【摘要】：第一部分S100A4、E-cadherin和Vimentin在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)相關(guān)性研究目的:探究S100A4、E-cadherin和Vimentin蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的定位及相關(guān)性;探索S100A4對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞E-cadherin和Vimentin表達(dá)的影響。方法:運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法(IHC)分析15例正常子宮內(nèi)膜及50例子宮內(nèi)膜癌組織中S100A4、E-cadherin和Vimentin蛋白的表達(dá);構(gòu)建S100A4靶向性小干擾RNA沉默S100A4表達(dá),采用免疫印跡(Western blotting)及免疫熒光(IF)檢測(cè)細(xì)胞中E-cadherin和Vimentin表達(dá)及細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果:1.S100A4和Vimentin蛋白在子宮內(nèi)膜癌腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)主要定位于胞漿和胞核部分,兩者表達(dá)呈顯著正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=0.6862,P0.0001);E-cadherin表達(dá)主要定位于腺上皮胞膜及胞漿部分,其與S100A4的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=-0.5349,P0.0001)。2.下調(diào)子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細(xì)胞中S100A4的表達(dá),細(xì)胞極性消失,形態(tài)向上皮表型轉(zhuǎn)變,Western blotting及IF結(jié)果顯示細(xì)胞內(nèi)E-cadherin蛋白水平上升,Vimentin蛋白水平下降。結(jié)論:前期研究已證實(shí)S100A4能促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力,本研究結(jié)果表明S100A4在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與E-cadherin和Vimentin分別呈負(fù)相關(guān)及正相關(guān),且能調(diào)控兩者的表達(dá),提示S100A4可能通過上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的惡性進(jìn)展。第二部分ERRγ在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及其對(duì)S100A4的調(diào)控機(jī)制研究目的:探討ERRγ在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及其與S100A4表達(dá)的相關(guān)性;研究ERRγ對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞S100A4表達(dá)的調(diào)控作用及調(diào)控機(jī)制。方法:采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)分析20例正常子宮內(nèi)膜及20例子宮內(nèi)膜癌組織中ERRγ和S100A4的m RNA水平;免疫組化分析ERRγ和S100A4在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)定位;構(gòu)建ERRγ慢病毒過表達(dá)載體及小發(fā)夾干擾RNA,分別上、下調(diào)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中ERRγ的表達(dá),Western blotting及qRT-PCR檢測(cè)S100A4和E-cadherin表達(dá)變化;雙熒光素酶報(bào)告分析ERRγ對(duì)S100A4基因啟動(dòng)子的激活作用。結(jié)果:1.ERRγ在子宮內(nèi)膜癌組織中的m RNA及蛋白水平均顯著高于正常內(nèi)膜組織(P=0.0175),ERRγ與S100A4在子宮內(nèi)膜癌中的轉(zhuǎn)錄水平呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=0.557,P=0.01)。2.上調(diào)子宮內(nèi)膜癌HEC-1A及AN3CA細(xì)胞中ERRγ的表達(dá),S100A4表達(dá)上調(diào),E-cadherin表達(dá)下調(diào);相反,下調(diào)子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細(xì)胞中ERRγ表達(dá),S100A4表達(dá)下調(diào),E-cadherin表達(dá)上調(diào)。3.S100A4啟動(dòng)子區(qū)368-377bp、639-648bp和731-740bp位點(diǎn)均是預(yù)測(cè)的ERRγ可能的結(jié)合區(qū)域,熒光素酶報(bào)告分析結(jié)果顯示S100A4基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游656-784bp區(qū)是ERRγ調(diào)控S100A4轉(zhuǎn)錄活性的主要區(qū)域,上調(diào)ERRγ可增強(qiáng)S100A4啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)論:ERRγ在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)上調(diào)并與S100A4的表達(dá)正相關(guān),且ERRγ可激活S100A4基因啟動(dòng)子促進(jìn)其表達(dá),提示ERRγ可能是子宮內(nèi)膜癌中調(diào)控S100A4表達(dá)的重要因素,但ERRγ能否通過影響S100A4的表達(dá)影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)功能還有待進(jìn)一步闡明。第三部分S100A4介導(dǎo)ERRγ調(diào)控的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞體外侵襲、遷移及在體腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移能力的研究目的:研究ERRγ通過調(diào)控S100A4的表達(dá)引起的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞遷移侵襲及在體腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移能力變化。方法:運(yùn)用Transwell小室實(shí)驗(yàn)分析上、下調(diào)ERRγ表達(dá)及回補(bǔ)S100A4表達(dá)后子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞遷移、侵襲能力的變化。選用4-6周齡雌性BALB/c裸鼠,右肩甲下接種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞,構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤模型,腫瘤形成后游標(biāo)卡尺每七天測(cè)量并記錄腫瘤體積,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線,于接種后42天處死裸鼠,取下瘤體后稱重,并行免疫組織化學(xué)檢測(cè)ERRγ及S100A4蛋白的表達(dá)。構(gòu)建裸鼠尾靜脈注射皮下移植模型,于接種后42天處死裸鼠,取出裸鼠肺及肝組織,大體觀察及HE染色分析轉(zhuǎn)移瘤數(shù)量。結(jié)果:1.上調(diào)子宮內(nèi)膜癌HEC-1A和AN3CA細(xì)胞中的ERRγ表達(dá)后細(xì)胞遷移、侵襲能力增強(qiáng),同時(shí)沉默S100A4的表達(dá),細(xì)胞的遷移、侵襲能力下降;相反,下調(diào)ERRγ在HEC-1B細(xì)胞中的表達(dá),細(xì)胞遷移、侵襲能力下降,同時(shí)過表達(dá)S100A4,細(xì)胞的侵襲、遷移能力得到回復(fù)。2.過表達(dá)ERRγ組裸鼠皮下移植瘤瘤體生長(zhǎng)速度高于對(duì)照組,ERRγ穩(wěn)定表達(dá)組第42天時(shí)取出的瘤體重量也顯著高于對(duì)照組(1.22±0.53g vs 0.27±0.15g,P0.01);IHC結(jié)果顯示,ERRγ穩(wěn)定表達(dá)組S100A4水平高于對(duì)照組。3.尾靜脈注射轉(zhuǎn)移瘤模型結(jié)果顯示,過表達(dá)ERRγ組裸鼠肺組織中轉(zhuǎn)移瘤數(shù)量顯著高于對(duì)照組(P=0.0109)。結(jié)論:ERRγ可能主要通過S100A4途徑影響子宮內(nèi)膜癌遷移、侵襲及在體腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33
【圖文】：

圖 1-1. E-cadherin、Vimentin 和 S100A4 在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)定位。(A-D)S100A4 在正常子宮內(nèi)膜、高分化子宮內(nèi)膜癌（G1）、中分化子宮內(nèi)膜癌（G2）、低分化子宮內(nèi)膜癌（G3）組織中的表達(dá)。（E-H）E-cadherin在正常內(nèi)膜及不同病理分級(jí)子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)。（I-L）E-cadherin在正常內(nèi)膜及不同病理分級(jí)子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)。（×200 倍）

圖 1-1. E-cadherin、Vimentin 和 S100A4 在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)定位。S100A4 在正常子宮內(nèi)膜、高分化子宮內(nèi)膜癌（G1）、中分化子宮內(nèi)膜癌（G2）分化子宮內(nèi)膜癌（G3）組織中的表達(dá)。（E-H）E-cadherin在正常內(nèi)膜及不同病級(jí)子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)。（I-L）E-cadherin在正常內(nèi)膜及不同病理分級(jí)子宮癌組織中的表達(dá)。（×200 倍）

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文2. 下調(diào) S100A4 對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 E-cadherin 和 Vimentin 表達(dá)的影響運(yùn)用 S100A4 干擾質(zhì)粒下調(diào)子宮內(nèi)膜癌 HEC-1B 細(xì)胞中 S100A4 表達(dá)，結(jié)果倒置相差顯微鏡及運(yùn)用免疫熒光顯示細(xì)胞骨架均提示 HEC-1B 細(xì)胞失去細(xì)胞極性，梭形形態(tài)向上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變，細(xì)胞的彌散能力受到抑制（圖 1-3 A,B）。此外，western-blot 及免疫熒光分析下調(diào) S100A4 對(duì) E-cadherin 及 Vimentin 表達(dá)的影響，結(jié)果下調(diào) S100A4 可顯著抑制 HEC-1B 細(xì)胞 Vimentin 的表達(dá)，而 E-cadherin的表達(dá)上調(diào)（圖 1-3C-D）。

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本文編號(hào)：2789017