【摘要】：研究目的:子癇前期(Preeclampsia,PE)是一種嚴(yán)重威脅孕產(chǎn)婦和胎兒健康的重要產(chǎn)科疾病,主要特征為妊娠20周出現(xiàn)高血壓(舒張壓=90 mm Hg)和蛋白尿(尿液中蛋白=300 mg/24 h);其發(fā)病率為2%-8%,是全球產(chǎn)婦死亡的主要原因之一。近年研究顯示,子宮螺旋動脈重鑄障礙,包括絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲不足、胎盤著床過淺、血管重建障礙等,可引起胎兒胎盤缺氧,母體內(nèi)皮功能障礙,最終導(dǎo)致并促進(jìn)子癇前期的發(fā)生與發(fā)展。胎盤缺氧是子癇前期的重要環(huán)節(jié),然而目前對于胎盤因素對母體血管內(nèi)皮功能的影響及具體機(jī)制尚不清楚。本研究旨通過體外、體內(nèi)實驗,模擬子癇前期胎盤缺氧環(huán)境,研究母體血漿s Flt-1水平提高以及內(nèi)皮功能障礙發(fā)生的原因,并結(jié)合臨床樣本闡明子癇前期發(fā)病過程中血管內(nèi)皮損傷的分子機(jī)制。研究方法:1.正常氧(20%)及低氧(1%O2)條件下培養(yǎng)人絨毛膜癌細(xì)胞JEG-3,收集上清,孵育人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC),用流式細(xì)胞術(shù)以及酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測HUVEC細(xì)胞上清中內(nèi)皮來源微粒(EMPs)以及血管內(nèi)皮生長因子受體1(Fms-Like Tyrosine kinase 1,Flt-1)的含量。2.基因本體(Gene Ontology,Go)分析正常氧及缺氧JEG-3細(xì)胞上清中的差異蛋白。3.用實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)、蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blotting)的方法檢測HUVEC細(xì)胞在HMGB1刺激后Flt-1、s Flt-1在m RNA以及蛋白水平的表達(dá)。4.用重組HMGB1尾靜脈注射妊娠18.5天及未孕小鼠,1.5小時后取血漿,并用流式細(xì)胞儀檢測血漿中微�？倲�(shù)及內(nèi)皮來源的微粒數(shù)。5.收集正常妊娠及子癇前期婦女血漿,用ELISA方法檢測血漿中s Flt-1。6.用流式檢測正常未孕、正常妊娠及子癇前期婦女血漿中的總微粒,并檢測內(nèi)皮來源的Flt-1+微粒的數(shù)量。研究結(jié)果:1.與正常JEG-3上清組比較,缺氧JEG-3上清顯著提高HUVEC上清中的EMPs以及Flt-1含量;比較微粒去除前后的細(xì)胞上清Flt-1含量,發(fā)現(xiàn)上清中增加的Flt-1有部分來源于微粒。2.GO分析正常氧及缺氧JEG-3細(xì)胞上清中的差異蛋白發(fā)現(xiàn),這些差異蛋白的功能主要集中在免疫反應(yīng)、氨基酸代謝、囊泡運(yùn)輸?shù)确矫妗?.HMGB1刺激HUVEC細(xì)胞能顯著提高上清中的EMPs以及Flt-1;4.HMGB1能夠在m RNA、蛋白水平提升HUVEC中Flt-1和s Flt-1的表達(dá);5.靜脈注射重組HMGB1升高妊娠小鼠血漿中總微粒及內(nèi)皮來源微粒數(shù);6.與正常妊娠婦女比較,子癇前期婦女血漿中Flt-1顯著升高;7.與正常妊娠婦女比較,子癇前期婦女血漿中總微粒數(shù)以及內(nèi)皮來源的表達(dá)FLT-1(CD31+Flt-1+)的微粒都顯著升高。結(jié)論:我們發(fā)現(xiàn)缺氧滋養(yǎng)細(xì)胞釋放的HMGB1能夠刺激內(nèi)皮細(xì)胞釋放微粒,提高內(nèi)皮細(xì)胞中Flt-1以及s Flt-1的表達(dá);妊娠小鼠靜脈被注射HMGB1后,其血漿中微�？倲�(shù)及內(nèi)皮來源的微粒數(shù)量顯著提升;子癇前期患者血漿中Flt-1含量、微粒數(shù)量以及Flt-1+微粒顯著高于正常妊娠女性�？傊�,我們的研究提示胎盤缺氧,滋養(yǎng)細(xì)胞會產(chǎn)生s Flt-1以及HMGB1等物質(zhì),損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞,參與子癇前期的發(fā)生。因此,我們提出了子癇前期患者內(nèi)皮紊亂的新機(jī)制,可為子癇前期早期診斷以及治療提供新思路。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R714.244
【圖文】：

養(yǎng)基 Opti 為陰性對照，TNF-a (100 ng/mL)為陽elial cell derived microparticles from HUVECs trefrom normoxic and hypoxic JEG-3 cellsOpti-MEM medium (Opti) represents the negativerepresents the positive control. n=3 per grouEG-3 上清誘導(dǎo) HUVEC 細(xì)胞產(chǎn)生可溶性 Flt-1（分泌物對于內(nèi)皮細(xì)胞的影響，我們用缺氧 JE無血清培養(yǎng)基 Opti 培養(yǎng)，24 小時后檢測上清2）相較于正常培養(yǎng)的 HUVEC 上清，缺氧上清量明顯提升（P 值<0.01）。

2. 缺氧 JEG3 上清刺激 HUVEC 細(xì)胞分泌 soluble Flt-1 in the supernatant of HUVECs asupernatant incubated.-3 上清誘導(dǎo) HUVEC 細(xì)胞產(chǎn)生可溶性 Flt-1 部示血漿中的 sFLT-1 有部分來自于胎盤來源后 HUVEC 細(xì)胞上清中的 sFlt-1 增加是否集缺氧 JEG3 上清孵育后的 HUVEC 細(xì)胞上UVEC 上清中的 Flt-1 含量。結(jié)果見圖 3，

17圖 3 缺氧 JEG3 上清刺激 HUVEC 細(xì)胞分ed soluble Flt-1protein in the supernatant ofJEG-3 supernatant incubated.

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本文編號：2799239