【摘要】：目的卵巢癌是全球婦科腫瘤中死亡率最高的惡性腫瘤。漿液性卵巢癌為上皮性卵巢癌最常見的類型。其發(fā)病機(jī)制仍未明確。流行病學(xué)及遺傳學(xué)分析發(fā)現(xiàn)卵巢癌的發(fā)生與基因的突變有關(guān),同時(shí)還伴隨著PI3K/AKT/mTOR、RAS/RAF/MEK等通路的變化。近年來,神經(jīng)酰胺合成酶家族(Ceramide Synthases)在腫瘤領(lǐng)域的研究越來越受到關(guān)注。神經(jīng)酰胺合成酶6(Ceramide Synthase 6,CerS6)主要合成C16:0-神經(jīng)酰胺并參與了多種腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。我們通過數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)CerS6在漿液性卵巢癌組織中明顯高表達(dá),且CerS6的表達(dá)量與漿液性卵巢癌預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。本文旨在研究CerS6在卵巢組織中的表達(dá)情況及其在漿液性卵巢癌細(xì)胞中的功能并對(duì)其相應(yīng)的作用機(jī)制進(jìn)行初步探究。方法1、利用數(shù)據(jù)庫分析及免疫組化法檢測(cè)CerS6在漿液性卵巢癌組織中的表達(dá)以及高表達(dá)CerS6與臨床病理特征之間的關(guān)系,以評(píng)估CerS6的臨床意義;2、在體內(nèi)外層面利用CCK-8、克隆形成、裸鼠異體皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)、Transwell試驗(yàn)、劃痕試驗(yàn)、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和Western Blot等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CerS6對(duì)漿液性卵巢癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的的影響;3、利用Gene Set Enrichment Analysis(GSEA)和R(R語言)進(jìn)行富集分析,利用高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-seq)比較了特異性干擾CerS6前后漿液性卵巢癌OVCAR8的轉(zhuǎn)錄組變化,并將差異表達(dá)的基因進(jìn)行Gene Ontology(GO)分析和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)富集分析;4、利用Western Blot法比較了干擾CerS6前后漿液性卵巢癌OVCAR3和OVCAR8細(xì)胞的AKT/mTOR/4EBP1信號(hào)通路中的相關(guān)分子活化情況。結(jié)果1、數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果顯示CerS6在上皮性卵巢癌中表達(dá)明顯高于良性卵巢組織,并且CerS6的表達(dá)與卵巢癌的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。免疫組化結(jié)果顯示CerS6在漿液性卵巢癌中高表達(dá),且與漿液性卵巢癌的病理分級(jí)和臨床分期密切相關(guān)。2、干擾CerS6后,明顯抑制了漿液性卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,并促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡能力,裸鼠體內(nèi)皮下成瘤實(shí)驗(yàn)顯示干擾CerS6后,顯著抑制了裸鼠皮下瘤的大小及生長(zhǎng);而過表達(dá)CerS6后,顯著促進(jìn)了漿液性卵巢癌細(xì)胞的增殖和遷移能力;3、GSEA分析和R語言分析結(jié)果顯示在干擾CerS6后差異基因與DNA復(fù)制過程及細(xì)胞周期最相關(guān),高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果顯示,特異性干擾CerS6后可以顯著影響漿液性卵巢癌的細(xì)胞周期;干擾CerS6后的漿液性卵巢癌OVCAR3和OVCAR8細(xì)胞G2/M期的細(xì)胞比例增加,而對(duì)G1期無明顯影響,并且發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期G2/M期相關(guān)蛋白(CDK1和CCNB1)的表達(dá)量顯著減少;4、Western Blot結(jié)果顯示干擾CerS6后,p-AKT、p-mTOR、p-4EBP1的表達(dá)量顯著減少,而AKT、mTOR、4EBP1的表達(dá)量無明顯變化。結(jié)論1、CerS6在上皮性卵巢癌組織中高表達(dá),并且CerS6的高表達(dá)與漿液性卵巢癌的病理等級(jí)與臨床分期密切相關(guān),因此,CerS6有望成為漿液性卵巢癌一個(gè)新的預(yù)后標(biāo)志物;2、干擾CerS6能抑制漿液性卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲、促進(jìn)其凋亡并且影響細(xì)胞周期G2/M期;3、CerS6可能通過激活A(yù)KT/mTOR/4EBP1通路促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞發(fā)揮增殖,侵襲轉(zhuǎn)移等功能。CerS6有望成為漿液性卵巢癌新的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.31
【圖文】：

CerS6結(jié)構(gòu)域

包裝質(zhì)粒圖譜（PMD2.G，psPAX2）

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7 李s

本文編號(hào)：2742212