【摘要】：背景和目的多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是一種女性常見的內分泌代謝紊亂性疾病,育齡期女性的患病率高達6%-10%,以稀發(fā)排卵或不排卵、高雄激素血癥、卵巢多囊樣改變和月經紊亂為主要臨床特征。PCOS除了影響女性的生育功能外,研究發(fā)現(xiàn)它可能還會增加女性患肥胖癥、胰島素抵抗(IR)、2型糖尿病(DM2)和心血管疾病的風險。盡管它的發(fā)病機制尚不清楚,但積累的數據表明,多囊卵巢綜合征是一種既涉及遺傳因素又涉及環(huán)境因素的復雜疾病。目前,許多學者認為PCOS的發(fā)病機制與表觀遺傳學有關,但具體的作用機制尚無定論。表觀遺傳學是一種在DNA序列沒有發(fā)生改變的情況下導致基因表型改變的分子機制。表觀遺傳學研究包括DNA甲基化、組蛋白修飾、和基因組印跡等方面。DNA甲基化是指在甲基轉移酶(DNMT)的作用下將S-腺苷甲硫氨酸(SAM)上的甲基基團轉移到CpG二核苷酸中胞嘧啶的第5位碳原子上形成5-甲基化胞嘧啶(5mC)的過程。通常認為,DNA甲基化會阻礙轉錄因子與CpG二核苷酸順式作用元件的結合,從而抑制基因的表達。目前有研究表明,PCOS一些候選基因DNA甲基化的改變與該疾病的發(fā)病機制有著密切的聯(lián)系。前期我們調查研究了1035名女性,發(fā)現(xiàn)A、B、AB和O血型發(fā)生月經紊亂的比率分別為64.3%、59.8%、61.5%、81.3%,并且O血型組分別與A、B和AB血型組比較差異均有統(tǒng)計學意義,這一發(fā)現(xiàn)目前在國內外尚未見報道。月經紊亂是多囊卵巢綜合征的一項基本的臨床表現(xiàn),所以我們有理由推測ABO血型基因與PCOS的發(fā)生機制可能存在某種聯(lián)系。ABO血型基因位于第9號染色體上(9q 34.1-34.2),在ABO血型基因座上有三個主要的等位基因,即A、B和O。研究發(fā)現(xiàn),ABO血型基因啟動子區(qū)CpG位點甲基化的改變與許多疾病有關。然而,ABO血型基因甲基化的狀態(tài)與PCOS的發(fā)生是否有關聯(lián),尚未有文獻報道。根據以上背景提出假說:ABO血型基因可能通過啟動子區(qū)甲基化的改變調控基因的表達,從而影響PCOS的發(fā)生機制。本研究將從ABO血型基因表觀遺傳學的新角度來探討PCOS的發(fā)病機制。屆時,可以對PCOS的病理學機制提供理論依據,對PCOS的早期診斷以及PCOS遠期并發(fā)癥的預防都有很大的幫助。研究對象1.PCOS患者隨機選取從2016年9月至2017年12月在河南省人民醫(yī)院內分泌科就診的20例PCOS患者,平均年齡為24.60±4.68歲。PCOS診斷標準根據2003年歐洲人類生殖和胚胎學會/美國生殖醫(yī)學學會(ESHRE/ASRM)鹿特丹專家會議推薦的標準,并經臨床檢查(癥狀體征、卵巢超聲、生化檢驗和內分泌激素測定)確診。2.健康對照者隨機選取與PCOS患者年齡和體重指數相匹配、近三個月未服用過激素類藥物且無內分泌和高血壓等相關疾病的20例健康對照者,平均年齡為23.35±3.52歲。所有研究對象均為中國北方漢族人,長期居住在河南地區(qū),且無血緣關系。該項目已經通過鄭州大學和河南省人民醫(yī)院倫理委員會的批準,所有研究對象均簽署知情同意書。研究方法1.玻片法檢測ABO血型使用玻片法檢測所有研究對象的ABO血型。2.紅細胞表面ABH抗原的檢測紅細胞表面A、B抗原的檢測選用來源于小鼠的單克隆抗A或B抗體作為一抗,二抗選用FITC標記兔抗小鼠;H抗原的檢測選用H抗原特異性熒光標記凝集素(Lectin from Ulex europaeus,FITC標記)。應用流式細胞儀進行檢測。3.ABO血型基因mRNA的相對表達水平運用q-PCR技術檢測和分析PCOS患者與健康對照者外周血中ABO基因的mRNA表達水平。4.ABO血型基因啟動子區(qū)的甲基化水平應用MethyTarget目的區(qū)域富集甲基化測序法檢測ABO血型基因啟動子區(qū)28個CpG位點的甲基化水平。本研究所有實驗數據的分析運用SPSS21.0軟件,并用GraphPad Prism 5軟件繪制柱狀圖。定量數據均用均數±標準差(mean±SD)表示,比較兩組之間的定量資料使用兩獨立樣本t檢驗的方法,多組間定量資料的比較采用單因素方差分析的方法。檢驗水準α=0.05,P0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。結果1.使用玻片法將研究對象的的血型分為A、B、AB和O型。20例PCOS患者中O血型6例,A血型9例,B血型4例,AB血型1例。20例健康對照者中O血型8例,A血型5例,B血型4例,AB血型3例。2.B血型PCOS組紅細胞表面的B抗原表達顯著低于健康對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),但H抗原的表達與健康對照組相比無統(tǒng)計學差異(P0.05);O血型PCOS組紅細胞表面的H抗原表達顯著低于健康對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);A血型和AB血型PCOS組紅細胞表面的A抗原、B抗原和H抗原的表達與健康對照組相比較均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。3.B血型PCOS組ABO基因m RNA的表達水平顯著低于健康對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);O血型PCOS組ABO基因mRNA的表達水平顯著低于健康對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)。A血型和AB血型PCOS組ABO基因mRNA的表達水平與健康對照組的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.PCOS組只有CpG4位點的平均甲基化水平低于健康對照組,其余27個CpG位點的平均甲基化水平均高于健康對照組,但差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);B血型中PCOS組所有CpG位點的平均甲基化水平均高于健康對照組,但兩組間只有CpG16、CpG18、CpG19和CpG26四個位點的平均甲基化水平有顯著差異,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);O血型、A血型以及AB血型中PCOS組的28個CpG位點平均甲基化水平與健康對照組均有差異,但差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論B血型PCOS組ABO基因表達下降與ABO基因啟動子區(qū)高甲基化的改變具有相關性,需要擴大樣本量進一步驗證。研究結果顯示ABO基因的高甲基化狀態(tài)是PCOS易感性的潛在因素。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R711.75
【圖文】：

圖 1.1 ABO 基因在 ABO 基因座有三個主要的等位基因，即 A、B 和 O。等位基因 A 和等位基因 B 有 7 個堿基不同，即 297 G >A、526 G >C、657 T >C、703A>G、796A>C、803 C >G 和 930A>G。其中 526 G >C、703A>G、796 A>C 和 803 C >G 堿基的改變使 B 轉移酶的 4 個氨基酸發(fā)生替換，即 Arg526Gly，Gly703Ser，Leu796M et和 Gly803A la。等位基因 O 是 261 位的單堿基 G 缺失[21]，堿基變化如圖 1.2 所示。3 個等位基因決定 4 種表型，即 A、B、AB 和 O 血型，可以使紅細胞表面帶有不同的抗原（A 抗原、B 抗原、兩種抗原都有和兩種抗原都無）。

圖 1.1 ABO 基因ABO 基因座有三個主要的等位基因，即 A、B 和 O。等位基因 A 有 7 個堿基不同，即 297 G >A、526 G >C、657 T >C、703A>G、79G 和 930A>G。其中 526 G >C、703A>G、796 A>C 和 803 C >G B 轉移酶的 4 個氨基酸發(fā)生替換，即 Arg526Gly，Gly703Ser，Leu03A la。等位基因 O 是 261 位的單堿基 G 缺失[21]，堿基變化如圖等位基因決定 4 種表型，即 A、B、AB 和 O 血型，可以使紅細同的抗原（A 抗原、B 抗原、兩種抗原都有和兩種抗原都無）。

前 言位上的 H 基因編碼α-1,2-巖藻糖轉移酶，它可以催化α-1,2-巖藻糖膜上的半乳糖（前體物質）形成 H 抗原（H 物質）。A 等位基因編碼基半乳糖轉移酶，B 等位基因編碼α-1,3-D-半乳糖轉移酶，功能分-乙酰氨基半乳糖和一個 D-半乳糖轉移到 H 物質上，從而形成 A，如圖 1.3 所示。根據目前的研究已經發(fā)現(xiàn)，ABO 血型基因 DNA與許多疾病有關，對血型基因 DNA 甲基化的研究日益成為熱點

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 劉金勇;劉嘉茵;韓素萍;周偉;;丙戊酸鈉對卵泡內膜細胞雄激素分泌及相關甾體合成酶改變的影響[J];生殖與避孕;2005年11期

相關博士學位論文 前1條

1 徐華;ABO血型與白血病相關性的初步研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2008年

相關碩士學位論文 前2條

1 劉靜;部分白血病與骨髓增生異常綜合征患者紅細胞AH抗原表達與基因啟動子CpG島甲基化研究[D];蘇州大學;2011年

2 王婷;多囊卵巢綜合征LMNA基因CpG島甲基化狀態(tài)的研究[D];復旦大學;2011年

本文編號：2753522