【摘要】：目的:鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(Di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)是一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,它可以增加產(chǎn)品的可塑性和彈性,常以增塑劑的形式廣泛用于塑料制品、食品包裝、醫(yī)療及個(gè)人理護(hù)用品。人群在日常生活中主要通過(guò)消化道、吸入和皮膚而非職業(yè)性接觸DEHP。雖然DEHP只顯示較低毒性,但對(duì)于其內(nèi)分泌干擾作用最近得到了廣泛關(guān)注。甲狀腺是內(nèi)分泌系統(tǒng)中的一個(gè)重要器官,它通過(guò)產(chǎn)生甲狀腺激素來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體相關(guān)功能。有些許研究表明暴露DEHP會(huì)導(dǎo)致甲狀腺功能異常,但其機(jī)制尚不清晰。我們已知妊娠期母體甲狀腺功能減退會(huì)對(duì)胎兒產(chǎn)生不良影響,而也有相關(guān)文獻(xiàn)討論母體孕哺期暴露DEHP會(huì)對(duì)兒童甲狀腺產(chǎn)生影響。為了探討妊娠期和哺乳期母體DEHP暴露與子代甲狀腺功能之間的關(guān)系,也為了判斷DEHP如何損傷甲狀腺激素功能,本研究建立了母鼠孕哺期暴露DEHP的模型,檢測(cè)了甲狀腺激素合成的相關(guān)蛋白和脫碘化酶家族的蛋白和基因水平。實(shí)驗(yàn)方法:將懷孕的雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為四組:以DEHP 0mg/kg/day、30mg/kg/day、300mg/kg/day和750mg/kg/day的暴露劑量,將相應(yīng)濃度的DEHP溶于玉米油溶液后,從妊娠第一天至仔鼠出生后第二十一天進(jìn)行灌胃染毒。在仔鼠PND7、PND 14、PND 21和PND 28時(shí)間點(diǎn)時(shí),取仔鼠血清檢測(cè)甲狀腺激素水平,在仔鼠PND 7時(shí)間點(diǎn)時(shí),取仔鼠甲狀腺進(jìn)行透射電鏡掃描,并在仔鼠PND 14和PND 21時(shí)間點(diǎn)時(shí),通過(guò)Real time PCR和Western blot檢測(cè)甲狀腺激素合成的相關(guān)蛋白和脫碘化酶家族的蛋白和基因水平。結(jié)果:1、通過(guò)檢測(cè)血清THs水平,與對(duì)照組相比,在PND 7和PND 14,TT_4顯著下降,TSH出現(xiàn)顯著升高(P0.05);PND 21時(shí)DEHP 300mg/kg/d劑量組和750mg/kg/d劑量組與對(duì)照組相比,在TT_4和TSH水平上出現(xiàn)相同趨勢(shì)(P0.05),而DEHP30mg/kg/d劑量組只有升高而差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在PND 28時(shí),四組之間TSH水平無(wú)明顯改變,TT_4出現(xiàn)下降趨勢(shì),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。血清TT_3水平除了PND 14時(shí)間點(diǎn)的DEHP 30mg/kg/d劑量組和DEHP 750mg/kg/d劑量組與對(duì)照組相比有明顯下降以外(P0.05),PND 7、PND 21、PND 28的所有四個(gè)劑量組以及PND 14的DEHP 300mg/kg/d劑量組均無(wú)明顯改變。2、通過(guò)電鏡觀察超微結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)隨著DEHP暴露劑量的增高,甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞破壞嚴(yán)重,其游離緣處微絨毛幾乎全部斷裂;細(xì)胞核形態(tài)極其不規(guī)則,出現(xiàn)破裂,核周?chē)霈F(xiàn)核間隙;細(xì)胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)出現(xiàn)顯著擴(kuò)張,呈現(xiàn)池狀,喪失原有基本形態(tài);線粒體內(nèi)嵴模糊,斷裂,形態(tài)呈明顯腫脹,變成空泡狀,大量消失;胞質(zhì)出現(xiàn)大量溶酶體,其他細(xì)胞器基本消失,視野中基本為空泡結(jié)構(gòu)。3、Real time PCR結(jié)果顯示,DEHP750mg/kg/d劑量組與對(duì)照組相比,TTF-1、NIS、PAX-8在PND 14和PND 21均明顯上調(diào)(P0.05)。TTF-1和NIS的DEHP 300mg/kg/d劑量組在PND 14和PND 21也出現(xiàn)了明顯上調(diào)(P0.05)。DEHP 30mg/kg/d劑量組NIS、PAX-8、TTF-1基因在PND 14和PND 21只有上調(diào)趨勢(shì),差異無(wú)顯著性,不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。Western結(jié)果顯示,NIS在PND 14時(shí)DEHP 750mg/kg/d和300mg/kg/d劑量組與對(duì)照組相比明顯上調(diào)(P0.05),DEHP 30mg/kg/d劑量組只有上調(diào)趨勢(shì)而差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在PND 21,三個(gè)DEHP暴露劑量組均有明顯上調(diào)趨勢(shì)(P0.05)。PAX-8和TTF-1在PND 14時(shí)DEHP 750mg/kg/d劑量組與對(duì)照組相比明顯上調(diào)(P0.05);DEHP 300mg/kg/d和30mg/kg/d劑量組只有上調(diào)趨勢(shì)而差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在PND 21,DEHP 750mg/kg/d和300mg/kg/d劑量組顯著上調(diào)(P0.05),DEHP 30mg/kg/d劑量組只有上調(diào)趨勢(shì)而差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、在PND14和PND 21,Real time PCR和Western bolt結(jié)果顯示,TPO的基因和蛋白表達(dá)水平在DEHP 750mg/kg/d劑量組中與對(duì)照組相比顯著上調(diào)(P0.05)。DEHP30mg/kg/d和300mg/kg/d劑量組在PND 14和PND 21也表現(xiàn)出了上升趨勢(shì),但差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5、Real time PCR結(jié)果顯示,Dio1在PND 14的DEHP30mg/kg/d劑量組與對(duì)照組相比出現(xiàn)升高趨勢(shì)而差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在PND 14和PND 21的其他各DEHP劑量組均有顯著上升趨勢(shì)(P0.05)。Dio2和Dio3在各DEHP劑量組的PND 14和PND 21均出現(xiàn)了明顯的變化(P0.05),區(qū)別在于Dio2表現(xiàn)為上調(diào)趨勢(shì)而Dio3表現(xiàn)為下調(diào)趨勢(shì)。結(jié)論:1、孕哺期暴露DEHP損害仔鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),可造成仔鼠甲狀腺功能紊亂。2、孕哺期暴露DEHP可通過(guò)上調(diào)仔鼠甲狀腺功能蛋白TTF-1、PAX-8、NIS、TPO進(jìn)一步影響血清THs水平。3、孕哺期暴露DEHP可通過(guò)上調(diào)仔鼠Dio1、Dio2和下調(diào)Dio3造成仔鼠甲狀腺功能紊亂。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R715.3
【圖文】：

10圖 3.1，DEHP 對(duì)各時(shí)間點(diǎn)各組仔鼠血清 TT4、TT3、TSH 水平的影響注：圖中*，與 DEHP 0 mg/kg/day 劑量組相比，P < 0.05。PND 7，n=12，PND 14、PND 21、PND28，n=16

形態(tài)出現(xiàn)明顯腫脹，數(shù)量開(kāi)始減少甚至出現(xiàn)巨大線粒體；胞質(zhì)中溶酶體數(shù)量開(kāi)始增多（圖3.2C）。在 DEHP 750mg/kg/d 劑量組中，甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞破壞嚴(yán)重，其游離緣處微絨毛幾乎全部斷裂；細(xì)胞核形態(tài)極其不規(guī)則，出現(xiàn)破裂，核周?chē)霈F(xiàn)核間隙；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)出現(xiàn)顯著擴(kuò)張，呈現(xiàn)池狀，喪失原有基本形態(tài)；線粒體內(nèi)嵴模糊，斷裂，形態(tài)呈明顯腫脹，變成空泡狀，大量消失；胞質(zhì)出現(xiàn)大量溶酶體，其他細(xì)胞器基本消失，視野中基本為空泡結(jié)構(gòu)（圖 3.2D）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 楊曉冬;;PVC醫(yī)療器械中增塑劑DEHP的安全性評(píng)價(jià)[J];中國(guó)醫(yī)療器械雜志;2012年02期

本文編號(hào)：2723691