【摘要】：目的:研究過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferation-activated receptors,PPARs)三種不同亞型PPARα、PPARβ和PPARγ在多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)特點(diǎn),分析PPARs基因與PCOS疾病發(fā)生的關(guān)系。方法:根據(jù)2011年中國(guó)多囊卵巢綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn),收集2017年1月到2018年4月在大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院婦產(chǎn)科門(mén)診初診的21例患多囊卵巢綜合征的病例為PCOS組。以我院體檢健康的月經(jīng)周期規(guī)律、性激素水平正常、婦科彩超檢查未見(jiàn)異常、且無(wú)患代謝性疾病的30例非PCOS女性為對(duì)照組。收集研究對(duì)象的一般資料:身高、體重、痤瘡、多毛情況等。采集所有研究對(duì)象早卵泡期或閉經(jīng)狀態(tài)下空腹靜脈血。比較研究對(duì)象的雄激素(testosterone,T)、促黃體生成素(luteinizing hormo,LH)、促卵泡刺激素(follicle stimulating hormo,FSH)、雌激素(Estradiol,E2)、空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)及空腹胰島素(fasting insulin,FINS)水平。采用梯度密度離心法提取外周血單個(gè)核細(xì)胞,利用SYBRGreen II實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中PPARs基因m RNA的表達(dá)量,通過(guò)Ct值法比較兩組PPARs(PPARα、PPARβ和PPARγ)基因的表達(dá)水平。分析PCOS組患者空腹血糖、空腹胰島素、雄激素、促黃體生成素和外周血單個(gè)核細(xì)胞PPARs(PPARα、PPARβ和PPARγ)之間的相關(guān)性。結(jié)果:1.PCOS組入選年齡21~35歲,平均年齡27.47±3.62歲,月經(jīng)稀少15例(71.4%),閉經(jīng)2例(9.5%),不規(guī)則子宮出血4例(19%),多毛7例(33%),痤瘡12例(57%),彩超提示多囊卵巢4例(19%)。對(duì)照組入選年齡23~35歲,平均年齡28.53±3.06歲,月經(jīng)周期均正常。PCOS組的年齡、體重指數(shù)與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P0.05)。2.PCOS組的雄激素及促黃體生成素水平均明顯高于對(duì)照組(P0.05)。PCOS組的雌激素、促卵泡刺激素與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P0.05)。3.PCOS組的空腹血糖、空腹胰島素與對(duì)照組相比明顯升高(P0.05)。4.PCOS組的外周血單個(gè)核細(xì)胞中PPARα、PPARβ、PPARγm RNA表達(dá)的水平均顯著低于對(duì)照組(P0.05)。5.根據(jù)相關(guān)分析結(jié)果顯示,PCOS組INS(r=-0.662)、T(r=-0.467)與外周血單個(gè)核細(xì)胞PPARγm RNA相對(duì)表達(dá)量均呈顯著負(fù)相關(guān)(P0.05)。PCOS組FPG、INS、T、LH與PPARα、PPARβm RNA相對(duì)表達(dá)量均無(wú)顯著相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論:1.外周血單個(gè)核細(xì)胞PPARα、PPARβ和PPARγm RNA的表達(dá)異�？赡芘cPCOS疾病的發(fā)生有關(guān)。2.PCOS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞PPARγm RNA表達(dá)水平與雄激素、空腹胰島素呈負(fù)相關(guān),外周血單個(gè)核細(xì)胞PPARγ表達(dá)下調(diào)可能促進(jìn)多囊卵巢綜合征患者高胰島素血癥和高雄激素血癥的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R711.75
【圖文】：

圖 1：實(shí)時(shí)熒光 PCR 原理研究資料的收集和血液檢測(cè)（1）獲取研究對(duì)象的一般資料：①姓名、年齡、身高、體重、血壓、月經(jīng)、痤瘡及體毛分布情況。②了解既往有無(wú)糖尿病、高血脂、高血壓、心腦血腎功能不全、炎癥性疾病，有無(wú)甲狀腺疾病、高泌乳素血癥等其他內(nèi)分泌疾科疾病病史、腫瘤病史、手術(shù)史、家族史、個(gè)人用藥情況。（2）外周靜脈全血的采集與處理：研究對(duì)象在月經(jīng)周期第 2-5 天采血，若經(jīng)患者可任意一天清晨空腹采血 3ml，在 EDTA 抗凝真空塑料管上標(biāo)明研究對(duì)血標(biāo)本研究編號(hào)，采血后立即輕柔顛倒,置于 4 冰箱內(nèi)保存。（3）激素及生化指標(biāo)的測(cè)定：采用化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)受試者空腹胰島素、雄、促黃體生成素、促卵泡刺激素、雌激素，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定空腹血由大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)）。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 實(shí)驗(yàn)步驟

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文上，1800rpm 離心 30min。(4)離心后管內(nèi)分為三層如（圖 2 右圖）所示，上稀釋的血漿，下層為粒細(xì)胞和紅細(xì)胞，中間絮狀層即為實(shí)驗(yàn)所需的單個(gè)核細(xì)(5)用吸管小心吸出分離液上層（包含淋巴細(xì)胞的細(xì)胞層）0.5cm 以上的上清分棄去。(6)用吸管小心吸取分離液層及淋巴細(xì)胞層至于無(wú)菌無(wú)酶 1.5mlEP 管(7)14000rpm，離心 35min，棄去上清，獲得白色固體細(xì)胞沉淀。(8)加入無(wú)菌鹽水，清洗 2 遍，直至清洗液無(wú)雜質(zhì)。(9)棄去上清液，加入 500ul 細(xì)胞裂解吹打混勻，直至無(wú)沉淀后靜置 5min，放至-80 冰箱內(nèi)保存。

求分析本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠[25]。（圖3：圖A1、B1、C1、D1分別為PCOS組和對(duì)照組β -actinmRNA、 PPAR mRNA、PPARβ mRNA、PPARγ mRNA基因擴(kuò)增曲線變化圖）。（3）各個(gè)基因融解曲線結(jié)果分析：融解曲線呈單峰，峰的寬度較小，沒(méi)有非特異性曲線，說(shuō)明基因擴(kuò)增產(chǎn)物特異性好，融解溫度（Tm）的參考范圍>80[25]。β -actin mRNA、PPAR mRNA、PPARβ mRNA、PPARγ mRNA的Tm值分別為：87 、85、83 、89 。（圖3：圖A2、B2、C2、D2分別為PCOS組和對(duì)照組β -actin mRNA、PPAR mRNA、PPARβ mRNA、PPARγ mRNA基因融解曲線變化圖）。圖3：圖3：1-8:圖A1、A2分別為PCOS組和對(duì)照組β-actin mRNA基因擴(kuò)增曲線及融解曲線變化圖；圖B1、B2分別為PPAR mRNA基因擴(kuò)增曲線及融解曲線變化圖；圖C1、C2分別為PPARβ mRNA基因擴(kuò)增曲線及融解曲線變化圖；圖D1、D2分別為PPARγ mRNA基因擴(kuò)增曲線及融解曲線變化圖。五、統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS22．0進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ X±S）表示，兩樣本間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，變量之間的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析法，以P<0.05時(shí)視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號(hào)：2786314