發(fā)布時(shí)間：2020-06-16 17:15

【摘要】：本課題組采用RAPAd.I包裝系統(tǒng),構(gòu)建了重組腺病毒ATV(Ad-Apoptin-hTERTpE1A)和Ad-MOCK。ATV是由腫瘤特異性啟動(dòng)子(hTERTp,人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶)、啟動(dòng)E1A(病毒復(fù)制必需基因)、巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus,CMV)啟動(dòng)子、凋亡素基因(Apoptin)及經(jīng)修飾的腺病毒基因組構(gòu)成,可選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞,而不破壞正常細(xì)胞和組織。因此,ATV是具有腫瘤特異性復(fù)制和腫瘤特異性殺傷能力的雙特異性溶瘤腺病毒。目的:以人宮頸癌細(xì)胞(HeLa)為切入點(diǎn),探討具有腫瘤特異性復(fù)制和腫瘤特異性殺傷功能的雙特異性溶瘤腺病毒ATV,對(duì)HeLa細(xì)胞自噬和凋亡的影響,為腫瘤生物治療提供新的思路及策略。方法:采用WST-1檢測(cè)ATV對(duì)HeLa細(xì)胞的抑制作用;Annexin V、Hoechst染色檢測(cè)ATV誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡的能力;PI/RNase檢測(cè)ATV對(duì)HeLa細(xì)胞周期的阻滯作用;RT-qPCR、Western Blotting法檢測(cè)ATV介導(dǎo)的自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin-1等表達(dá)水平變化;MDC、IFA檢測(cè)ATV誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞自噬的能力;通過(guò)RNAi敲低LC3及Beclin-1,檢測(cè)ATV感染參與調(diào)控HeLa細(xì)胞自噬的相關(guān)分子。結(jié)果:攜帶Apoptin基因的ATV通過(guò)經(jīng)典的線粒體凋亡途徑,抑制HeLa細(xì)胞增殖,其作用具有時(shí)間與劑效關(guān)系;PI/RNase檢測(cè)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)表明,ATV具有阻滯HeLa細(xì)胞周期的作用,從而抑制HeLa細(xì)胞增殖;Western Blotting和qPCR實(shí)驗(yàn)表明,ATV可誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞發(fā)生自噬;MDC染色、IFA實(shí)驗(yàn)表明,ATV誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞自噬的水平,強(qiáng)于Ad-MOCK;ATV感染HeLa細(xì)胞24 h后,自噬受到抑制,而凋亡作用顯著增強(qiáng),懷疑ATV抑制HeLa細(xì)胞的方式由自噬轉(zhuǎn)為凋亡;敲低Beclin-1和LC3后,自噬作用減弱,自噬小體減少;ATV感染敲低Beclin-1、LC3的HeLa細(xì)胞6 h后,ATG5、ATG12和ULK1等自噬相關(guān)分子水平均有所增強(qiáng),表明ATV介導(dǎo)的HeLa細(xì)胞自噬,可能不完全依賴LC3、Beclin-1途徑。結(jié)論:攜帶Apoptin的溶瘤腺病毒ATV可通過(guò)誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細(xì)胞發(fā)生凋亡和自噬,進(jìn)而特異性殺傷腫瘤細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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1 周暉;盧淮武;彭永排;林仲秋;;《2015年NCCN宮頸癌臨床實(shí)踐指南》解讀[J];中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志;2015年03期

2 王楠;馬蓉;吳建中;高曉平;陸益彬;趙麗君;薛t

本文編號(hào)：2716332