【摘要】：目的:宮頸癌是最常見的女性惡性腫瘤,也是欠發(fā)達國家女性癌癥相關(guān)死亡的重要原因,每年約有50萬例新發(fā)病例和30萬例死亡病例。近年來我國子宮頸癌的發(fā)病率逐年上升,且發(fā)病年齡呈下降趨勢。雖然其死亡率隨著手術(shù)、放射治療和化療的進展而降低。但是目前臨床常用的檢驗指標(biāo)如鱗狀細胞相關(guān)抗原(Squamous cell fos-related antigen,SCC)等,仍不能有效的反應(yīng)宮頸癌患者腫瘤的進展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此,探討宮頸癌的分子機制和特異性標(biāo)志物顯得尤為重要。微小RNA(miRNA)是具有18-25個核苷酸的小的、非編碼RNA分子。它們能抑制mRNA翻譯,降低其穩(wěn)定性,并通過結(jié)合靶mRNA的3'非翻譯區(qū)(3'UTR)而導(dǎo)致靶基因的上調(diào)或下調(diào)。研究表明,miRNA參與腫瘤細胞分化、增殖和凋亡過程。在宮頸癌中有一些候選miRNA用于致癌或抗致癌因子,異常水平的mi RNA可能作為宮頸癌診斷的有用的生物標(biāo)志。已有研究闡明部分miRNAs的上調(diào)與子宮頸癌的進展和不良預(yù)后相關(guān)。因此,探索特定的miRNA表達及其調(diào)節(jié)行為,以便更為全面的闡述宮頸癌的發(fā)病機理及理論基礎(chǔ)。方法:1.收集正常宮頸組織(Normal)、CINI、CIN II-III、宮頸鱗狀細胞癌(CC)組織各20例,使用RT-PCR檢測宮頸癌組織miR-218的水平;使用western blot檢測組織中的大腸腺瘤息肉病基因(Colorectal adenomatous polyposis gene,APC)蛋白質(zhì)水平。2.使用宮頸癌細胞株進行細胞水平實驗,使用miRNA芯片分析和實時PCR檢測宮頸癌細胞miR-218的水平;使用western blot檢測細胞中的相關(guān)蛋白質(zhì)水平。進行細胞創(chuàng)傷愈合能力實驗測試遷移能力,并使用transwell測定法檢測Hela和C33A細胞的侵襲能力。通過CCK-8測定檢測細胞增殖能力,測定細胞凋亡水平。雙熒光霉素基因測定用于確認(rèn)APC是否是mi R-218的靶基因。APC過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細胞以檢測miR-218和APC之間的關(guān)系。結(jié)果:1.miR-218的表達在Normal、CINI、CINII-III、CC中的表達逐步顯著降低(P0.05);miR-218的表達和APC的表達呈現(xiàn)出較強的相關(guān)性(R=0.671);APC蛋白的表達隨著宮頸病變程度的進展不斷降低。2.miR-218的表達在宮頸癌細胞中顯著下調(diào)(P0.05)。用miR-218模擬物轉(zhuǎn)染后,Hela的遷移和侵襲能力降低。CCK-8檢測和細胞凋亡實驗顯示,miR-218可顯著抑制宮頸癌細胞增殖,促進宮頸癌細胞凋亡�；虬悬c生物學(xué)信息預(yù)測和雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炚f明APC mRNA的3'-UTR含有miR-218的互補序列,APC有逆轉(zhuǎn)miR-218的抗遷移作用。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)miR-218可能通過正性調(diào)節(jié)其靶基因APC的水平參與宮頸癌的發(fā)展,Wnt信號通路介導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial mesenchymal transition,EMT)可能是其的具體作用方式。我們的結(jié)果對于發(fā)展宮頸癌的miRNA定向診斷和治療有積極意義。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.33
【圖文】：

細胞實驗

織相對表達量分別為 0.842±0.137、0.733±0.162、0.721±0.142、0.594±0.187iR-218 在宮頸癌瘤體組織中表達的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，與 CINI-II、CINⅢC 相比，miR-218 在宮頸癌血清中表達的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，t 檢驗比較結(jié)示，宮頸癌組與 CINI-II、CINⅢ、CC 比較結(jié)果分別為 t=6.766，P＜0.001；t=3.553＜0.001；t=3.420，P＜0.001。.2 miR-218 的表達與 APC 呈正相關(guān)將 APC 與 miR-218 與的相對表達量分別進行正態(tài)性檢驗，檢驗結(jié)果顯示，除極端值后，APC、miR-218 均呈正態(tài)分布，將 APC、miR-218 的相對表達量進行 Pearson 相關(guān)性分析。分析結(jié)果顯示 APC 與 miR-218 均成正相關(guān)，相關(guān)析圖形見圖 3。相關(guān)性分析系數(shù) R=0.672，相關(guān)性分析參數(shù)均有統(tǒng)計學(xué)意P<0.05）。圖 4 顯示在臨床瘤體細胞中 APC 蛋白的表達在 CC、CINIII、CINormal 中的表達逐漸升高。亦從蛋白表達的角度顯示 APC 可能在宮頸鱗狀細胞胞中起到一個抑癌蛋白的作用。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 Wang-Xia Wang;Robert J.Danaher;Craig S.Miller;Joseph R.Berger;Vega G.Nubia;Bernard S.Wilfred;Janna H.Neltner;Christopher M.Norris;Peter T.Nelson;;Expression of miR-15/107 Family MicroRNAs in Human Tissues and Cultured Rat Brain Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2014年01期

2 李超;涂康生;鄭鑫;張競;拓航;高潔;姚英民;劉青光;;MicroRNA-218在肝細胞癌中的表達及功能[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2013年08期

3 劉京康;梁菲;姜潔;;miR-218下調(diào)與宮頸上皮內(nèi)瘤變患者HPV病毒感染關(guān)系的研究[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展;2010年12期

4 宋銀宏;張昌菊;;肼苯噠嗪對宮頸癌細胞株APC基因表達和甲基化狀況以及細胞增殖與凋亡的影響[J];中華病理學(xué)雜志;2007年09期

本文編號：2717841