發(fā)布時(shí)間：2020-07-15 08:47

【摘要】：胚胎停育,亦稱為稽留流產(chǎn)(Missed abortion;MA),在我國的發(fā)病率正逐年提升,嚴(yán)重危害了患者的身心健康,而遺傳因素是目前國內(nèi)外學(xué)者所公認(rèn)的導(dǎo)致胚胎停育發(fā)生的主要誘因,但其分子機(jī)制尚不明確。microRNA作為一種非編碼RNA廣泛的參與了細(xì)胞的增殖、凋亡等胚胎發(fā)育的多種生物學(xué)過程。為了研究miRNAs與MA發(fā)病的相關(guān)性,我們利用候選基因法在胚胎停育的胎盤組織中篩選了差異表達(dá)的miRNAs,同時(shí)配合原位雜交以及real-time PCR兩種方法來對篩選出的miRNAs進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果顯示let-7b,miR-21,miR-125b和miR-483在MA患者和孕早期正常絨毛組織中均有廣泛的表達(dá),主要分布在滋養(yǎng)層細(xì)胞以及間質(zhì)細(xì)胞中。與對照組相比let-7b、miR-125b的表達(dá)量顯著上調(diào),miR-483的表達(dá)量顯著下降(p0.05)。為了進(jìn)一步探究胚胎停育發(fā)生的分子機(jī)制,我們利用米非司酮對孕鼠的腹腔進(jìn)行單次注射來構(gòu)建胎停動(dòng)物模型,結(jié)果顯示當(dāng)藥物濃度達(dá)到4mg/kg時(shí),孕鼠胚胎表現(xiàn)為穩(wěn)定的吸收。與對照組相比,let-7b的表達(dá)量上調(diào)(p0.05),這與其在人胎盤組織中的表達(dá)趨勢一致。我們課題組前期的研究顯示let-7b在大鼠胚胎植入后表達(dá)顯著下調(diào),那么,我們考慮let-7b在胚胎停育組織中表達(dá)量上調(diào)也可能是引起胚胎停育的原因之一。為此,本研究選擇let-7b來深入探討miRNA參與調(diào)控胚胎停育的分子機(jī)制。首先,我們分析了 let-7b在不同細(xì)胞系中的表達(dá)量,為進(jìn)行細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)選擇細(xì)胞系提供參考;然后,利用EdU,MTT,Transwell小室以及流式細(xì)胞分析術(shù)來研究let-7b的表達(dá)量差異對細(xì)胞的生物學(xué)功能的影響;接著利用生物信息學(xué)網(wǎng)站來分析預(yù)測let-7b的靶基因。隨后利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)在對靶基因進(jìn)行驗(yàn)證,最后利用Real-time PCR、Western Blot對靶基因的表達(dá)水平進(jìn)行了探究。研究結(jié)果顯示,在不同細(xì)胞系中l(wèi)et-7b的表達(dá)量存在著顯著性差異,在滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR8中l(wèi)et-7b的表達(dá)量相對較低,而在人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞HEC-1B中表達(dá)量有著顯著的提高(P0.01)。利用不同濃度米非司酮處理細(xì)胞造成損傷后,發(fā)現(xiàn)let-7b的表達(dá)量有著顯著的上調(diào)趨勢(P0.01)。當(dāng)過表達(dá)let-7b時(shí),細(xì)胞的增殖能力得到了抑制,而凋亡、遷移及浸潤能力得到增強(qiáng)(P0.05),當(dāng)敲低let-7b的表達(dá)時(shí)出現(xiàn)了相反的趨勢。雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證了 MAPK6為let-7b的靶基因,real-time PCR、western blot對MAPK6表達(dá)水平進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)其表達(dá)模式與let-7b的相反,提示let-7b可能通過影響了 MAPK6的表達(dá),從而參與調(diào)控了胚胎停育的發(fā)生過程。結(jié)論:Let-7b在胚胎停育患者和米非司酮誘導(dǎo)的胚胎停育模型胎盤組織中均表達(dá)顯著上調(diào),其可通過靶向調(diào)節(jié)MAPK6的表達(dá)抑制細(xì)胞的增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡、遷移與浸潤過程,進(jìn)而參與了胚胎停育的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R714.21
【圖文】：

國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院邐碩士研究生學(xué)位檢驗(yàn)的方法進(jìn)行比較，以＊邋ＰＣ０．０５代表該差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；多組間ＮＯＶＡ分析，同樣以＊邋Ｐ＜０．０５表示該差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。逡逑實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑排布信息逡逑齡與妊娠期疾病的發(fā)生密切相關(guān)，因而在本研究中，依據(jù)孕婦妊娠時(shí)標(biāo)本其分為四個(gè)組別，依次為：年齡小于等于２５周歲組（ＹＳ２５）、２６－：邋２６－３０）組、３１－３５歲組（Ｙ：邋３１－３５）、以及年齡大于等于３６周歲組（Ｙ＞收集到的組織按照年齡組配對分類，排列設(shè)計(jì)成組織芯片如圖１所示，號為胎停絨毛組織，偶數(shù)編號為對照組，具體信息詳見表２：逡逑４－Ｊ

２．１．１原位雜交逡逑以鎖核酸標(biāo)記的探針檢測ｍｉＲ－２１在正常及早期胎停組織中絨毛的表達(dá)定位如逡逑圖２．１所示：ｍｉＲ－２１表達(dá)定位結(jié)果顯示其陽性信號主要定位于胎盤絨毛合體滋養(yǎng)層逡逑和間質(zhì)細(xì)胞中。ｍｉＲ－２１的整體表達(dá)水平較高，與對照組比較，隨機(jī)選取五個(gè)視野的逡逑灰度值分析結(jié)果提示ｍｉＲ－２１在四個(gè)組別之用的陽性位點(diǎn)著色強(qiáng)度并未統(tǒng)計(jì)出顯著逡逑性的差異，總體分析時(shí)發(fā)現(xiàn)病例組中出現(xiàn)下調(diào)的趨勢，但是沒有差異，這提示在胚逡逑胎停育這一病理過程中，ｍｉＲ－２１并未出現(xiàn)在胎盤絨毛組織中的差異表達(dá)，但其是否逡逑確定為參與調(diào)控這一生物學(xué)過程的發(fā)生，仍有待進(jìn)一步驗(yàn)證。逡逑２０－２５ｙｅａｒｓ邋２６－３０ｙｅａｒｓ邋３１－３５ｙｅａｒｓ邋３６－４０ｙｅａｒｓ逡逑Ｂ邐Ｃ逡逑Ｈ邋Ｃｏｎｔｒｏｌ邐８０＇逡逑ｉｉｉｒ邋＿逡逑ｚ邋ｊ邋ｚ邐ｙ逡逑－ｒ邋ｓ－－邐■￥邐、逡逑圖２．１邋ｍｉＲ－２１原位雜交結(jié)果圖逡逑Ａ：ｍｉＲ－２１在正常胎盤絨毛組織與胎停絨毛組織中的表達(dá)（２００ｘ）；邋Ｂ：四個(gè)年齡組中，正常逡逑胎盤絨毛組織與胎停絨毛組織原雜結(jié)果平均灰度值比較；Ｃ：對照組與病例組ｍｉＲ－２１原雜結(jié)逡逑果灰度值的比較。逡逑１４逡逑

碩士研究生學(xué)位論文逡逑２．１．２邋Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ逡逑如圖２．２所示，利用ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ的方法檢測ｍｉＲ－２１表達(dá)量的差異，挑選出逡逑的４０對胎停樣本結(jié)果顯示：與對照組相比，胚胎停育患者中ｍｉＲ－２１的總體表達(dá)量逡逑上調(diào)，且具有顯著性差異（Ｐ＜０．０１），而在四個(gè)不同年齡組中，ｍｉＲ－２１的表達(dá)量均逡逑有上調(diào)的趨勢，但未能統(tǒng)計(jì)出顯著性差異。但這也有可能是個(gè)別個(gè)體間差異較大，逡逑而未能產(chǎn)生的差異結(jié)果。對不同年齡段配對的病例組和對照組進(jìn)行表達(dá)趨勢分析逡逑后，發(fā)現(xiàn)在２０－２５周歲這里年齡段里，ｍｉＲ－２１上調(diào)的百分比最高為５０％，且個(gè)別胎逡逑停樣本組織內(nèi)ｍｉＲ－２１的表達(dá)量顯著上調(diào)（尸＜０．００１），這提示ｍｉＲ－２１可能與胚胎逡逑停育相關(guān)，但其可能參與的調(diào)控其發(fā)生的具體分子機(jī)制仍然需要進(jìn)一步的探究。逡逑Ａ邐Ｂ逡逑ｓ邋２５－｜邐＊＊邐＝邋１５－，邐—逡逑｜邐２邐■邋ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑ｔ邋２０－邐—■￣邐Ｈ邐ｔ邐ｔ邋■邋ｃａｓｅ逡逑ｆｉｓ．邐｜＇°邐１逡逑Ｃ邋１５0ｌ邐Ｉ１０＇邐Ｉ邋５－逡逑Ｖ邋５＇邐＾逡逑｜邐１邋ｐｉ邋Ｉ邋邐

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 祁冰;;探討早孕胚胎停育與多種接觸因素相關(guān)性和胚胎停育的病因[J];實(shí)用婦科內(nèi)分泌電子雜志;2019年28期

2 于曉麗;;說說胚胎停育[J];中國計(jì)劃生育學(xué)雜志;2019年07期

3 吳瓊霞;;樂平市育齡婦女早期胚胎停育與甲狀腺功能異常的關(guān)系[J];臨床合理用藥雜志;2019年31期

4 邢長英;周玲;楊燕;候淑萍;竺文蕾;;高通量基因測序分析119例胚胎停育染色體核型[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2017年22期

5 侯大喬;敬源;張亞紅;楊蕾;;早孕胚胎停育與多種接觸因素相關(guān)性研究及胚胎停育病因分析[J];中國婦幼保健;2018年01期

6 朱燕楠;;胚胎停育的研究進(jìn)展[J];臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志;2017年75期

7 龍?zhí)m婷;;陰道彩色多普勒超聲檢查對胚胎停育的預(yù)測價(jià)值研究[J];影像技術(shù);2018年03期

8 周紫瓊;鄔俏璇;黎秋容;申霞;劉瓊英;;深圳地區(qū)235例胚胎停育常見相關(guān)因素分析[J];吉林醫(yī)學(xué);2018年07期

9 馬俊麗;楊嘉慧;楊君;;胚胎停育臨床病因?qū)W分析[J];中國婦幼健康研究;2016年S2期

10 陳飛;黃河玲;;胚胎停育相關(guān)因素研究進(jìn)展[J];中國計(jì)劃生育學(xué)雜志;2016年07期

相關(guān)會議論文 前10條

1 孫仙;邱紅燕;韓華;潘麗華;杜鵬;姚濤貴;韓湘;;胚胎停育影響因素病例對照研究[A];第七次全國流行病學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會流行病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會中華流行病學(xué)雜志編輯委員會第七屆換屆會議論文集[C];2014年

2 滕莉榮;劉欣燕;郝娜;周京;;胚胎停育與絨毛染色體異常[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國計(jì)劃生育學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

3 常亮;李丹;張秋芳;趙楠;劉平;喬杰;;熒光原位雜交與核型分析在早期胚胎停育中的診斷意義比較[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科內(nèi)分泌會場（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計(jì)劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

4 林雪;韓秀娟;丁麗;;米索前列醇陰道放置用于胚胎停育的臨床觀察[A];全國婦產(chǎn)科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2006年

5 常亮;趙楠;李丹;高雪峰;邵敏杰;趙揚(yáng)玉;張秋芳;;熒光原位雜交與核型分析在早期胚胎停育中的診斷意義比較[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議�？痆C];2012年

6 陳義思;孟珊;康莉;李晨曲;;胚胎停育患者行清宮術(shù)的心理特點(diǎn)及護(hù)理干預(yù)研究[A];2018年《國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》學(xué)術(shù)年會論文專集[C];2018年

7 王s

本文編號：2756266