【摘要】：背景與目的近年來,隨著生活節(jié)奏加快、工作壓力增加、環(huán)境污染惡化、飲食結(jié)構(gòu)改變等,不孕癥已成為全球性的公共健康問題。除女性排卵障礙及輸卵管功能障礙兩大不孕因素外,男性因素導(dǎo)致不育也越來越常見,并且許多研究表明男性精子數(shù)量和生育能力在不斷的下降。引起精子質(zhì)量下降的因素很多,其中包括有毒環(huán)境的暴露、精索靜脈曲張、物理及精神因素。隨著分子生物學(xué)及基因研究的不斷深入,一些學(xué)者進一步將目光投向了精子線粒體,有國外學(xué)者發(fā)現(xiàn)線粒體基因片段缺失與男性不育之間有著密切的關(guān)系。我們前期探討了精子線粒體基因MT-ATP6、MT-ND3、MT-ND6及MT-ND2等基因變異與體外完全受精失敗的相關(guān)性,但MT-CO1基因的變異情況我們尚不了解。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)近5年人精子線粒體CO1基因發(fā)生了較為明顯的變異,而且基因變異具有一定的規(guī)律性。因此,我們嘗試探討漢族人精子線粒體CO1基因變異是否影響男性精子質(zhì)量及與完全體外受精失敗的相關(guān)性。研究方法1樣本的收集1.1:收集2010-2018年就診于鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院生殖中心的343例IVF周期男性患者的精液進行回顧性分析。1.2:收集2018年9月-11月就診于鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院門診的19位產(chǎn)褥期女性志愿者,各取2ml外周靜脈血,門診收集8名兩周歲之內(nèi)的嬰幼兒外周靜脈血各1ml。1.3:征集6名男性志愿者取其精液、外周靜脈血及其親生母親外周靜脈血。1.4:收集5位男性不同年份(2012年及2018年)的精子進行研究對象的自身前后對照研究。1.5:于2018年9-11月在我生殖中心收集40余枚卵胞漿單精子注射過程中廢棄的未成熟卵子。2實驗方法2.1通過巢式PCR和DNA測序分析線粒體CO1基因的變異情況,檢測結(jié)果經(jīng)mitomap數(shù)據(jù)庫(www.mitomap.org)中記錄的人類劍橋序列(rCRS)進行比對,并記錄變異位點。2.2應(yīng)用Uniport datebase和Polyphen-2軟件對變異位點進行蛋白質(zhì)功能預(yù)測;swiss-model軟件同源建模預(yù)測蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)并通過TM-Align軟件計算野生型蛋白及突變型蛋白與數(shù)據(jù)庫中蛋白高級結(jié)構(gòu)之間的RMSD差值,評估SNP對蛋白空間結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的影響。2.3將343例精子樣本根據(jù)年份分組,觀察其線粒體CO1基因變異情況;評價人精子線粒體CO1基因變異是否影響男性精子質(zhì)量及與完全體外受精失敗的相關(guān)性。統(tǒng)計學(xué)方法計量資料應(yīng)用平均數(shù)±標準差表示,分類計數(shù)資料應(yīng)用數(shù)和百分比表示。計量資料用獨立樣本t檢驗分析,計數(shù)資料用卡方檢驗或Fisher精確檢驗分析。所有分析均采用雙側(cè)檢驗,P0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。所有樣本數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行計算。結(jié)果1.漢族精子線粒體測序共發(fā)現(xiàn)75個純合變異,66個雜合變異,其中新發(fā)現(xiàn)純合位點1個,新發(fā)現(xiàn)雜合位點11個。2.觀察精子線粒體CO1基因所有變異位點,我們發(fā)現(xiàn)自2014年起,精子線粒體CO1基因除了散在位點的變異以外,開始出現(xiàn)一組由G6023A、T6221C、C6242T、A6266C、A6299G、G6366A、G6383A、C6410T、C6452T、C6483T、T6512C、C6542T、C6569A、T6641C、C6935T、C6938T、A7146G、C7232T、C7256T和G7316A這20個固定位點組成的特異性的基因變異及C7028T位點的回復(fù)變異。我們在本文中將包含所有20個固定變異位點的線粒體CO1基因定義為變異型基因,20個位點均未發(fā)生變異的線粒體CO1基因定義為野生型基因。線粒體CO1變異型基因在血液樣本中均未檢測到。3.精子線粒體CO1變異型基因中G6366A和A7146G兩個位點變異為錯義變異,經(jīng)蛋白功能預(yù)測提示這兩處錯義變異對蛋白質(zhì)功能影響并不明顯。經(jīng)swiss-model軟件同源建模預(yù)測的蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu),結(jié)果發(fā)現(xiàn)野生型蛋白RMSD=0.1;變異型蛋白RMSD=1.24,提示變異型蛋白高級結(jié)構(gòu)比野生型蛋白高級結(jié)構(gòu)穩(wěn)定有所下降。4.精子密度在野生型基因組及變異型基因組之間無明顯差異,P0.05;精子活力(a+b級)在兩組間有差異,野生型基因組精子平均活力明顯高于變異型基因組,P0.05。5.精子線粒體CO1變異型基因與體外完全受精失敗無明顯相關(guān)性,P0.05。6.分析每一個精子線粒體CO1基因的每一個變異位點,我們發(fā)現(xiàn)2010至2013年,純合變異位點T5999C(0%vs 5.26%)、G6179A(0%vs 5.26%)、C7028T(87.64%vs 71.05%)和雜合變異位點A7241G(0%vs 5.26%)在正常受精組與完全受精失敗組之間有差異,P0.05;2014至2018年,純合變異位點G6383A(59.34%vs 38.89%)、C7028T(17.58%vs 47.22%)、C7232T(53.85%vs 33.33%)和雜合變異位點G6023A(38.46%vs 11.11%)、T6221C(38.46%vs 13.89)、C6242T(39.56%vs 13.89%)、A6299G(46.15%vs 13.89%)、G6366A(50.55%vs16.67%)、C6410T(39.56%vs 13.89%)、C6452T(37.36%vs 13.89%)、C6483T(38.46%vs 13.89%)、T6512C(54.95%vs 16.67%)、C6542T(45.05%vs 13.89%)、C6569A(40.66%vs 13.89%)、T6641C(31.87%vs 13.89%)、C6935T(43.96%vs16.67%)、C6938T(42.86%vs 13.89%)、C7028T(52.75%vs22.22%)、A7146G(34.07%vs13.89%)、C7232T(31.87%vs13.89%)、C7256T(58.24%vs16.67%)、G7316A(48.35%vs25%)在正常受精組與完全受精失敗組之間有差異,P0.05。結(jié)論近8年漢族人精子線粒體CO1基因出現(xiàn)了一組以G6023A等20個位點基因變異及C7028T位點的回復(fù)變異為特征的變異,我們將G6023A等20個位點同時發(fā)生變異的線粒體CO1基因定義為變異型基因,變異型基因編碼蛋白質(zhì)仍具有一定的生物學(xué)功能,但其空間結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性有所降低。精子線粒體CO1基因變異對精子密度無明顯影響,但可能是引起精子活力下降的原因之一。漢族人精子線粒體CO1基因變異對體外受精失敗的影響不是一成不變的,而是處于一個動態(tài)變化的過程中。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R714.8
【圖文】：

型（b）CO1 基因編碼蛋白模擬三維結(jié)構(gòu)圖；野）、野生型位點 7146A（e）、變異位點 7146G（男性精子、靜脈血和其母親靜脈血的 M男性中有 5 例精子線粒體基因 6023 位點發(fā)位點均為 G。檢測結(jié)果見表 3、波形圖見子精子、靜脈血和其母親靜脈血 MT-CO1 基因

10圖 2：男子精子、靜脈血及其母親靜脈血 6023 位點對比波形圖 2. 3 組樣本男方精子、靜脈血及其母親靜脈血的 6023 位點波形圖。1 號男性精子、靜及其母親靜脈血中 6023 位點均為野生型 G；2 號及 5 號男子精子線粒體 6023 位點均發(fā) G/A 的雜合變異，靜脈血中均為野生型。1.4 經(jīng)過對 5 組男性不同時期（2012 年及 2018 年）的精子的 MT-CO1 基023 位點的檢測自身比對顯示：5 名男性 2012 年精子線粒體 6023 基因位點

11圖 3：自身對比基因波形圖野生型，A 為變異型。NO.1-2012 為 1 號志愿者 20野生型 G，NO.1-2018 為 1 號志愿者 2018 再次取精后O.3-2012 為 3 號志愿者 2012 年精子樣本 6023 位點檢志愿者 2018 年再次取精對 6023 位點的檢測結(jié)果改：19 位產(chǎn)褥期女性靜脈血、8 名兩周歲之內(nèi)的

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫清廉;;不育:應(yīng)檢點自身不良習(xí)慣[J];家庭醫(yī)學(xué);2017年05期

2 許珈;;霧霾損傷生殖力?專家說可致精子數(shù)量質(zhì)量下降[J];人生與伴侶(下半月版);2017年02期

3 錢振興;;男性不育大多與不良生活習(xí)慣有關(guān)[J];黃河.黃土.黃種人;2017年09期

4 ;八大被證實的精子“殺手”[J];科學(xué)大觀園;2017年05期

5 S.Einarsson;汝勁;;公豬精子在母豬生殖道中的輸送[J];國外畜牧學(xué)(豬與禽);1987年02期

6 蔣達明,許燕吉,褚衍普,馬孝援,戴祖海,沈麟書,邱保安,倪志斌,龔畫剛;山羊受精需要精子數(shù)量的觀察[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);1988年10期

7 華良才;精子過多癥治驗[J];新中醫(yī);1988年12期

8 鐘昌奇,劉啟蘭,唐燕娟,王薏,史家芳,許寧,錢紹楨;長期停服棉酚者精子功能的探討[J];生殖與避孕;1988年02期

9 Harbo,J.R.;田學(xué)軍;;冰點以上溫度對蜜蜂精液暫時貯存的影響[J];中國養(yǎng)蜂;1988年05期

10 劉小章;;世界衛(wèi)生組織(WHO)實驗室手冊——精子-宮頸粘液相互作用(摘譯)[J];男性學(xué)雜志;1988年04期

相關(guān)會議論文 前4條

1 周大國;;186例未婚成年男子精子數(shù)量和質(zhì)量分析[A];首屆全國生殖醫(yī)學(xué)論壇暨生殖相關(guān)疾病診療技術(shù)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

2 周大國;;254例未婚成年男子精子數(shù)量和質(zhì)量分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國男科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

3 湯潔;張寧;魯海鷗;;沙眼衣原體感染對精子數(shù)量及質(zhì)量的影響[A];第五次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

4 張永春;孫發(fā);谷江;石家齊;;氟中毒對生精上皮及精子的影響[A];2010年貴州省泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2010年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 左茂紅 陳一 譯;中國正遭遇精子危機？[N];環(huán)球時報;2018年

2 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院泌尿外科主任 周占松;遭遇生育危機 男人如何做到“精益求精”[N];健康報;2017年

3 中日友好醫(yī)院 曾杰;精子檢查 哪些準備要做好[N];健康報;2017年

4 本報記者 郭靜 通訊員 張秋霞;“封山育林”不等于要禁欲[N];廣東科技報;2017年

5 留民;某些抗癌藥會損傷男孩今后生育力[N];中國醫(yī)藥報;2001年

6 李剛;八種時尚易引起男子不育[N];中國醫(yī)藥報;2001年

7 記者 任海軍;看電視少鍛煉影響精子數(shù)量[N];新華每日電訊;2013年

8 楊孝文　編譯;不當飲食和生活方式降低精子數(shù)量[N];北京科技報;2013年

9 武漢市第一醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科主任 胡雅君;欲添二寶 “小蝌蚪”按兵不動怎么辦[N];健康報;2019年

10 本報資料室;環(huán)境污染可影響精子數(shù)量[N];大眾科技報;2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 曹義娟;鎖陽水提取物對少、弱精子癥大鼠模型的精子活動參數(shù)和血清睪酮的影響及促進未分化精原細胞增殖、相關(guān)基因表達的實驗研究[D];蘇州大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前8條

1 常宏揚;漢族人精子線粒體CO1基因變異與精液質(zhì)量及體外完全受精失敗的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2019年

2 梁莉;精子DNA碎片率與體外受精/卵胞漿內(nèi)單精子注射助孕的妊娠結(jié)局相關(guān)性分析[D];山東大學(xué);2018年

3 林曉智;男性BMI指數(shù)與精子數(shù)量關(guān)系的系統(tǒng)回顧及Meta分析[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

4 周志勇;中國四種熊蜂的生物學(xué)特性比較[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

5 王國秀;染錳大鼠生精細胞凋亡機理的研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2009年

6 許翠欣;鉛和乙醇聯(lián)合作用對小鼠精子質(zhì)量的影響及硒拮抗作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2003年

7 劉玉姣;枸杞多糖對己烯雌酚致倉鼠及雄性后代生精細胞凋亡的緩解作用[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 朱鴻雁;新生SD大鼠聯(lián)合暴露苯并芘和多氯聯(lián)苯對血清睪酮水平的影響及表觀遺傳機制對睪酮合成酶的調(diào)控作用[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

本文編號：2769954