【摘要】：目的:鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(Di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)是一種環(huán)境內分泌干擾物,它可以增加產品的可塑性和彈性,常以增塑劑的形式廣泛用于塑料制品、食品包裝、醫(yī)療及個人理護用品。人群在日常生活中主要通過消化道、吸入和皮膚而非職業(yè)性接觸DEHP。雖然DEHP只顯示較低毒性,但對于其內分泌干擾作用最近得到了廣泛關注。甲狀腺是內分泌系統(tǒng)中的一個重要器官,它通過產生甲狀腺激素來調節(jié)機體相關功能。有些許研究表明暴露DEHP會導致甲狀腺功能異常,但其機制尚不清晰。我們已知妊娠期母體甲狀腺功能減退會對胎兒產生不良影響,而也有相關文獻討論母體孕哺期暴露DEHP會對兒童甲狀腺產生影響。為了探討妊娠期和哺乳期母體DEHP暴露與子代甲狀腺功能之間的關系,也為了判斷DEHP如何損傷甲狀腺激素功能,本研究建立了母鼠孕哺期暴露DEHP的模型,檢測了甲狀腺激素合成的相關蛋白和脫碘化酶家族的蛋白和基因水平。實驗方法:將懷孕的雌性Wistar大鼠隨機分為四組:以DEHP 0mg/kg/day、30mg/kg/day、300mg/kg/day和750mg/kg/day的暴露劑量,將相應濃度的DEHP溶于玉米油溶液后,從妊娠第一天至仔鼠出生后第二十一天進行灌胃染毒。在仔鼠PND7、PND 14、PND 21和PND 28時間點時,取仔鼠血清檢測甲狀腺激素水平,在仔鼠PND 7時間點時,取仔鼠甲狀腺進行透射電鏡掃描,并在仔鼠PND 14和PND 21時間點時,通過Real time PCR和Western blot檢測甲狀腺激素合成的相關蛋白和脫碘化酶家族的蛋白和基因水平。結果:1、通過檢測血清THs水平,與對照組相比,在PND 7和PND 14,TT_4顯著下降,TSH出現顯著升高(P0.05);PND 21時DEHP 300mg/kg/d劑量組和750mg/kg/d劑量組與對照組相比,在TT_4和TSH水平上出現相同趨勢(P0.05),而DEHP30mg/kg/d劑量組只有升高而差異沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在PND 28時,四組之間TSH水平無明顯改變,TT_4出現下降趨勢,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。血清TT_3水平除了PND 14時間點的DEHP 30mg/kg/d劑量組和DEHP 750mg/kg/d劑量組與對照組相比有明顯下降以外(P0.05),PND 7、PND 21、PND 28的所有四個劑量組以及PND 14的DEHP 300mg/kg/d劑量組均無明顯改變。2、通過電鏡觀察超微結構,發(fā)現隨著DEHP暴露劑量的增高,甲狀腺濾泡上皮細胞破壞嚴重,其游離緣處微絨毛幾乎全部斷裂;細胞核形態(tài)極其不規(guī)則,出現破裂,核周圍出現核間隙;細胞質內粗面內質網出現顯著擴張,呈現池狀,喪失原有基本形態(tài);線粒體內嵴模糊,斷裂,形態(tài)呈明顯腫脹,變成空泡狀,大量消失;胞質出現大量溶酶體,其他細胞器基本消失,視野中基本為空泡結構。3、Real time PCR結果顯示,DEHP750mg/kg/d劑量組與對照組相比,TTF-1、NIS、PAX-8在PND 14和PND 21均明顯上調(P0.05)。TTF-1和NIS的DEHP 300mg/kg/d劑量組在PND 14和PND 21也出現了明顯上調(P0.05)。DEHP 30mg/kg/d劑量組NIS、PAX-8、TTF-1基因在PND 14和PND 21只有上調趨勢,差異無顯著性,不具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。Western結果顯示,NIS在PND 14時DEHP 750mg/kg/d和300mg/kg/d劑量組與對照組相比明顯上調(P0.05),DEHP 30mg/kg/d劑量組只有上調趨勢而差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);在PND 21,三個DEHP暴露劑量組均有明顯上調趨勢(P0.05)。PAX-8和TTF-1在PND 14時DEHP 750mg/kg/d劑量組與對照組相比明顯上調(P0.05);DEHP 300mg/kg/d和30mg/kg/d劑量組只有上調趨勢而差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);在PND 21,DEHP 750mg/kg/d和300mg/kg/d劑量組顯著上調(P0.05),DEHP 30mg/kg/d劑量組只有上調趨勢而差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、在PND14和PND 21,Real time PCR和Western bolt結果顯示,TPO的基因和蛋白表達水平在DEHP 750mg/kg/d劑量組中與對照組相比顯著上調(P0.05)。DEHP30mg/kg/d和300mg/kg/d劑量組在PND 14和PND 21也表現出了上升趨勢,但差異并無統(tǒng)計學意義(P0.05)。5、Real time PCR結果顯示,Dio1在PND 14的DEHP30mg/kg/d劑量組與對照組相比出現升高趨勢而差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),在PND 14和PND 21的其他各DEHP劑量組均有顯著上升趨勢(P0.05)。Dio2和Dio3在各DEHP劑量組的PND 14和PND 21均出現了明顯的變化(P0.05),區(qū)別在于Dio2表現為上調趨勢而Dio3表現為下調趨勢。結論:1、孕哺期暴露DEHP損害仔鼠甲狀腺濾泡上皮細胞超微結構,可造成仔鼠甲狀腺功能紊亂。2、孕哺期暴露DEHP可通過上調仔鼠甲狀腺功能蛋白TTF-1、PAX-8、NIS、TPO進一步影響血清THs水平。3、孕哺期暴露DEHP可通過上調仔鼠Dio1、Dio2和下調Dio3造成仔鼠甲狀腺功能紊亂。
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R715.3
【圖文】：

10圖 3.1，DEHP 對各時間點各組仔鼠血清 TT4、TT3、TSH 水平的影響注：圖中*，與 DEHP 0 mg/kg/day 劑量組相比，P < 0.05。PND 7，n=12，PND 14、PND 21、PND28，n=16

形態(tài)出現明顯腫脹，數量開始減少甚至出現巨大線粒體；胞質中溶酶體數量開始增多（圖3.2C）。在 DEHP 750mg/kg/d 劑量組中，甲狀腺濾泡上皮細胞破壞嚴重，其游離緣處微絨毛幾乎全部斷裂；細胞核形態(tài)極其不規(guī)則，出現破裂，核周圍出現核間隙；細胞質內粗面內質網出現顯著擴張，呈現池狀，喪失原有基本形態(tài)；線粒體內嵴模糊，斷裂，形態(tài)呈明顯腫脹，變成空泡狀，大量消失；胞質出現大量溶酶體，其他細胞器基本消失，視野中基本為空泡結構（圖 3.2D）。

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 楊曉冬;;PVC醫(yī)療器械中增塑劑DEHP的安全性評價[J];中國醫(yī)療器械雜志;2012年02期

本文編號：2723691