【摘要】：背景細(xì)菌脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性細(xì)菌中細(xì)胞壁的有毒成分,廣泛存在于人和動物的消化道中,母體孕期暴露LPS易導(dǎo)致宮內(nèi)生長受限(IUGR)等不良妊娠結(jié)局。法尼醇X受體(Farnesoid X,FXR)是一種核受體,在體內(nèi)膽汁酸平衡調(diào)節(jié)中起重要作用,在人類和嚙齒動物胎盤中都有表達(dá)。最近有研究表明,FXR具有抗炎作用。奧貝膽酸(Obeticholic acid,OCA)是一種合成的FXR受體激動劑,目前正處在對非酒精性脂肪肝炎治療的二期臨床試驗當(dāng)中。目的本次研究目的在于探明奧貝膽酸(OCA)是否能保護細(xì)菌脂多糖(LPS)誘發(fā)的宮內(nèi)生長受限(IUGR)及胎鼠死亡,并初步闡明其機制。方法本次研究主要包括以下兩個實驗。實驗一:為了研究OCA預(yù)處理對LPS誘發(fā)的死胎和IUGR的影響,研究將48只ICR小鼠在受孕第13(GD13)天按體重隨機平均分為四組,LPS和OCA+LPS組于GD15到GD 17天每天通過腹腔注射給予100μg/kg的LPS。OCA和OCA+LPS組孕鼠GD13至GD17天每天給予5mg/kg的OCA灌胃處理。所有孕鼠于孕18天(GD18)取材,呼吸麻醉后摘除眼球采集母鼠血液,稱量記錄子宮連胎重。記錄孕鼠子代每窩的活胎數(shù)目,死胎數(shù)目和吸收胎數(shù)量。子代活胎記錄測量身長和體重。實驗二:為了研究OCA預(yù)處理對LPS誘導(dǎo)炎癥的介導(dǎo)的IUGR和死胎的影響,將ICR小鼠在受孕第13(GD13)天按體重隨機平均分為6組,OCA和OCA+LPS組孕鼠GD13至GD15天每天給予5mg/kg的OCA灌胃處理。LPS和OCA+LPS組于GD15給予100μg/kg的LPS腹腔注射處理,LPS處理后分別于1小時(OCA+LPS1h)和6小時(OCA+LPS6h)取材。收集母體血清和胎鼠羊水以檢測TNF-α和IL-10水平。收集胎盤用于實時RT-PCR和免疫印跡分析。收集一些胎盤用于免疫組織化學(xué)分析。結(jié)果從動物模型的結(jié)果來看,OCA本身沒有提高胎鼠的死亡率,LPS處理組12只孕鼠每窩都有死胎的發(fā)生。與單純LPS組相比,OCA預(yù)處理使每窩胎鼠死亡數(shù)從3.3降到0.4,同時OCA預(yù)處理使胎鼠體重從1.15 g增加到1.26 g。OCA預(yù)處理LPS組IUGR的發(fā)生率為80%,而OCA+LPS組的IUGR發(fā)生率降至40%以下。結(jié)果顯示OCA預(yù)處理減輕了LPS誘導(dǎo)的IUGR胎兒死亡的發(fā)生率。OCA處理后FXR蛋白由胎盤迷路層的血竇型滋養(yǎng)巨細(xì)胞的胞漿中大量轉(zhuǎn)位入核,相關(guān)靶基因水平上調(diào)或下調(diào),提示OCA激活了胎盤FXR信號。OCA預(yù)處理抑制LPS誘發(fā)的母體血清和羊水中的TNF-α的分泌,抑制LPS誘導(dǎo)的促炎細(xì)胞因子和趨化因子上調(diào)。進一步分析孕鼠血清羊水中抗炎因子IL-10的水平,結(jié)果顯示OCA處理組的孕鼠母體血清,羊水和胎盤中抗炎細(xì)胞因子IL-10水平升高。檢測炎癥相關(guān)NF-κB信號,結(jié)果顯示,LPS處理后胎盤IκB的蛋白水平顯著降低,OCA預(yù)處理減弱了LPS誘導(dǎo)的胎盤IκB的磷酸化。LPS處理后胎盤細(xì)胞核NF-κB p65和p50亞基的蛋白水平顯著增加。免疫組織化學(xué)實驗結(jié)果顯示,OCA預(yù)處理顯著減弱了胎盤迷路層的血竇型滋養(yǎng)巨細(xì)胞中LPS誘發(fā)的NF-κB p65和p50亞基的核轉(zhuǎn)位。綜上實驗結(jié)果顯示,OCA預(yù)處理抑制LPS誘導(dǎo)的胎盤NF-κB信號的活化。結(jié)論OCA可能通過激活FXR信號保護LPS誘導(dǎo)的IUGR和胎鼠死亡。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R714.5

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本文編號：2730582