本文關(guān)鍵詞：miR-375對宮頸癌細胞生物學特性的影響及其對IGF-1R基因調(diào)控的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:micro-RNA異常表達是導致宮頸癌的重要病因。課題組前期研究發(fā)現(xiàn):與正常宮頸組織相比,宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌組織中mi R-375的表達水平明顯下調(diào)。本實驗旨在通過對宮頸癌細胞及正常上皮細胞mi R-375表達水平的檢測,驗證前期實驗結(jié)果;通過干擾宮頸癌細胞mi R-375的表達,深入研究mi R-375對宮頸癌細胞增殖、凋亡及遷移能力的影響,初步判斷mi R-375下游調(diào)控的靶基因,從而闡明mi R-375在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中作用的可能分子機制。方法:(1)常規(guī)培養(yǎng)宮頸癌細胞株(Caski、C33A)及正常上皮細胞株(293T),并利用RT-PCR技術(shù)檢測三種細胞中mi R-375的表達水平;(2)利用轉(zhuǎn)染試劑si RNA MateTM將mi R-375模擬物或mi R-375抑制物片段轉(zhuǎn)染入HPV16陽性的宮頸癌細胞Caski中,使mi R-375過表達或抑制表達,利用RT-PCR技術(shù)驗證mi R-375的表達水平的變化;(3)利用CCK8、劃痕實驗及凋亡實驗檢測過表達或抑制表達mi R-375對宮頸癌細胞Caski增殖、遷移及凋亡等生物學行為的影響;(4)利用Western blot技術(shù)檢測Caski細胞轉(zhuǎn)染后下游靶基因IGF-1R表達水平的變化。結(jié)果:(1)293T細胞、Caski細胞、C33A細胞中mi R-375的相對表達量為分別為0.885±0.034,0.050±0.004,0.080±0.003。與正常上皮細胞相比,宮頸癌細胞中mi R-375的表達水平的表達均明顯下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);(2)Caski細胞轉(zhuǎn)染后,mi R-375模擬物組中mi R-375的表達增加了約7.76倍,細胞增殖及遷移能力明顯降低,細胞凋亡明顯增加,IGF-1R蛋白表達降低至24.73%,與相應(yīng)的陰性對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);相反,mi R-375抑制物的轉(zhuǎn)染使mi R-375的表達降低至14.39%,細胞增殖及遷移能力均明顯增加,細胞凋亡均明顯減少,IGF-1R蛋白表達增加了2.29倍,與相應(yīng)的陰性對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。空白對照組與各陰性對照組之間差異均沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:(1)與正常上皮細胞株相比,mi R-375的表達在宮頸癌Caski、C33A細胞中明顯下調(diào),說明mi R-375在宮頸癌中發(fā)揮抑癌作用;(2)在Caski細胞中,過表達mi R-375能夠抑制細胞的增殖及遷移,促進細胞的凋亡,并可降低IGF-1R蛋白的表達;而mi R-375的表達減少能夠促進細胞的增殖及遷移,抑制細胞凋亡,并增加IGF-1R蛋白的表達。說明mi R-375對宮頸癌細胞增殖、凋亡及遷移等生物學行為有一定的影響,并且可能是通過調(diào)控IGF-1R蛋白表達來發(fā)揮作用的。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 microRNA 細胞轉(zhuǎn)染 IGF-1R 細胞凋亡
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 常用縮寫詞中英文對照表10-11
• 前言11-13
• 第一部分MIR-375 在宮頸癌細胞及正常上皮細胞中的表達13-24
• 1 材料與方法13-19
• 1.1 細胞來源13
• 1.2 主要試劑13
• 1.3 主要儀器13-14
• 1.4 主要溶液的配制14
• 1.5 實驗前準備14
• 1.6 細胞培養(yǎng)14-16
• 1.7 細胞總RNA的提取16
• 1.8 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)16-17
• 1.9 實時熒光定量PCR反應(yīng)擴增目的片段17-18
• 1.10 統(tǒng)計學方法18-19
• 2 結(jié)果19-21
• 2.1 細胞總RNA提取質(zhì)量19
• 2.2 實時熒光定量PCR方法檢測宮頸癌細胞及正常上皮細胞中的MIR-375 的表達水平19-21
• 3 討論21-23
• 4 結(jié)論23-24
• 第二部分MIR-375 對宮頸癌細胞生物學特性的影響及其對IGF-1R靶基因調(diào)控的初步研究24-46
• 1 材料與方法24-34
• 1.1 細胞來源24
• 1.2 主要試劑及耗材24-25
• 1.3 主要儀器25-26
• 1.4 主要溶液的配制26
• 1.5 細胞培養(yǎng)26-27
• 1.6 細胞轉(zhuǎn)染27-29
• 1.7 轉(zhuǎn)染效率的檢測29
• 1.8 實時熒光定量PCR檢測29
• 1.9 CCK-8 法檢測細胞增殖情況29-30
• 1.10 細胞遷移實驗30
• 1.11 ANNEXIN V-FITC&PI凋亡試劑盒檢測細胞凋亡30-31
• 1.12 WESTERN-BLOT技術(shù)檢測IGF-1R的表達水平31-33
• 1.13 統(tǒng)計學處理33-34
• 2 結(jié)果34-41
• 2.1 細胞轉(zhuǎn)染效率檢測34
• 2.2 實時熒光定量PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染MIR-375 模擬物、MIR-375 抑制物后MIR-375的表達水平34-35
• 2.3 CCK-8 法檢測MIR-375 過表達或低表達對宮頸癌細胞增殖的影響35-36
• 2.4 流式細胞術(shù)檢測MIR-375 過表達或低表達對宮頸癌細胞凋亡的影響36-38
• 2.5 劃痕實驗檢測MIR-375 過表達或抑制表達對宮頸癌細胞遷移能力的影響38-39
• 2.6 WESTERN BLOT方法檢測MIR-375 過表達或抑制表達對IGF-1R蛋白表達的影響39-41
• 3 討論41-45
• 4 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-51
• 綜述51-60
• 參考文獻57-60
• 致謝60-61
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果61-62
• 個人簡歷62

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 梁華;李艷;洛若愚;申復(fù)進;;MicroRNA-215 Is a Potential Prognostic Marker for Cervical Cancer[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2014年02期

2 伍嬌嬌;馮定慶;田園;徐漢杰;李兵;凌斌;;組蛋白乙�；揎椪{(diào)控RAR-β_2表達與宮頸病變的相關(guān)性[J];中國腫瘤臨床;2014年05期

  本文關(guān)鍵詞：miR-375對宮頸癌細胞生物學特性的影響及其對IGF-1R基因調(diào)控的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：278767