【摘要】：目的:宮頸癌是最常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一。近年來,由于人們現(xiàn)代生活結(jié)構(gòu)及環(huán)境的改變等諸多因素,宮頸癌發(fā)病率表現(xiàn)出逐年上升趨勢(shì)。LETMD1又名人宮頸癌基因(HCCR),大量研究表明LETMD1與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān),在腫瘤標(biāo)志物方面也扮演著重要角色,其作為一個(gè)癌基因被證實(shí)在宮頸癌及宮頸癌細(xì)胞系中均有過度表達(dá),但具體調(diào)控機(jī)制尚未明確。MicroRNA(miRNA)是一類長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的小型非編碼RNA,其廣泛存在于真核生物中,并在多種生理病理過程中發(fā)揮著不可忽視的作用。MiR-494在人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中被首次發(fā)現(xiàn),目前越來越多的研究發(fā)現(xiàn)miR-494廣泛參與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程,關(guān)于miR-494對(duì)宮頸癌發(fā)生發(fā)展的影響雖已有少量研究報(bào)道,但其潛在機(jī)制仍需要進(jìn)一步探索研究。本研究利用生物信息學(xué)分析、RT-qPCR、Western blot、雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)等,探討靶向于LETMD1的miR-494在宮頸癌發(fā)病機(jī)制中的作用。方法:1、首先我們利用RT-qPCR和Western-blot檢測(cè)30例宮頸癌組織及30例正常宮頸組織中miR-494和LETMD1的含量,分析二者之間的相關(guān)性及其與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系;2、將HeLa細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miR-494 mimics和miR-494 inhibitor及其各自陰性對(duì)照,并檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中miR-494與LETMD1的表達(dá)情況;3、利用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)miR-494與LETMD1的靶向關(guān)系,并進(jìn)一步通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)兩者間的靶向性調(diào)控;4、細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)及降表達(dá)miR-494對(duì)HeLa細(xì)胞增殖的影響;Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)及降表達(dá)miR-494對(duì)HeLa細(xì)胞遷移和侵襲的影響。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA),以P0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.與正常宮頸組織相比,miR-494在宮頸癌組織中表達(dá)明顯降低。LETMD1在宮頸癌組織中表達(dá)明顯升高,兩者表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)(P0.05),且miR-494的含量與腫瘤患者FIGO分期呈明顯負(fù)相關(guān)(P0.05)。2.對(duì)比轉(zhuǎn)染mimics NC,轉(zhuǎn)染miRNA-494 mimics時(shí)LETMD1mRNA及蛋白水平明顯下降(P0.05);對(duì)比轉(zhuǎn)染inhibitor NC,轉(zhuǎn)染miRNA-494 inhibitor時(shí)LETMD1 mRNA及蛋白水平明顯升高(P0.05)。3.生物信息學(xué)預(yù)測(cè)LETMD1為miR-494的靶基因,雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)進(jìn)一步證實(shí)miR-494直接作用于LETMD1 mRNA的3’UTR。4.細(xì)胞克隆形成試驗(yàn)結(jié)果顯示過表達(dá)miR-494可抑制HeLa細(xì)胞的增殖(P0.05),Transwell實(shí)驗(yàn)證實(shí)過表達(dá)miR-494可抑制HeLa細(xì)胞的遷移和侵襲(P0.05)。結(jié)論:宮頸癌患者中,miR-494表達(dá)與患者FIGO分期明顯相關(guān),miR-494可能通過靶向作用LETMD1進(jìn)而抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.33

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