目的:利用機(jī)械感染雙重?fù)p傷法建立大鼠宮腔粘連(IUA)模型,以探討羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(hAMSCs)和(或)雌激素在治療宮腔粘連中的效果及其可能的作用機(jī)制。方法:1.采用酶消化法提取hAMSCs,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原CD29、CD90、CD34、HLA-DR和免疫熒光檢測(cè)波形蛋白(VIM)和角蛋白(CK19)的表達(dá)以鑒定hAMSCs。采用PKH26對(duì)第3代h AMSCs進(jìn)行熒光染色,計(jì)算即時(shí)標(biāo)記率。通過(guò)CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)h AMSCs活性和增殖能力,流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡和周期,以明確PKH26染色劑對(duì)hAMSCs生物學(xué)特性的影響。2.選取60只雌性SD大鼠隨機(jī)分成5組,依次為空白組(A)、模型組(B)、雌激素組(C)、hAMSCs移植組(D)、h AMSCs移植和雌激素聯(lián)合組(E)。利用機(jī)械感染雙重?fù)p傷法建立大鼠IUA模型,1W后每組分別取6只大鼠子宮進(jìn)行HE和Masson染色以判斷建模是否成功。C、D、E組余下的大鼠給予相應(yīng)的治療:C組給予0.1mg/kg口服雌激素,連續(xù)5d;D組經(jīng)尾靜脈移植1mL PKH26標(biāo)記的h AMSCs(約2x10~6個(gè));E組同時(shí)給予C和D組的治療。治療后2W,收集每組大鼠子宮組織,采用HE染色計(jì)算子宮內(nèi)膜中腺體數(shù)目、Masson染色分析子宮內(nèi)膜纖維化程度、熒光共聚焦顯微鏡觀察PKH26標(biāo)記的h AMSCs在子宮內(nèi)膜中的分布情況以及免疫組化檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、CK蛋白在子宮組織中的變化情況。結(jié)果:1.h AMSCs經(jīng)過(guò)3次傳代后,細(xì)胞形態(tài)趨于穩(wěn)定,呈成纖維細(xì)胞樣。流式結(jié)果顯示hAMSCs高表達(dá)CD29、CD90,幾乎不表達(dá)CD34、HLA-DR,免疫熒光實(shí)驗(yàn)表明hAMSCs主要表達(dá)間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物VIM,而不表達(dá)上皮細(xì)胞標(biāo)志物CK19。PKH26染色的hAMSCs即時(shí)標(biāo)記率約為100%,PKH26染色劑對(duì)h AMSCs的活性、增殖、凋亡、周期等生物學(xué)特性無(wú)明顯影響。2.建模后,大鼠子宮內(nèi)膜中腺體的數(shù)目明顯減少,纖維化程度增加(P0.05)。通過(guò)治療,相比B組,各治療組(C、D、E組)腺體數(shù)目均有不同程度的增加,子宮內(nèi)膜纖維化程度減少,VEGF、CK蛋白的表達(dá)量增加,其中E組變化情況最明顯,基本恢復(fù)到A組的正常水平。熒光共聚焦顯微鏡下D組和E組可觀察到散在的紅色熒光,主要分布在大鼠子宮內(nèi)膜中。結(jié)論:PKH26標(biāo)記技術(shù)是追蹤h AMSCs在體內(nèi)分布遷移的安全有效方法。利用機(jī)械和感染雙重?fù)p傷法可以成功建立穩(wěn)定的IUA動(dòng)物模型。h AMSCs移植聯(lián)合雌激素治療IUA的效果最佳,推測(cè)hAMSCs通過(guò)分泌VEGF,誘導(dǎo)血管再生,而雌激素為h AMSCs誘導(dǎo)提供了良好的微環(huán)境,使hAMSCs活性一直維持在較高的水平,可以更好地促進(jìn)IUA大鼠子宮內(nèi)膜的再生修復(fù)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R711.74
【部分圖文】：

圖 1.1 人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在顯微鏡下的形態(tài) (x40)Fig. 1. 1 Morphology of human amniotic mesenchymal stem cells under microscope(x 40)(a) The primary cells in the third day; (b) Cells after passage2.2 人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定

圖 1.2 人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞免疫表型測(cè)定Fig. 1.2 The immunophenotype of human amniotic mesenchymal stem cells.(a) CD29 (99.60%, positive); (b) CD90 (98.69%, positive)(c) CD34 (0.45%, negative); (d) HLA-DR (1.04%, negative)

圖 1.3 人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞波形蛋白 (a)、角蛋白 (b)的表達(dá)情況 (x200)Fig. 1.3 The expression of vimentin (a) and keratin (b) in hAMSCs (x200)2.3 人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的 PKH26 標(biāo)記情況

【參考文獻(xiàn)】

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1 段華;夏恩蘭;;宮腔粘連臨床診療中國(guó)專家共識(shí)[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2015年12期

2 付鑫;程龍鳳;王藹明;趙勇;;宮腔鏡手術(shù)聯(lián)合干細(xì)胞在宮腔粘連中的應(yīng)用進(jìn)展[J];中國(guó)計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科;2015年09期

3 李慧娟;何援利;胡海燕;周曼萍;李競(jìng)雄;王顯;歐瑩;陳思萍;張冬梅;;防粘連膜治療新西蘭大白兔宮腔粘連的效果[J];廣東醫(yī)學(xué);2015年10期

4 蔡慧華;何援利;李慧娟;李競(jìng)雄;劉芳;;宮腔粘連大鼠模型的建立及其與白細(xì)胞介素21的相關(guān)性分析[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2015年04期

5 張遞思;史明霞;董堅(jiān);;人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床前研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2015年09期

6 葉小鳳;何援利;付霞霏;王雪峰;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療順鉑致卵巢的化療性損傷[J];中國(guó)組織工程研究;2015年10期

7 路平;趙瀟丹;郝玉娟;田捧;郭玉琪;;小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在子宮內(nèi)膜損傷小鼠子宮內(nèi)膜中的定位[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年01期

8 胡曉曉;林小娜;江寅申;施麗冰;王婕妤;趙莉娟;張松英;;小鼠子宮內(nèi)膜電凝損傷模型的建立[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2014年47期

9 馬娜娜;王祥珍;;核轉(zhuǎn)錄因子κb在宮腔粘連大鼠模型中的表達(dá)[J];中國(guó)計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科;2014年02期

10 陳芳;隋龍;;干細(xì)胞在宮腔粘連治療中的研究進(jìn)展[J];國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2014年06期

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1 林小娜;改善宮腔粘連預(yù)后的臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 劉芳;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植聯(lián)合雌激素治療宮腔粘連的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

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1 王改;建立機(jī)械損傷大鼠宮腔粘連模型及雌激素預(yù)防粘連的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 曹興鳳;機(jī)械刮宮法建立比格犬宮腔粘連模型的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

3 喬琳;大劑量雌激素聯(lián)合IUD、Interceed治療中重度宮腔粘連的臨床效果觀察[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

4 關(guān)碩;小鼠子宮內(nèi)膜損傷后修復(fù)的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

5 呂一帆;胚胎干細(xì)胞在內(nèi)膜損傷小鼠宮腔內(nèi)移植的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2807368