發(fā)布時(shí)間：2020-07-03 03:37

【摘要】：目的:應(yīng)用GPER特異性拮抗劑G15作用于ER陽(yáng)性的Ishikawa細(xì)胞、ER弱陽(yáng)性的HEC-1A及ER陰性的KLE細(xì)胞三種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系,探討其對(duì)各種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲遷移的影響及細(xì)胞相關(guān)侵襲遷移蛋白水平的變化。方法:基于前期實(shí)驗(yàn),本課題組前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)G15對(duì)ER表達(dá)弱陽(yáng)性及陰性的子宮內(nèi)膜癌的增殖有顯著的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)階段主要關(guān)注腫瘤的侵襲和遷移。1細(xì)胞培育:子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa和HEC-1A以含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng);KLE細(xì)胞株,以含有10%胎牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)基培養(yǎng)。2劃痕愈合試驗(yàn)檢測(cè)不同濃度G15作用不同時(shí)間后三種細(xì)胞遷移能力的變化。3 Transwell遷移侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度G15作用24h時(shí)間后三種細(xì)胞侵襲和遷移能力的變化。4 Western Blot方法檢測(cè)檢測(cè)三種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中GPER、MMP9及ERK蛋白表達(dá)水平的變化。結(jié)果:1.劃痕愈合實(shí)驗(yàn)顯示:G15對(duì)E2作用下的HEC-1A、KLE細(xì)胞遷移能力的抑制作用隨濃度的增加,時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增大,而G15對(duì)E2作用下的Ishikawa細(xì)胞遷移能力的抑制作用較低。2.Transwell實(shí)驗(yàn)小室:E2促進(jìn)三種子宮內(nèi)膜癌侵襲及遷移能力增強(qiáng),在HEC-1A和KLE細(xì)胞中,在不同濃度G15(0mol/L、10~(-9)mol/L、10~(-7)mol/L、10~(-5)mol/L)作用下,遷移能力依次降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而在Ishikawa中,遷移抑制能力較低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.Western Blot方法檢測(cè)GPER特異性拮抗劑G15對(duì)E2作用下的三種細(xì)胞中GPER、ERK、MMP9蛋白表達(dá)的影響。用E2(10~(-6)mol/L)、E2(10~(-6)mol/L)+G15(10~(-5)mol/L)分別處理三種細(xì)胞48h。結(jié)果顯示:GPER、ERK、MMP9蛋白在三種細(xì)胞中均有表達(dá)。在HEC-1A、KLE細(xì)胞中,相較對(duì)照組,E2可以上調(diào)GPER、ERK、MMP9蛋白的表達(dá)。G15可以顯著抑制E2引起的HEC-1A、KLE細(xì)胞中GPER、ERK、MMP9蛋白的上調(diào)。而在Ishikawa細(xì)胞中,G15只能下調(diào)GPER的表達(dá),而對(duì)ERK、MMP9蛋白的表達(dá)無影響,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.E2通過活化膜性雌激素受體GPER促進(jìn)細(xì)胞侵襲及遷移,且在HEC-1A及KLE細(xì)胞中,即II型子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中作用明顯。2.G15對(duì)E2作用下的三種細(xì)胞的遷移能力均有抑制作用,且對(duì)HEC-1A和KLE細(xì)胞遷移能力的抑制作用呈劑量-時(shí)間依賴關(guān)系。3.在II型子宮內(nèi)膜癌中,GPER特異性拮抗劑G15能夠明顯抑制GPER介導(dǎo)的GPER/ERK/MMP9信號(hào)通路。因此,GPER特異性拮抗劑G15有可能成為治療II型子宮內(nèi)膜癌的新靶向藥物。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33
【圖文】：

劃痕愈合實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?br>

48h48hE2+G15(10-5mol/L)0h E2+G15(10-7mol/L)0h E2+G15(10-9mol/L)0h48h 48h 48h

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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