【摘要】：目的關(guān)于孕婦大量飲用咖啡因的相關(guān)研究指出,咖啡因是引起低體重兒的重要原因之一,但是具體的作用機制尚不完全清楚。本研究主要目的是借助于雞胚卵黃囊模型來探討孕早期咖啡因攝入過多是否會影響到卵黃囊對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收,從而導致影響到胚胎的生長發(fā)育。初步探索研究妊娠期婦女攝入咖啡因,對胎兒發(fā)育速度所造成的影響,以及其發(fā)生的機制,從而對妊娠期婦女安全而且合理的飲食提供科學的依據(jù),實現(xiàn)我們所倡導的優(yōu)生優(yōu)育、提高人口素質(zhì)的目的,具有重要的倫理價值和現(xiàn)實指導意義。萬法本研究以雞胚為實驗模型,分為對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組。新鮮種雞蛋分組后37℃橫向孵化2天,在蛋殼上開窗,在卵黃膜部位給予不同劑量的咖啡因,對照組給予同體積的PBS,然后用透氣膠帶封好,繼續(xù)培養(yǎng)6天后取出胚胎和卵黃膜組織。對胚胎進行測重,隨后根據(jù)對卵黃膜組織通過HE染色進行形態(tài)學分析,利用RT-PCR從分子學方面分析胚胎發(fā)育中p185和p21的變化,然后利用免疫熒光染色法進一步分析卵黃膜的細胞增殖和凋亡情況。結(jié)果1.胚胎重量測量結(jié)果與對照組相比,隨著咖啡因濃度的升高,胚胎體重有下降的趨勢。正常組與中劑量組差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),正常組與高劑量組有明顯差異(P0.01);2.卵黃膜HE染色實驗結(jié)果與對照組相比,中劑量組和高劑量組的卵黃膜血管發(fā)育程度較差,血管密度顯著降低,H.E染色后可以觀察到各個實驗組在組織形態(tài)方面的發(fā)育狀態(tài)存在著明顯的差異;3.PT-PCR實驗結(jié)果與對照組相比,實驗組p185的表達有隨著咖啡因濃度升高而降低的趨勢,p21 RT-PCR結(jié)果顯示隨著咖啡因劑量的增高卵黃膜的細胞周期抑制基因表達增加;4.卵黃膜組織細胞增殖凋亡的變化與對照組相比,PH3染色顯示胚胎隨著暴露咖啡因劑量的增加,卵黃膜的組織的細胞增殖能力減弱,而TUNEL染色結(jié)果則與其相反,隨著咖啡因濃度的升高,其凋亡程度增加;結(jié)論咖啡因通過影響胚胎卵黃膜的血管發(fā)育,使血管分布密度降低,血管直徑下降,發(fā)育成熟的血管數(shù)量減少。同時卵黃膜細胞增殖減弱,細胞凋亡程度增加,從而影響了卵黃膜對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和運輸,進而影響了胚胎的發(fā)育。為證明妊娠期婦女早期大劑量的攝入咖啡因,能通過影響胎盤絨毛的發(fā)育影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收從而影響到胚胎的正常發(fā)育提供了數(shù)據(jù)支持。
【學位授予單位】：沈陽醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R715.3
【圖文】：

圖１胚胎發(fā)育情況及重量統(tǒng)計分析逡逑注：Ａ：種蛋培養(yǎng)操作時間流程；Ｂ：各實驗組胚胎的整體發(fā)育情況；Ｃ：各實驗組統(tǒng)計分中劑量的體重與對照組有統(tǒng)計學差異（Ｐ〈０．０５），高劑量組的體重與對照組有顯著的統(tǒng)計差異（Ｐ邋＜０．０１），而低劑量組與對照組不存在差異（Ｐ＞邋０．０５）逡逑表１胚胎重量統(tǒng)計分析逡逑組別邐胚胎重量（ｇ）邐Ｐ逡逑對照組邐４．４邋±０．２邐—逡逑低劑量組邐３．９邋±０．２邐０．１１逡逑中劑量組邐３．邋４邋土邋０．２邐０．邋０３１逡逑高劑量組邐１．９±０．４邐０．０１逡逑二、咖啡因?qū)ε咛ピ缙诎l(fā)育卵黃膜形態(tài)的影響逡逑

實驗組在組織形態(tài)方面的發(fā)育狀態(tài)存在著明顯的差異，隨著暴露咖啡因劑量的增逡逑加，卵黃膜內(nèi)發(fā)育成熟的血管數(shù)量明顯減少。同時不同實驗組的卵黃膜的Ｐ１８５基逡逑因表達的ＲＴ－ＰＣＲ的結(jié)果顯示隨著咖啡因濃度的增高有降低的趨勢（圖２）。逡逑１７逡逑

（一）胚胎發(fā)育的概述逡逑胚胎早期發(fā)育階段通常是在第一至第八周，這個階段也稱為胚期［１３］。在這個早逡逑期階段，經(jīng)過分裂增殖和分化的受精卵，形成桑椹胚、胚泡，如圖８所示。同時，逡逑這個時期胚胎對環(huán)境中有害因敏感程度很高，而且一些病毒、藥物以及惡劣的環(huán)逡逑境因素對胚胎造成的傷害也往往是不可逆的，且會伴隨機體終生，并影響到機體逡逑以后各個生命階段的生長發(fā)育［１５］。逡逑外胚層逡逑／內(nèi)細胞團邐＼逡逑Ｘ邐內(nèi)胚層—逡逑囊胚原腸胚逡逑圖８胚胎形態(tài)逡逑３５逡逑

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

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4 劉寒e

本文編號：2765094