【摘要】：第一部分外周血白細(xì)胞DNA甲基化在卵巢癌診斷中的作用及意義目的:卵巢癌是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一,其死亡率卻在女性癌癥中高居榜首。卵巢癌起病隱匿早期難以發(fā)現(xiàn),大約70%的患者就診時(shí)已經(jīng)為晚期,盡管初始化療有效,但大部分的晚期卵巢癌患者在治療后會出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。卵巢癌早期患者治療后5年生存率可高達(dá)90%,而晚期患者卻始終徘徊于20%,由此可見卵巢癌的早期發(fā)現(xiàn)早期診斷對其預(yù)后有極其重要的意義和影響。卵巢癌目前的診療手段雖然眾多,但仍不能有效地做到早期發(fā)現(xiàn)早期診斷。研究顯示DNA甲基化水平的改變和甲基化模式的異�？梢鸹蚪Y(jié)構(gòu)及其功能的異常,并且DNA甲基化的異常在腫瘤形成前即已存在,因此DNA甲基化異常在腫瘤形成和發(fā)展中的作用受到越來越多的重視。同時(shí)外周血液DNA甲基化由于具有采取樣本方便、容易獲得、穩(wěn)定性強(qiáng)、容易檢測等優(yōu)點(diǎn),具有作為潛在生物標(biāo)志物的特點(diǎn)而備受關(guān)注。因此,本課題旨在通過分析外周血白細(xì)胞DNA甲基化位點(diǎn)與卵巢癌的關(guān)聯(lián),尋找可能成為卵巢癌早期診斷的DNA甲基化標(biāo)志物。方法:本課題進(jìn)行全表觀基因組關(guān)聯(lián)研究并分為兩個(gè)階段進(jìn)行,在第一階段中使用Illumina 450K Infinium Methylation Bead Chip全基因組甲基化檢測平臺,采用病例-對照研究方法繪制了24例上皮源性卵巢癌患者和24例健康對照的全基因組甲基化水平圖譜,分析病例組和對照組間的具有差異的甲基化位點(diǎn),并結(jié)合卵巢癌組患者FIGO臨床分期(早期:I-II期;晚期:III-IV期)進(jìn)行分層分析,從中篩選出與卵巢癌高度相關(guān)的差異甲基化位點(diǎn)。在第二階段的研究中選取206例上皮性卵巢癌病例和205例健康對照,使用Illumina Custom Vera Code Methylation Assay對第一階段篩選出的差異甲基化位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證研究,比較兩個(gè)階段所檢測的結(jié)果是否一致,通過驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)降低研究的假陽性。并結(jié)合卵巢癌的臨床FIGO分期(早期:I-II期;晚期:III-IV期)以及組織病理類型(漿液性卵巢癌,子宮內(nèi)膜樣卵巢癌,粘液性卵巢癌)進(jìn)一步進(jìn)行分層分析,從而獲得與卵巢癌顯著相關(guān)的甲基化位點(diǎn),進(jìn)而依據(jù)差異的甲基化位點(diǎn)建立卵巢癌的DNA甲基化標(biāo)志物模型,并通過分析研究差異的Cp G位點(diǎn)所調(diào)控的相關(guān)基因,使用DAVID軟件尋找卵巢癌發(fā)病相關(guān)的生物信號通路及相關(guān)基因。結(jié)果:在第一階段的研究中通過篩選獲得了96個(gè)差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的甲基化位點(diǎn)(FDR0.2);在第二階段驗(yàn)證研究中,通過擴(kuò)大樣本量對96個(gè)甲基化位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證研究,發(fā)現(xiàn)46個(gè)差異甲基化位點(diǎn)與卵巢癌關(guān)聯(lián)顯著。進(jìn)而篩選出6個(gè)差異甲基化位點(diǎn)(cg00207226,cg01535567,cg19716090,cg20956594,cg22534374,cg22639787)建立了卵巢癌的DNA甲基化標(biāo)志物,其診斷卵巢癌能力達(dá)77.3%(95%CI:72.9-81.8%)�；蛲贩治霭l(fā)現(xiàn)了卵巢癌相關(guān)的生物信號通路,其中富集倍數(shù)最高的免疫系統(tǒng)相關(guān)的信號通路中的基因包括LYST(cg16962115,FDR=1.24E-04),CADM1(cg21933078,FDR=1.22E-02),NFATC1(cg06784563,FDR=1.46E-02)。同時(shí)還首次發(fā)現(xiàn)了外周血內(nèi)的白細(xì)胞DNA甲基化異常與血小板參數(shù)以及凝血因子參數(shù)具有相關(guān)性。結(jié)論:該研究通過病例對照分析白細(xì)胞DNA甲基化異常與卵巢癌的關(guān)聯(lián),發(fā)現(xiàn)了可以用于診斷卵巢癌的DNA甲基化標(biāo)志物,并且本研究首次發(fā)現(xiàn)了外周血白細(xì)胞DNA甲基化與血小板參數(shù)及凝血因子參數(shù)的關(guān)聯(lián),同時(shí)還發(fā)現(xiàn)了與免疫系統(tǒng)相關(guān)的生物信號通路及相關(guān)基因。本課題為外周血內(nèi)白細(xì)胞DNA甲基化標(biāo)志物在卵巢癌的早期診斷及高危人群中篩查的應(yīng)用提供了理論依據(jù),為表觀遺傳流行病學(xué)和全表觀基因組關(guān)聯(lián)研究提供了新的經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)基礎(chǔ),也為卵巢癌的病因?qū)W研究提供了理論基礎(chǔ),同時(shí)還為卵巢癌治療中的靶向DNA甲基化的藥物研究以及卵巢癌患者的個(gè)體化精準(zhǔn)化治療提供了理論基礎(chǔ)及研究方向。第二部分血常規(guī)炎性指標(biāo)在卵巢癌診斷中的作用及意義目的:本課題第一部分的研究首次發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了外周血白細(xì)胞DNA甲基化與血小板參數(shù)及凝血參數(shù)存在相關(guān)性,雖然研究中并未發(fā)現(xiàn)卵巢癌相關(guān)的異常甲基化位點(diǎn)與白細(xì)胞各亞型之間存在關(guān)聯(lián),但是既往的其他研究報(bào)道中有發(fā)現(xiàn)外周血白細(xì)胞DNA異常甲基化與白細(xì)胞亞型間存在著相關(guān)性。同時(shí)由于目前血常規(guī)是臨床診療中最普遍常用的檢驗(yàn)方法,且其檢測方便快捷、價(jià)格便宜。因此我們期待通過對血常規(guī)內(nèi)白細(xì)胞、血小板等炎性指標(biāo)的研究,評估其與卵巢癌的關(guān)系特點(diǎn)及其在卵巢癌的診斷中的意義及作用,探索能夠輔助配合CA125和HE4以提高早期卵巢癌的鑒別診斷能力的標(biāo)志物。方法:研究分析了經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)的887例上皮源性卵巢癌患者及207例卵巢良性腫瘤患者的術(shù)前血常指標(biāo)及腫瘤標(biāo)志物的數(shù)據(jù)資料,同時(shí)結(jié)合患者的年齡、臨床分期(早期I-II期,晚期III-IV期)和絕經(jīng)狀態(tài)進(jìn)行分層研究,并利用受試者工作曲線研究分析血常規(guī)炎性指標(biāo)在鑒別診斷卵巢癌患者中的價(jià)值。結(jié)果:CA125聯(lián)合單個(gè)炎性指標(biāo)在卵巢癌標(biāo)志物的研究中,其中CA125+NEUT(AUC=90.82%,95%CI:88.7-92.94%),CA125+WBC(AUC=90.82%,95%CI:88.7-92.94%),CA125+NLR(AUC=90.78%,95%CI:88.66-92.91%)診斷惡性腫瘤的能力優(yōu)于單獨(dú)CA125(AUC=90.76%,95%CI:88.64-92.88%);在早期卵巢癌的診斷中CA125+WBC(AUC=81.2%,95%CI:77.37-85.02%)優(yōu)于單獨(dú)CA125(AUC=81.06%,95%CI:77.22-84.89%)。聯(lián)合多個(gè)炎性指標(biāo)在卵巢癌標(biāo)志物的研究中,其中CA125+NEUT_R+NLR+NEUT+WBC(AUC=90.91%,95%CI:88.8-93.03%)及CA125+HE4+WBC+LYMPH_R(AUC=89.58%,95%CI:85.85-93.32%)對卵巢癌的診斷分別優(yōu)于單獨(dú)CA125(AUC=90.76%,95%CI:88.64-92.88%)和CA125+HE4(AUC=89.43%,95%CI:85.68-93.18%);在早期卵巢癌的診斷中CA125+WBC+NEUT+NLR(AUC=81.26%,95%CI:77.43-85.09%)及CA125+HE4+WBC+LYMPH_R(AUC=79.49%,95%CI:73.57-85.41%)分別優(yōu)于單獨(dú)CA125(AUC=81.06%,95%CI:77.22%-84.89%)和CA125+HE4(AUC=78.88%,95%CI:72.9-84.87%)。結(jié)論:該部分研究通過對上皮源性卵巢癌及卵巢良性腫瘤血常規(guī)炎性指標(biāo)進(jìn)行分析研究,發(fā)現(xiàn)了能夠在一定程度上輔助提高CA125和HE4鑒別卵巢癌及早期卵巢癌的能力的血常規(guī)炎性指標(biāo),提示血常規(guī)炎性指標(biāo)作為卵巢癌診斷標(biāo)志物具有一定的可行性,為新型卵巢癌標(biāo)志物的探索提供了新的思路,為卵巢癌的早期發(fā)現(xiàn)及早期診斷以及高危人群的篩查提供了新的研究思路及方法依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.31
【圖文】：

21圖 1. 上皮性卵巢癌的全基因組甲基化檢測分析結(jié)果曼哈頓圖（A）所有病例與對照組比較，（B）早期病例與對照組比較，（C）晚期病照組比較。分析了超過 485,000 個(gè) CpG 位點(diǎn)。X 軸代表 CpG 位點(diǎn)，而 y 軸代表 P 值數(shù)（-log10（P value））。紅色水平線代表 P=1.0×10-4。

上皮來源的漿液性卵巢癌與健康對照組間差異顯著的甲基化位點(diǎn)的火山圖

37圖 3 第二階段的驗(yàn)證研究中具有顯著差異的甲基化位點(diǎn)。熱圖列出了從驗(yàn)證研究中分析得出的具有顯著差異的 CpG，總病例組與總對照組（Total），早期病例組與對照組(Early stage），晚期病例組與對照(Advancedstage），漿液性癌與對照組(Serous),子宮內(nèi)膜樣癌與對照組(Endometrioid)，粘液性癌與對照組(Mucinous),46 個(gè)差異甲基化位點(diǎn)的順序排列按照總病例組與對照組的 FDR 值進(jìn)行排列。

本文編號：2754032