發(fā)布時(shí)間：2020-06-18 23:56

【摘要】：目的檢測(cè)層粘連蛋白-α5(Laminin,LN)在子癇前期(Preeclampsia,PE)胎盤組織中的定位和表達(dá),研究LN-α5在人滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR8/SVneo和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株HUVEC中的表達(dá)及對(duì)生物學(xué)功能的作用和影響,探討LN-α5在HTR8/SVneo細(xì)胞中對(duì)PI3K信號(hào)通路中的影響,為PE的診療依據(jù)提供新的思路。方法1.采用qRT-PCR、Western blotting和免疫熒光檢測(cè)PE和正常妊娠孕婦胎盤組織中LN-α5的定位和含量;2.將 LN-α5 小分子干擾 RNA(siLN-α5)轉(zhuǎn)染 HTR8/SVneo 和HUVEC細(xì)胞,并采用qRT-PCR、Western blotting和免疫熒光檢測(cè)其干擾效率;3.成功干擾LN-α5表達(dá)后,采用CCK-8法檢測(cè)HTR8/SVneo和HUVEC細(xì)胞的增殖能力;采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HTR8/SVneo和HUVEC細(xì)胞的侵襲能力;采用內(nèi)皮細(xì)胞血管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HUVEC細(xì)胞的血管管腔形成能力;4.采用缺氧/復(fù)氧處理HTR8/SVneo和HUVEC細(xì)胞以模仿PE中氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷,處理后采用qRT-PCR、Western blotting和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)HTR8/SVneo和HUVEC細(xì)胞中LN-α5的表達(dá)、定位及對(duì)細(xì)胞的增殖、侵襲、凋亡及血管管腔形成能力等生物學(xué)功能的影響。5.在 HTR8/SVneo 細(xì)胞中,采用 Western blotting 檢測(cè) LN-α5 在 PI3K/AKT信號(hào)通路中的作用。結(jié)果1.LN-α5在PE胎盤組織中的基因及蛋白表達(dá)較正常妊娠組明顯降低;2.干擾LN-α5的表達(dá)后可影響HTR8/SVneo和HUVEC細(xì)胞的生物學(xué)功能,包括降低了 HTR8/SVneo和HUVEC細(xì)胞的增殖和侵襲能力,降低了 HUVEC細(xì)胞的血管管腔形成能力;3.HTR8/SVneo和HUVEC細(xì)胞缺氧/復(fù)氧處理后細(xì)胞中LN-α5的表達(dá)明顯降低,并且HTR8/SVneo和HUVEC細(xì)胞的增殖和侵襲能力降低,凋亡功能增加,HUVEC細(xì)胞的血管管腔形成能力降低;4.在HTR8/SVneo細(xì)胞中,缺氧/復(fù)氧處理后降低了 PI3K/AKT信號(hào)通路中p-AKT和p-mTOR磷酸化的水平。結(jié)論LN-α5通過(guò)調(diào)控HTR8/SVneo和HUVEC中的生物學(xué)功能及對(duì)PI3K信號(hào)通路的影響,參與調(diào)控了 PE過(guò)程中胎盤的形成過(guò)程。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R714.244
【圖文】：

采用ｑＲＴ－ＰＣＲ技術(shù)檢測(cè)子癇前期和正常妊娠胎盤組織中ＬＮ－ａ５邋ｍＲＮＡ水平，逡逑結(jié)果顯示子癇前期胎盤組織中ＬＮ－ｃｔ５邋ｍＲＮＡ的表達(dá)較正常妊娠組明顯降低，差異逡逑具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｐ＜0．0５），見圖１。逡逑Ａ逡逑ｅ邋１．５１逡逑0＜邐—Ｉ—逡逑＊３５＾逡逑ＬＥＵ）逡逑ｆ邋ＩＴ）逡逑ａ邋０．０＿Ｌ＾——「－－１邋』逡逑Ｎ邐ＰＥ逡逑圖１邋－邋１．邋ＬＮ－ａ５在正常任娠和子癇前期胎盤組織中ｍＲＮＡ的表達(dá)水平逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１．邋Ｔｈｅ邋ｍＲＮＡ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ＬＮ－ａ５邋ｉｎ邋ＰＥ邋ａｎｄ邋ｎｏｒｍａｌ邋ｃｏｎｔｒｏｌｓ邋ｍｅａｓｕｒｅｄ邋ｂｙ邋ｑＲＴ－ＰＣＲ．逡逑ｐ－ａｃｔｉｎ邋ｗａｓ邋ｕｓｅｄ邋ａｓ邋ｃｏｎｔｒｏｌ．邋（（邋＊ｐ邋＜邋０．０５）逡逑３．３邐ＬＮ－ａ５在子癇前期胎盤組織中的蛋白表達(dá)逡逑采用Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔｔｉｎｇ技術(shù)檢測(cè)子癇前期和正常妊娠胎盤組織中ＬＮ－ａ５的蛋白逡逑含量，結(jié)果顯示：正常妊娠組胎盤組織中ＬＮ－ａ５的蛋白水平較子癇前期組明顯增逡逑高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｐ＜邋０．０５），見圖２。逡逑ＬＮ－？５邋蠢系一邋—一邐邐４0４邋ＫＤ逡逑｜）ｕＡｃｔｉｉ．ｉ邋——邐＾邋—邐—－邋—邋４３逡逑１邐２．５１逡逑＝２．０－邐￣ｒ逡逑％？邋１．５－逡逑以丁逡逑２邐ｏ，ｗ邐邐

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本文編號(hào)：2720010