【摘要】：四溴雙酚A(Tetrabromobisphenol A,TBBPA)是具有內(nèi)分泌干擾毒性的環(huán)境新型潛在的擬增熱點POPs,是目前應用最多的,產(chǎn)量較高的一種小分子溴系阻燃劑,廣泛用于各種電子電器產(chǎn)品、紡織品、泡沫家具及建筑材料等。TBBPA不僅暴露人群廣泛(包括職業(yè)和普通人群),而且暴露方式多樣(包括皮膚接觸、飲食攝取、空氣吸入),在很多自然環(huán)境、社會環(huán)境和多種生物有機體中普遍檢出,對環(huán)境和生物健康產(chǎn)生嚴重而持久的影響。TBBPA現(xiàn)已被國際癌癥研究署(International Agency for Research on Cancer,IARC)在2016年列為可能的2A級致癌物,其暴露增加子宮內(nèi)膜癌(endometrial cancer,EC)的發(fā)病風險,但目前關于TBBPA誘發(fā)子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的腫瘤機制尚無明確認識急需深入探究。腫瘤包括實質(zhì)與間質(zhì)。腫瘤的間質(zhì)在腫瘤微環(huán)境中以癌相關成纖維細胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)和腫瘤相關巨噬細胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)為代表的多種輔助性細胞分泌細胞因子的形式協(xié)助實體瘤的構建,CAFs是由腫瘤分泌因子誘導的骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)等多種干細胞分化形成,BMSCs能夠遷移至實體瘤部位補充腫瘤微環(huán)境中被消耗的CAFs。目前,關于環(huán)境污染物的腫瘤效應主要集中在對實體腫瘤的研究,關于腫瘤微環(huán)境的報道比較少,因此本研究基于TBBPA誘導BMSCs分化為CAFs,建立腫瘤微環(huán)境體系,探究TBBPA暴露促進人子宮內(nèi)膜癌細胞增殖的效應和潛在的分子機理,豐富和完善環(huán)境因子的腫瘤效應評價體系。研究內(nèi)容包括以下幾部分:1.人體血液檢出水平的TBBPA(1.00E-9~1.00E-7 mol/L)暴露BMSCs 6 d和12 d后,實時熒光定量PCR實驗檢測BMSCs的標志物Thy-1和TBBPA誘導的BMSCs分化為CAFs的標志物a-SMA、Fap、PDGFRA轉錄水平的情況。研究結果證明,TBBPA暴露明顯降低了BMSCs標志物Thy-1在mRNA水平的表達,而上調(diào)CAFs分化標志物a-SMA和Fap mRNA的表達。這一結果在Western blotting檢測a-SMA、Fap蛋白含量的實驗和免疫熒光定位檢測a-SMA的實驗中得到驗證,表明人體血液含量的TBBPA暴露能夠誘導BMSCs分化為CAFs。2.為了進一步探討TBBPA暴露是否通過誘導BMSCs定向分化為CAFs調(diào)控腫瘤微環(huán)境,進而促進子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖,我們采用TBBPA誘導的CAFs構建了3種CAFs-EC間接暴露模型。研究收集了TBBPA暴露BMSCs分化后的CAFs上清,并配制成上清含量為25%和50%的條件培養(yǎng)基暴露Ishikawa細胞。CAFs上清對子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖效應分別被MTT實驗、軟瓊脂克隆形成實驗和集落形成實驗檢測。結果表明TBBPA暴露后的CAFs的上清上調(diào)了Ishikawa細胞的相對克隆率、集落形成率和細胞存活率,證明BMSCs被TBBPA暴露后通過分泌細胞因子促進子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖。3.為了證明TBBPA暴露誘導的CAFs通過旁分泌和細胞直接接觸作用促進子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖,我們構建了2種CAFs-EC直接暴露模型,通過檢測CAFs旁分泌作用的transwell共培養(yǎng)實驗和檢測CAFs-EC直接接觸作用的共培養(yǎng)實驗探究Ishikawa細胞的增殖情況。結果顯示,CAFs與Ishikawa細胞進行transwell共培養(yǎng)后,Ishikawa細胞增殖率明顯升高,表明TBBPA誘導的CAFs通過旁分泌作用促進子宮內(nèi)膜癌的增殖。此外CAFs和Ishikawa細胞共同培養(yǎng)于24孔板后,Ishikawa細胞增殖率顯著升高,表明TBBPA誘導的CAFs通過細胞直接接觸作用促進子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖。4.綜上研究表明,由TBBPA暴露介導的BMSCs通過分化為CAFs促進子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖,實驗進一步探究TBBPA暴露誘導BMSCs分化的分子毒性機理。由于BMSCs分化的調(diào)控與PI3K/Akt、NFκB和TGF-β/Smad通路有關,因此我們檢測了這些通路的靶點蛋白TGF-β受體、p-Smad2/3、Smad2/3、p-AKT和NFκB。研究發(fā)現(xiàn),在TBBPA暴露誘導的CAFs中,TGF-β受體和p-Smad2/3的表達明顯上調(diào),表明TBBPA可能通過激活TGF-β/Smad通路,促進BMSCs分化為CAFs。為了驗證TBBPA是否通過介導TGF-β/Smad通路誘導BMSCs的分化,我們采用TGF-β受體的抑制劑SB431542和TBBPA共同處理BMSCs,結果表明當TGF-β受體被抑制后,p-Smad2/3和CAFs分化標志物a-SMA、Fap的蛋白表達水平均明顯降低。本部分研究表明TBBPA通過介導TGF-β/Smad通路激活p-Smad2/3的活性,進而誘導BMSCs分化為CAFs。以上研究表明,TBBPA暴露誘導BMSCs分化為CAFs,通過CAFs的旁分泌和細胞直接接觸作用促進子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖,這是通過TBBPA激活BMSCs的TGF-β/Smad通路完成的。本研究探討了TBBPA通過調(diào)控BMSCs分化,影響腫瘤微環(huán)境變化,從而促進子宮內(nèi)膜癌細胞增殖的毒性機理,補充和完善了環(huán)境毒性因子TBBPA的腫瘤效應評價體系。
【學位授予單位】：山西大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.33
【圖文】：

圖 1.1 TBBPA 分子結構式1.1 The molecular structural formula of T發(fā)展最多的一種溴系阻燃劑（約 60%

圖 1.2 甲狀腺素分子結構式[22]Figure 1.2 The molecular structural formula of thyroid hormo人員發(fā)現(xiàn) TBBPA 是通過增強雌激素活性內(nèi)分泌功胞暴露于濃度梯度的TBBPA后，發(fā)現(xiàn)濃度為10-6M T素活性顯著高于天然雌激素E2的活性，特別地暴露

圖 1.3 腫瘤微環(huán)境的細胞組成[46]Figure 1.3 The cells in tumor microenvironment質(zhì)干細胞向腫瘤靶向轉移中胚層的間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells, M

【參考文獻】

相關期刊論文 前9條

1 董熠;姚頤;宋啟斌;李營歌;;癌相關成纖維細胞的分化來源[J];國際腫瘤學雜志;2017年02期

2 許晶;管曉翔;;腫瘤微環(huán)境的組成及其在腫瘤轉移中的作用[J];癌癥進展;2014年02期

3 晉藝聰;劉麗華;羅賢麗;焦玉國;;四溴雙酚-A的降解性和毒性研究進展[J];中央民族大學學報(自然科學版);2010年02期

4 張亞蘭;朱靜;田杰;劉官信;張曉萍;鄧兵;;骨髓間充質(zhì)干細胞與膠質(zhì)瘤細胞非接觸共培養(yǎng)后相關生物學特性分析[J];第三軍醫(yī)大學學報;2010年07期

5 徐國榮;熊樹華;羅瓊;舒寬勇;;子宮內(nèi)膜癌年輕化趨勢的初步探討[J];中國誤診學雜志;2009年24期

6 劉思景;郭偉韜;王輝;;骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化信號通路的研究進展[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志;2009年14期

7 王曉翊;盧實;王澤華;;卵巢癌相關成纖維細胞對上皮性卵巢癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲活性的影響[J];中國婦幼保健;2008年33期

8 武劍;鄧紅;;癌相關成纖維細胞與腫瘤細胞相互作用對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響[J];浙江大學學報(醫(yī)學版);2008年02期

9 彭芝蘭;子宮內(nèi)膜癌診治進展[J];實用醫(yī)院臨床雜志;2005年02期

本文編號：2749907