【摘要】：目的:探討化療藥物環(huán)磷酰胺(CTX)是否可以損傷小鼠卵巢并誘導(dǎo)卵巢形成纖維化,以及褪黑素是否具有保護卵巢功能并緩解環(huán)磷酰胺所誘導(dǎo)的小鼠卵巢纖維化的效應(yīng)。方法:按照分組(Vehicle組,n=6;Melatonin組,n=6;CTX組,n=6;CTX+Melatonin組,n=6)計劃性給與C57小鼠藥物處理后,通過稱量各組小鼠卵巢重量、處死前的小鼠陰道分泌物涂片及對HE染色的卵巢組織切片進行形態(tài)學(xué)觀察和卵泡計數(shù),同時檢測小鼠血清中的抗苗勒氏管激素(AMH)濃度來評估環(huán)磷酰胺對小鼠卵巢功能的損害效應(yīng)以及褪黑素是否具有保護卵巢功能的作用。另外,通過對小鼠卵巢組織切片進行天狼星紅染色以及纖連蛋白(Fibronectin)免疫組織化學(xué)染色,以此來判斷環(huán)磷酰胺是否誘導(dǎo)了小鼠卵巢形成纖維化,且褪黑素是否具有緩解由化療藥物環(huán)磷酰胺所誘導(dǎo)的卵巢纖維化的作用。結(jié)果:通過對小鼠的陰道涂片進行鏡下觀察發(fā)現(xiàn),與對照Vehicle組相比,化療藥物環(huán)磷酰胺可以明顯使小鼠的動情周期發(fā)生了一定比例的紊亂(67%,P=0.014)。將小鼠處死后稱量各組小鼠的卵巢重量,對照Vehicle組的小鼠卵巢重量為24.66±0.39mg,而注射了環(huán)磷酰胺后的小鼠卵巢重量明顯小于對照組小鼠卵巢的重量(18.15±0.49mg,P0.001)。通過觀察小鼠卵巢組織切片的HE染色,環(huán)磷酰胺組小鼠的卵巢形態(tài)發(fā)生了一定程度的萎縮,且肉眼可見健康卵泡明顯減少。卵泡計數(shù)發(fā)現(xiàn),與對照Vehicle組相比,CTX組小鼠卵巢切片中各階段正常卵泡(包括始基卵泡、初級卵泡、次級卵泡和竇卵泡)的數(shù)量呈現(xiàn)大幅度減少(P值分別為0.001、0.001、0.001及0.001),閉鎖卵泡的數(shù)量則顯著增加(P0.001),并且相較于對照Vehicle組小鼠血清AMH濃度(1.46±0.1 ng/ml),CTX組小鼠的血清中AMH濃度也出現(xiàn)了顯著下降(1.00±0.12ng/ml,P=0.012)。另外通過鏡下觀察天狼星紅染色及纖連蛋白免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn),環(huán)磷酰胺可以使小鼠卵巢產(chǎn)生大量的膠原纖維。與對照Vehicle組相比,除去卵泡液等正常高表達纖連蛋白的組織部分,其余卵巢組織中纖連蛋白的表達明顯增加,說明環(huán)磷酰胺可以誘導(dǎo)小鼠卵巢形成纖維化。而在加入了褪黑素處理后則可以明顯減輕這些化療損傷,表現(xiàn)為:與CTX組相比,CTX+MEL組的小鼠卵巢重量出現(xiàn)了顯著性的增加(21.88±0.75mg,P0.001),并基本恢復(fù)到對照組小鼠的卵巢重量水平;小鼠紊亂動情周期所占比例出現(xiàn)了一定的下降趨勢(33.3%,P=0.079);小鼠卵巢形態(tài)較大程度上得到了恢復(fù),同時各個階段的健康卵泡的數(shù)量(包括始基卵泡、初級卵泡、次級卵泡和竇卵泡)相較于化療藥物CTX組小鼠有了明顯的增加(P值分別為0.001、0.003、0.001及0.001),閉鎖卵泡數(shù)量也顯著減少(P=0.016)。與此同時,小鼠血清中AMH含量也出現(xiàn)了一定程度的升高(1.18±0.02 ng/ml,P=0.094)。另外通過對比天狼星紅染色及纖連蛋白免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn),在注射了褪黑素后,小鼠卵巢總膠原纖維的含量顯著減少(P0.001)并且纖連蛋白的表達也出現(xiàn)了下降,說明小鼠的卵巢纖維化程度得到了有效緩解。結(jié)論:環(huán)磷酰胺可以誘導(dǎo)C57小鼠卵巢產(chǎn)生纖維化,使小鼠卵巢功能受到明顯損傷。而褪黑素可以有效緩解化療藥物環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的小鼠卵巢纖維化,使其較大程度上恢復(fù)卵巢功能,從而產(chǎn)生保護卵巢的效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R711.75
【圖文】：

17圖 1 環(huán)磷酰胺可以損傷小鼠卵巢功能。（A）為光鏡下 Vehicle 組與 CTX 組的小鼠卵巢組織切片 HE 染色鏡下觀察情況。（B）為 Vehicle 組與 CTX 組的小鼠動情周期比較結(jié)果。（C）為 Vehicle 組與 CTX 組的小鼠卵巢卵泡計數(shù)結(jié)果。（D）為 Vehicle 組與 CTX 組的小鼠血清 AMH 濃度比較結(jié)果。*代表 P<0.05

圖 2 環(huán)磷酰胺可使小鼠卵巢出現(xiàn)纖維化。（A）為光鏡下 Vehicle 組和 CTX 組小鼠卵巢組織切片的天狼星紅染色。（B）為半定量分析比較兩組小鼠卵巢組織所含總膠原纖維含量的結(jié)果。（C）為光鏡下 Vehicle 組及 CTX 組小鼠卵巢組織切片的纖連蛋白（Fibronectin）的免疫組織化學(xué)染色。*代表 P<0.05

19圖 3 褪黑素可以有效保護由環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的小鼠卵巢功能損傷。（A）為光鏡下實驗各組的小鼠卵巢組織切片 HE 染色觀察情況。（B）為實驗各組的小鼠動情周期比較結(jié)果。（C）為實驗各組的小鼠卵巢組織的卵泡計數(shù)結(jié)果。（D）為實驗各組的小鼠血清 AMH 濃度比較結(jié)果。*代表 P<0.05

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本文編號：2779089