【摘要】：目的:本研究旨在探究白細胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)及低剪切力對卵巢癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程的影響,并初步分析Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導途徑在IL-8及低剪切應力誘導卵巢癌細胞發(fā)生EMT中的作用,為IL-8及低剪切應力誘導卵巢癌細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的分子機理的深入研究奠定基礎,為卵巢癌提供更早期的診斷、預防、干預以及尋找與其相關分子靶向藥物提供實驗依據(jù)。方法:1.采用免疫組化檢測和統(tǒng)計相關分析91例漿液性卵巢癌臨床樣本、人卵巢癌腫瘤細胞株SKOV3中IL-8及IL-8受體CXCR1、CXCR2的表達關系。2.外源性人重組IL-8(100 ng/m L)誘導處理SKOV3細胞48 h,Western blot檢測Wnt/β-catenin及EMT相關蛋白的變化情況,分析IL-8對Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導途徑的激活以及對EMT的影響。3.采用細胞免疫熒光、Transwell、實時無標記細胞技術(RTCA)定性定量分析IL-8處理后,SKOV3細胞和人正常的卵巢上皮細胞株HOSEpiC的侵襲、遷移及細胞骨架的變化,Western blot檢測纖毛驅(qū)動蛋白KIF3A的表達情況。4.利用體外流體力學加載模型(剪切應力強度:1.5 dyne/cm2,作用2 h)處理SKOV3細胞,Western blot檢測Wnt/β-catenin及EMT相關蛋白的變化情況,初步分析低剪切應力對Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導途徑的激活以及對EMT的影響。結(jié)果:1.91例漿液性卵巢癌臨床樣本中,共有82例表達IL-8(90.1%),89例表達CXCR1(97.8%),88例表達CXCR2(96.7%),SKOV3中IL-8、CXCR1、CXCR2均表達陽性;卵巢癌組織中IL-8蛋白的表達與CXCR2蛋白的表達呈明顯正相關關系(r=0.253,P0.05),而與CXCR1無相關關系(r=0.178,P0.05)。2.IL-8(100 ng/m L)處理卵巢癌SKOV3細胞48 h后,顯著增加SKOV3細胞Wnt/β-catenin信號通路中關鍵蛋白(P-β-catenin、CD44、MET、c-Jun)表達;同時,下調(diào)上皮細胞標志物E-cadherin而上調(diào)間質(zhì)細胞標志物Vimentin和snail的表達,從而促進卵巢癌細胞發(fā)生EMT。3.IL-8(100 ng/mL)誘導SKOV3細胞細胞骨架的重排,纖毛形成標志物KIF3A的表達上調(diào),促進纖毛形成。4.Transwell和RTCA定量結(jié)果顯示,IL-8(100 ng/m L)作用后,明顯增強SKOV3細胞的侵襲能力(P0.05),而對HOSEpiC細胞遷移則并無影響(P0.05)。5.流體剪切應力(1.5 dyne/cm~2、2 h)處理SKOV3細胞,可顯著上調(diào)P-β-catenin,激活Wnt/β-catenin信號通路,下調(diào)E-cadherin、上調(diào)Vimentin,從而促進卵巢癌細胞發(fā)生EMT。結(jié)論:以上結(jié)果顯示:IL-8及低剪切應力可以通過激活Wnt/β-catenin信號途徑,促使卵巢癌細胞獲得EMT特性,促進細胞骨架的重排、細胞膜表面纖毛偽足的形成(KIF3A),從而增強其侵襲、遷移能力。提示:腫瘤微環(huán)境中的關鍵理化因素(IL-8和低剪應力)對卵巢癌細胞的作用在卵巢癌生長、局部侵襲和遠處轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要的作用,與其相關的Wnt/β-catenin信號通路關鍵性信號分子是卵巢癌細胞早期進行惡性轉(zhuǎn)化的病理性基礎,為進一步深入的研究卵巢癌防治以及靶向藥物的篩選提供新的治療靶點。
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.31
【圖文】：

IL-8 CXCR1 CXCR2圖 1-1 卵巢癌組織 IL-8 及其受體 CXCR1 和 CXCR2 表達情況（免疫組化，標尺=100 μm）Fig.1-1 Ovarian tissue IL - 8 and its receptor CXCR1/CXCR2 expression(immunohistochemical, scale=100 μm)3.2 統(tǒng)計分析 IL-8 與 CXCR1 和 CXCR2 之間的關系用 SPSS 17.0 統(tǒng)計評分數(shù)據(jù)，Spearman 秩相關統(tǒng)計分析顯示， IL-8 的表達與CXCR2 呈明顯正相關關系(r=0.253，P<0.05)，而與 CXCR1 無相關關系（r=0.178，P>0.05），詳見表 1-2 和圖 1-2（CXCR1 與 IL-8 的散點圖未顯示）。提示，在卵巢癌癌組織中 IL-8 與其受體 CXCR2 結(jié)合發(fā)揮著更為重要的生物學作用。指標 IL-8相關性r 值 P 值CXCR1 0.178 0.092CXCR2 0.253 0.015

圖 1-2 IL-8 與 CXCR2 評分的散點圖Fig.1-2 IL-8 and CXCR2 score of scatter diagram癌細胞株 SKOV3 的免疫細胞化學結(jié)果-3 顯示：標尺為 100 μm，圖片中黃色區(qū)域是陽性表達區(qū)域，卵巢癌細胞株 SKOV3 中 IL-8、CXCR1、CXCR2 均勻表達，XCR1 和 CXCR2）與卵巢癌細胞株關系密切。3 細胞 IL-8 及其受體 CXCR1 和 CXCR2 的表達情況（免疫組化，標 and its receptors CXCR1/CXCR2 expression in SKOV3 cells (immunoscale=100 μm)

圖 1-2 IL-8 與 CXCR2 評分的散點圖Fig.1-2 IL-8 and CXCR2 score of scatter diagram.3 卵巢癌細胞株 SKOV3 的免疫細胞化學結(jié)果如圖 1-3 顯示：標尺為 100 μm，圖片中黃色區(qū)域是陽性表達區(qū)域，而藍色部細胞核。卵巢癌細胞株 SKOV3 中 IL-8、CXCR1、CXCR2 均勻表達，提示 IL-受體（CXCR1 和 CXCR2）與卵巢癌細胞株關系密切。

【參考文獻】

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1 Zitong Zhao;Xinyi Fan;Lanfang Jiang;Zhongqiu Xu;Liyan Xue;Qimin Zhan;Yongmei Song;;miR-503-3p promotes epithelialemesenchymal transition in breast cancer by directly targeting SMAD2 and E-cadherin[J];Journal of Genetics and Genomics;2017年02期

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本文編號：2754863