【摘要】：Adams-Oliver綜合征(Adams-Oliver Syndrome,AOS,MIM100300)是一種以先天性頭皮缺陷及遠(yuǎn)端肢體缺陷為主要特點(diǎn)的可累及神經(jīng)、眼部及心血管系統(tǒng)的先天性多系統(tǒng)發(fā)育異常疾病。根據(jù)其遺傳方式,可將其分為常染色體顯性遺傳和常染色體隱性遺傳,其中由DOCK6基因突變所致常染色體隱性遺傳的Adams-Oliver綜合征稱為Adams-Oliver綜合征2型(AOS2)。AOS2患者的主要臨床表現(xiàn)為末端肢體缺陷如手指(趾)缺如、指(趾)短、并指及甲發(fā)育不全和頭皮發(fā)育不全如頭頂部皮膚缺損、頭皮萎縮,部分患者可出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、眼部及心血管系統(tǒng)發(fā)育異常。DOCK6(dedicator of cytokinesis 6 gene)基因位于19號(hào)染色體19p13.2,由48個(gè)外顯子組成。DOCK6基因編碼的鳥嘌呤核苷酸交換因子(guanine nucleotide exchange factor,GEF)通過激活G蛋白家族的RaC1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1)和CDC42的過程中作為分子開關(guān)調(diào)節(jié)鳥苷二磷酸(GDP)與鳥苷三磷酸(GTP)相互轉(zhuǎn)換。RaC1與CDC42在調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的過程中起至關(guān)重要的作用,二者在G蛋白家族(Rho GTPases)中負(fù)責(zé)引導(dǎo)肌動(dòng)蛋白微絲聚合的信號(hào)蛋白,在許多基礎(chǔ)的的細(xì)胞過程中起到關(guān)鍵作用,比如增殖、極化、遷移、粘附、分泌、維持細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞分裂、凋亡及吞噬作用。DOCK6蛋白主要有2個(gè)功能域,DHR1和DHR2。DHR2功能域含有422個(gè)氨基酸并在物種進(jìn)化過程中高度保守,其主要功能是調(diào)控小G蛋白的GEF的活性。DHR2功能域的缺失可以導(dǎo)致DOCK6蛋白的功能失活,進(jìn)而產(chǎn)生AOS表型。在本研究中,我們對一個(gè)臨床初步診斷為AOS的家系進(jìn)行了基因檢測,新發(fā)現(xiàn)了DOCK6基因的2處突變:c.3063 CG(p.Y1021*)無義突變與c.4106+2TC剪接位點(diǎn)突變。兩處突變均為首次報(bào)道的新突變。Sanger DNA測序進(jìn)一步驗(yàn)證了2個(gè)突變分別遺傳自先證者父親和母親。隨后,我們對c.4106+2TC突變構(gòu)建了Minigene載體并通過RT-PCR技術(shù)研究c.4106+2TC剪接突變的影響,結(jié)果顯示:c.4106+2TC剪接位點(diǎn)突變導(dǎo)致內(nèi)含子中的隱蔽剪接位點(diǎn)被激活,致使內(nèi)含子32中有4bp的堿基滯留在第32外顯子及第33外顯子之間。額外的4bp的堿基導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄本的閱讀框架發(fā)生移碼,并在1374位氨基酸處提前出現(xiàn)終止密碼子,導(dǎo)致蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和異常。我們的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)DOCK6基因c.3063 CG(p.Y1021*)無義突變及c.4106+2TC剪接位點(diǎn)突變是該AOS家系的致病原因。c.3063 CG(p.Y1021*)無義突變提前產(chǎn)生了終止密碼子,導(dǎo)致產(chǎn)生了缺少一個(gè)N端1026氨基酸的異常蛋白,c.4106+2TC剪接位點(diǎn)突變導(dǎo)致內(nèi)含子中的隱蔽剪接位點(diǎn)被激活,致使內(nèi)含子32中有4bp的堿基滯留在第32外顯子及第33外顯子之間。額外的4bp的堿基導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄本的閱讀框架發(fā)生移碼,并在1374位氨基酸處提前出現(xiàn)終止密碼子。本次研究的結(jié)果擴(kuò)大了Adams-Oliver綜合征報(bào)告病例的數(shù)量和DOCK6基因突變的突變譜,可以作為產(chǎn)前診斷和遺傳咨詢的基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R596;R714.5
【圖文】：

圖 1 AOS 患者家系圖及患者臨床照片Pedigree of the family and clinical photographs of the patient

圖 2 HindⅢ及 XhoⅠ限制性內(nèi)切酶雙酶切后質(zhì)粒示意圖Figure2. Plasmid schematic map after double restriction endonuclease digestion of Hind III andXho I

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1 張開慧;高在芬;金瑞峰;律玉強(qiáng);高敏;蓋中濤;劉毅;;DOCK6基因突變引起的Adams-Oliver綜合征2型一家系臨床與遺傳學(xué)分析[A];第六屆CAAE腦電圖與神經(jīng)電生理大會(huì)會(huì)刊[C];2018年

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1 王兆坤;Adams-Oliver綜合征DOCK6基因突變檢測及功能研究[D];鄭州大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2723421