【摘要】：目的:研究過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferation-activated receptors,PPARs)三種不同亞型PPARα、PPARβ和PPARγ在多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者外周血單個核細胞中的表達特點,分析PPARs基因與PCOS疾病發(fā)生的關(guān)系。方法:根據(jù)2011年中國多囊卵巢綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn),收集2017年1月到2018年4月在大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院婦產(chǎn)科門診初診的21例患多囊卵巢綜合征的病例為PCOS組。以我院體檢健康的月經(jīng)周期規(guī)律、性激素水平正常、婦科彩超檢查未見異常、且無患代謝性疾病的30例非PCOS女性為對照組。收集研究對象的一般資料:身高、體重、痤瘡、多毛情況等。采集所有研究對象早卵泡期或閉經(jīng)狀態(tài)下空腹靜脈血。比較研究對象的雄激素(testosterone,T)、促黃體生成素(luteinizing hormo,LH)、促卵泡刺激素(follicle stimulating hormo,FSH)、雌激素(Estradiol,E2)、空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)及空腹胰島素(fasting insulin,FINS)水平。采用梯度密度離心法提取外周血單個核細胞,利用SYBRGreen II實時熒光定量PCR檢測外周血單個核細胞中PPARs基因m RNA的表達量,通過Ct值法比較兩組PPARs(PPARα、PPARβ和PPARγ)基因的表達水平。分析PCOS組患者空腹血糖、空腹胰島素、雄激素、促黃體生成素和外周血單個核細胞PPARs(PPARα、PPARβ和PPARγ)之間的相關(guān)性。結(jié)果:1.PCOS組入選年齡21~35歲,平均年齡27.47±3.62歲,月經(jīng)稀少15例(71.4%),閉經(jīng)2例(9.5%),不規(guī)則子宮出血4例(19%),多毛7例(33%),痤瘡12例(57%),彩超提示多囊卵巢4例(19%)。對照組入選年齡23~35歲,平均年齡28.53±3.06歲,月經(jīng)周期均正常。PCOS組的年齡、體重指數(shù)與對照組相比無顯著性差異(P0.05)。2.PCOS組的雄激素及促黃體生成素水平均明顯高于對照組(P0.05)。PCOS組的雌激素、促卵泡刺激素與對照組相比無顯著性差異(P0.05)。3.PCOS組的空腹血糖、空腹胰島素與對照組相比明顯升高(P0.05)。4.PCOS組的外周血單個核細胞中PPARα、PPARβ、PPARγm RNA表達的水平均顯著低于對照組(P0.05)。5.根據(jù)相關(guān)分析結(jié)果顯示,PCOS組INS(r=-0.662)、T(r=-0.467)與外周血單個核細胞PPARγm RNA相對表達量均呈顯著負(fù)相關(guān)(P0.05)。PCOS組FPG、INS、T、LH與PPARα、PPARβm RNA相對表達量均無顯著相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論:1.外周血單個核細胞PPARα、PPARβ和PPARγm RNA的表達異�？赡芘cPCOS疾病的發(fā)生有關(guān)。2.PCOS患者外周血單個核細胞PPARγm RNA表達水平與雄激素、空腹胰島素呈負(fù)相關(guān),外周血單個核細胞PPARγ表達下調(diào)可能促進多囊卵巢綜合征患者高胰島素血癥和高雄激素血癥的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R711.75
【圖文】：

圖 1：實時熒光 PCR 原理研究資料的收集和血液檢測（1）獲取研究對象的一般資料：①姓名、年齡、身高、體重、血壓、月經(jīng)、痤瘡及體毛分布情況。②了解既往有無糖尿病、高血脂、高血壓、心腦血腎功能不全、炎癥性疾病，有無甲狀腺疾病、高泌乳素血癥等其他內(nèi)分泌疾科疾病病史、腫瘤病史、手術(shù)史、家族史、個人用藥情況。（2）外周靜脈全血的采集與處理：研究對象在月經(jīng)周期第 2-5 天采血，若經(jīng)患者可任意一天清晨空腹采血 3ml，在 EDTA 抗凝真空塑料管上標(biāo)明研究對血標(biāo)本研究編號，采血后立即輕柔顛倒,置于 4 冰箱內(nèi)保存。（3）激素及生化指標(biāo)的測定：采用化學(xué)發(fā)光法檢驗受試者空腹胰島素、雄、促黃體生成素、促卵泡刺激素、雌激素，用全自動生化分析儀測定空腹血由大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗科檢測）。實時熒光定量 PCR 實驗步驟

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文上，1800rpm 離心 30min。(4)離心后管內(nèi)分為三層如（圖 2 右圖）所示，上稀釋的血漿，下層為粒細胞和紅細胞，中間絮狀層即為實驗所需的單個核細(5)用吸管小心吸出分離液上層（包含淋巴細胞的細胞層）0.5cm 以上的上清分棄去。(6)用吸管小心吸取分離液層及淋巴細胞層至于無菌無酶 1.5mlEP 管(7)14000rpm，離心 35min，棄去上清，獲得白色固體細胞沉淀。(8)加入無菌鹽水，清洗 2 遍，直至清洗液無雜質(zhì)。(9)棄去上清液，加入 500ul 細胞裂解吹打混勻，直至無沉淀后靜置 5min，放至-80 冰箱內(nèi)保存。

求分析本實驗結(jié)果可靠[25]。（圖3：圖A1、B1、C1、D1分別為PCOS組和對照組β -actinmRNA、 PPAR mRNA、PPARβ mRNA、PPARγ mRNA基因擴增曲線變化圖）。（3）各個基因融解曲線結(jié)果分析：融解曲線呈單峰，峰的寬度較小，沒有非特異性曲線，說明基因擴增產(chǎn)物特異性好，融解溫度（Tm）的參考范圍>80[25]。β -actin mRNA、PPAR mRNA、PPARβ mRNA、PPARγ mRNA的Tm值分別為：87 、85、83 、89 。（圖3：圖A2、B2、C2、D2分別為PCOS組和對照組β -actin mRNA、PPAR mRNA、PPARβ mRNA、PPARγ mRNA基因融解曲線變化圖）。圖3：圖3：1-8:圖A1、A2分別為PCOS組和對照組β-actin mRNA基因擴增曲線及融解曲線變化圖；圖B1、B2分別為PPAR mRNA基因擴增曲線及融解曲線變化圖；圖C1、C2分別為PPARβ mRNA基因擴增曲線及融解曲線變化圖；圖D1、D2分別為PPARγ mRNA基因擴增曲線及融解曲線變化圖。五、統(tǒng)計分析實驗數(shù)據(jù)使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS22．0進行分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ X±S）表示，兩樣本間比較采用獨立樣本t檢驗，變量之間的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析法，以P<0.05時視為有統(tǒng)計學(xué)意義。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 齊新宇;龐艷莉;喬杰;;多囊卵巢綜合征代謝異常的研究進展[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2016年09期

2 莊瑞春;向安玲;肖召安;;PPARγ在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用研究進展[J];安徽醫(yī)藥;2015年05期

3 崔琳琳;陳子江;;多囊卵巢綜合征的臨床診斷要點[J];中國計劃生育和婦產(chǎn)科;2014年06期

4 張秀紅;宣姣;亓志剛;;PPARα,γ和δ:胰島素抵抗治療的靶點[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2014年06期

5 胡衛(wèi)紅;陳琳;同軍;趙春艷;毛莎;喬杰;;PPARγ mRNA在卵巢顆粒細胞的表達調(diào)節(jié)及與多囊卵巢綜合征的相關(guān)性[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年06期

6 劉嘉茵;陳子江;;多囊卵巢綜合征診斷和治療中的爭議問題[J];國際生殖健康/計劃生育雜志;2011年05期

7 林金芳;;PCOS胰島素抵抗與胰島素增敏劑的應(yīng)用[J];實用婦產(chǎn)科雜志;2010年08期

8 陳子江;;重視多囊卵巢綜合征患者的遠期健康風(fēng)險[J];國際生殖健康/計劃生育雜志;2008年03期

9 陳子江;石玉華;郭萌;楊陽;趙躍然;游力;;大樣本中國人PCOS臨床特點分析[J];山東醫(yī)藥;2008年11期

10 王藹明,李美芝,喬杰,盧春華;多囊卵巢綜合征病人高雄激素血癥與高胰島素和高黃體生成素血癥關(guān)系的探討[J];海軍總醫(yī)院學(xué)報;2001年03期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 劉小蘭;PPARγ、M-CSF、CA125和HE4在卵巢漿液性上皮腫瘤中的表達及其臨床意義[D];蘇州大學(xué);2014年

本文編號：2786314