–DYL）表達(dá)量明顯低＜0.001），提示成熟卵丘顆粒細(xì)胞的巴豆�；揎椝捷^胞的巴豆�；揎椝捷^低，說明卵丘顆粒細(xì)胞在體內(nèi)成熟異性的巴豆酰化修飾。通過對 GSE31681 數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)再挖掘分析，其統(tǒng)計結(jié)果細(xì)胞可能發(fā)生了巴豆�；揎棧也煌瑫r期的卵丘顆粒細(xì)胞化修飾水平。

期卵丘顆粒細(xì)胞進(jìn)行臨床驗證，以評價體外成熟過程中巴過點(diǎn)雜交技術(shù)檢測不同時期卵丘顆粒細(xì)胞總體巴豆酰化修著卵母細(xì)胞的成熟，卵丘顆粒細(xì)胞的總體巴豆�；街�0.05），表明不同時期卵丘顆粒細(xì)胞總體存在巴豆�；薅辊；揎椣嚓P(guān)催化酶均來源于乙�；揎椕阁w系，同時作用，我們同時驗證了不同時期卵丘顆粒細(xì)胞是否存在乙結(jié)果顯示 GV 期、MI 期、MII 期卵丘顆粒細(xì)胞乙酰化修飾圖 1-2 B，p＞0.05），表明卵母細(xì)胞體外成熟與乙�；瘜嶒灲Y(jié)果表明 IVM 過程中不同時期的卵丘顆粒細(xì)胞的總體差異；結(jié)合 GEO 數(shù)據(jù)庫結(jié)果，表明在體內(nèi)成熟過程與體外胞巴豆酰化修飾水平存在不同調(diào)控模式。

圖 1-3：IVM 過程中卵丘顆粒細(xì)胞的巴豆酰化修飾水平、擴(kuò)展程度與 EP300 mRNA 水相關(guān)性。（A）巴豆�；揎椪{(diào)控酶 EP300 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)，（B）其他調(diào)控表達(dá)水平；mRNA 轉(zhuǎn)錄水平通過 Taqman 探針 RT-PCR 方法檢測，ACTB 作為內(nèi)參參（C）卵丘擴(kuò)展程度與 EP300 表達(dá)量的相關(guān)性，把 1~4 級擴(kuò)展程度的卵丘顆粒細(xì)胞分組：1~2 級歸為緊密擴(kuò)展程度組（low cumulus expansion），3~4 級歸為松散擴(kuò)展程（high cumulus expansion），分別檢測兩組 EP300 的表達(dá)量并統(tǒng)計分析；分別根據(jù)顆粒細(xì)胞 Kcr 和 Kac 點(diǎn)雜交強(qiáng)度分為三組，+：弱修飾作用，++：中度修飾作用，+++：飾作用，分別檢測（D）巴豆酰化修飾水平、（E）乙酰化修飾水平與 EP300 表達(dá)量的性并統(tǒng)計分析； *：p<0.05， **：p<0.01，有統(tǒng)計學(xué)差異。2.2.4 驗證 siEP300 對卵丘顆粒細(xì)胞巴豆�；挠绊�

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本文編號：2811012