目的：宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤。近年來宮頸癌的發(fā)病和病死率增加并有年輕化傾向,我國這一情況尤其明顯。侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致臨床治療失敗和死亡的主要原因。宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移的具體調(diào)控機制目前仍不明確。作為宮頸癌的元兇,HPV除了參與癌癥發(fā)生,在侵襲轉(zhuǎn)移中又扮演何種角色,是本研究的主要目的。 方法：利用人HPV+及HPV-配對宮頸癌細胞系,從細胞形態(tài)學(xué)、mRNA和蛋白水平,分別利用實時定量PCR和免疫蛋白印跡方法觀察和檢測干預(yù)HPV16E7表達對于細胞EMT現(xiàn)象的影響,并通過Transwell實驗和細胞球形成實驗檢測HPV16E7誘導(dǎo)EMT改變后細胞運動侵襲能力及干細胞樣特性的變化；隨后通過實時定量PCR檢測和篩選EMT/CSC調(diào)控網(wǎng)絡(luò)相關(guān)基因的表達變化,挑選差異表達最為明顯的Twist2在宮頸癌組織中利用免疫組織化學(xué)染色及統(tǒng)計學(xué)方法分析研究HPV16E7、Twist2和EMT之間的相關(guān)性；靶向干預(yù)Twist2后分別在mRNA和蛋白水平檢測其在HPV16E7誘導(dǎo)EMT及相應(yīng)運動和干細胞樣特性中的作用,并且利用蛋白質(zhì)免疫共沉淀的方法探索HPV16E7與Twist2的相互作用模式。 結(jié)果： 1. HPV16E7在宮頸癌細胞中能誘導(dǎo)EMT 2. HPV16E7誘導(dǎo)的EMT伴隨有運動能力和干細胞樣特性的獲得 3. HPV16E7是EMT/CSC基因網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵調(diào)控因子 4.宮頸癌組織中HPV16E7、Twist2和EMT的相關(guān)性研究 5. Twist2在宮頸癌中是HPV16E7誘導(dǎo)EMT過程中的直接下游靶點。 結(jié)論：HPV16E7通過直接靶向轉(zhuǎn)錄因子Twist2來誘導(dǎo)EMT和干細胞樣特性進而促進宮頸癌的侵襲轉(zhuǎn)移 目的：前期研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子Twist2在宮頸癌中是HPV16E7誘導(dǎo)EMT和侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵下游分子。本研究進一步在臨床組織中探討分析Twist2在宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后中的作用。 方法：收集144例宮頸癌臨床標本組織及詳細病例資料,并進行密切隨訪。利用免疫組織化學(xué)的方法檢測組織中Twist2的表達情況,并利用統(tǒng)計學(xué)方法分析備項臨床及分子指標與宮頸癌預(yù)后的相關(guān)性,并比較各指標之間的預(yù)判權(quán)重和相關(guān)性。 結(jié)果： 1.盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FIGO分期、wist2胞核表達是判斷宮頸癌預(yù)后的獨立預(yù)測指標 2. Twist2胞核表達評估宮頸癌預(yù)后的效能次于盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài),并優(yōu)于FIGO分期 3. Twist2胞核表達與宮頸癌盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及FIGO分期之間存在相關(guān)性 結(jié)論：Iwist2胞核表達是判斷宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的獨立預(yù)測指標, 目的：現(xiàn)有研究認為,EMT和衰老逃逸是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵機制。前期研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子Twist2是HPV16E7誘導(dǎo)EMT和侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵下游分子并與宮頸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后相關(guān),本研究進一步探索Twist2在宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移中的功能以及作用機制。 方法：運用免疫組織化學(xué)方法檢測宮頸癌組織中Twist2與EMT標志物(E-cadherin)和衰老標志物(CBX3)的相關(guān)性。利用正義pcDNA3.1(+)/Twist2質(zhì)粒和靶向Twist2的小分子干擾RNA轉(zhuǎn)染宮頸癌細胞SiHa,實時定量PCR和蛋白免疫印跡實驗檢測EMT相關(guān)指標的變化以及通過Transwell實驗觀察細胞侵襲遷移能力的改變,并運用免疫細胞學(xué)染色和p-半乳糖苷酶染色檢測細胞衰老的變化。 結(jié)果： 1.宮頸癌組織中,Twist2與E-cadherin、CBX3的表達呈負相關(guān),并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)存在相關(guān)性。 2. Twist2能誘導(dǎo)宮頸癌細胞EMT的發(fā)生和運動侵襲能力的獲得 3. Twist2在宮頸癌細胞能誘導(dǎo)衰老逃逸。 結(jié)論：Twist2通過誘導(dǎo)EMT和衰老逃逸來參與宮頸癌的侵襲轉(zhuǎn)移。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R737.33

【共引文獻】

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1 楊曉宇;范飛;付曉輝;李愛軍;;肝細胞癌組織中ZEB-1的表達及意義[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2012年08期

2 楊陽;張成;婁遠蕾;謝安;王共先;汪泱;;前列腺癌患者血清miRNA-192的表達及其靶基因預(yù)測分析[J];廣東醫(yī)學(xué);2012年15期

3 馮望德;伍嬌嬌;;上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化與宮頸癌的研究進展[J];安徽醫(yī)學(xué);2013年07期

4 周紅;許文;陳小娥;;瘢痕疙瘩同位素治療方法的臨床研究[J];東南國防醫(yī)藥;2013年04期

5 王有良;朱一劍;丁顯平;;L1、E6和E7基因序列分析[J];成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年03期

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8 江金群;張玉心;徐成嶺;胡建國;馬杰;石瑩;;Hes1基因啟動子的克隆及活性研究[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年09期

9 李海明;;動態(tài)增強MRI在卵巢腫瘤中的研究進展[J];放射學(xué)實踐;2013年09期

10 毛源;鄭偉;張厚智;;人乳頭瘤病毒感染的實驗室診斷研究進展[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2013年19期

本文編號：2809666