【摘要】：研究背景上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)作為女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)三大惡性腫瘤之一,其致死高率居三者之首。75%的患者診斷時(shí)已為晚期,EOC患者的 5年生存率徘徊于40%左右,2年內(nèi)復(fù)發(fā)率超過(guò)60%。癌細(xì)胞對(duì)化療藥物所致的獲得性耐藥是治療失敗的重要原因,細(xì)胞增殖及化療耐藥是EOC治療面臨的最大的挑戰(zhàn)。MiR-34a 屬于 miR-34ac/34bc-5p/449abc/449c-5p 家族,位于染色體lp36位點(diǎn),在細(xì)胞增殖凋亡穩(wěn)態(tài)失衡時(shí)起到重要作用。文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)iR-34a在腫瘤細(xì)胞中起到“抑癌基因”的作用,能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及耐藥等多種惡行生物學(xué)行為。乙�；腿ヒ阴；墙M蛋白翻譯后修飾的重要組成部分,組蛋白乙�；牟黄胶饪赡軐�(dǎo)致染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化并進(jìn)一步影響細(xì)胞周期進(jìn)展,分化和/或凋亡的基因轉(zhuǎn)錄失調(diào)。與正常發(fā)育所需的許多基因一樣,HDAC的失調(diào)功能可導(dǎo)致癌癥。因此,在許多癌癥中觀察到HDAC的過(guò)表達(dá)。在腫瘤細(xì)胞通常發(fā)現(xiàn)HDAC同工酶的高水平表達(dá)和相應(yīng)的組蛋白的低乙�；癄顟B(tài)。卵巢癌細(xì)胞增殖及耐藥過(guò)程中miR-34a及HDAC1所起到的調(diào)控作用未見(jiàn)報(bào)道。本課題通過(guò)RT-qPCR方法檢測(cè)miR-34a及HDAC1在卵巢癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)及對(duì)耐藥情況的研究,并進(jìn)一步驗(yàn)證了 HDAC1對(duì)miR-34a的靶標(biāo)作用,對(duì)研究卵巢癌細(xì)胞增殖及逆轉(zhuǎn)耐藥和后期治療中新型靶向治療有重要的意義,為EOC的治療奠定理論基礎(chǔ),有望對(duì)EOC的治療提供了新思路和方向。第一部分 MiR-34a在卵巢癌組織中的表達(dá)及意義研究目的:通過(guò)檢測(cè)miR-34a在卵巢癌組織中的表達(dá),分析其與EOC臨床病理特征之間的關(guān)系,探討與卵巢癌的進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。研究方法:收集2011年7月～2013年12月青島大學(xué)附屬醫(yī)院EOC病理標(biāo)本共54例,年齡38～70歲,平均年齡54.2±7.5歲:其中漿液癌48例,粘液癌6例;交界性卵巢腫瘤12例,年齡31～60歲,平均年齡46.9±8.1歲,其中漿液性8例,粘液性4例,正常卵巢組織1 0例,年齡48～59歲,平均年齡52.3±3.4歲,均為因子宮肌瘤而切除卵巢者。所有患者均簽署知情同意書(shū),并且經(jīng)青島大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)。通過(guò)RT-qPCR方法檢測(cè)miR-34a的表達(dá),分析其表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征之間的關(guān)系,驗(yàn)證miR-34a的表達(dá)與卵巢癌的進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移的密切關(guān)系。研究結(jié)果1.MiR-34a在卵巢腫瘤及正常卵巢組織中的表達(dá):EOC組織中miR-34a相對(duì)表達(dá)量為0.5471±0.1 526,明顯低于交界性卵巢腫瘤患者(0.9426±0.0849)和正常卵巢組織(1.03 75±0.0817),差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),后兩者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.998)(見(jiàn)圖 1.2 和表 1.4);2.卵巢癌組織中miR-34a表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系:2.1卵巢癌組織中miR-34a的表達(dá)與FIGO臨床分期的關(guān)系:EOCⅠ期、Ⅱ期患者中miR-34a的相對(duì)表達(dá)量為0.77 15± 0.0813,Ⅲ、Ⅳ期miR-34a的相對(duì)表達(dá)量為0.4608±0.0501,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.022)(見(jiàn)圖1.3和表1.5)。2.2卵巢癌組織中miR-34a的表達(dá)與EOC淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系:9例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者miR-34a的相對(duì)表達(dá)量為0.4511± 0.0610,而無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者miR-34a的相對(duì)表達(dá)量為0.5663±0.1 5 84;EOC組織中 miR-34a表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān),差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)(見(jiàn)圖1.4和表1.5)。2.3卵巢癌組織中miR-34a的表達(dá)與EOC分化程度的關(guān)系:高級(jí)別腺癌組織中相對(duì)表達(dá)量為0.5236±0.1314,而低級(jí)別腺癌組織為 0.8413±0.0668,兩者無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.193)(見(jiàn)表1.5)。2.4卵巢癌組織中 miR-34a的表達(dá)與年齡的關(guān)系:年齡≤50歲EOC患者miR-34a的相對(duì)表達(dá)量0.5642±0.1715,年齡50歲患者的表達(dá)量為 0.547 1±0.1 526,兩者無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.194)(見(jiàn)表 1.5)。2.5卵巢癌組織中 miR-34a的表達(dá)與組織學(xué)分類的關(guān)系:在粘液性腺癌miR-34a表達(dá)量為0.6128±0.2033,漿液性腺癌miR-34a表達(dá)量為 0.538 9±0.1457,兩者無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.112)(見(jiàn)表1.5)。2.6卵巢癌組織中 miR-34a的表達(dá)與 CA125水平的關(guān)系:在CA125≤200U/ml 的 患者 中 miR-34a 相對(duì)表 達(dá)量為0.7770±0.0946,CA125200U/m1 的患者中 miR-34a 相對(duì)表達(dá)量為0.507 1±0.1 225,兩者無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.5 83)(見(jiàn)表 1.5)。研究結(jié)論:MiR-3 4a的低表達(dá)與上皮性卵巢癌的進(jìn)展相關(guān)。第二部分MiR-34a對(duì)卵巢癌細(xì)胞的增殖能力及順鉑耐藥性作用的機(jī)制研究研究目的:探討miR-34a在卵巢癌細(xì)胞增殖及順鉑耐藥中的作用,并研究其作用的分子機(jī)制。研究方法:采用 MTT 法和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定卵巢癌細(xì)胞系(SKOV3 和 OVCA433)中細(xì)胞的增殖及耐藥情況;采用 RT-qPCR檢測(cè)miR-34a在SKOV3和OVCA433中相對(duì)表達(dá)情況;培養(yǎng)卵巢癌耐藥細(xì)胞系SKOV3cp(將SKOV3細(xì)胞采用順鉑藥物誘導(dǎo)培養(yǎng) 6個(gè)月);采用 miR-34a mimics 和 miR-34ainhibitor轉(zhuǎn)染 SKOV3,OVCA433 和 SKOV3cp;real time P CR 檢測(cè)SKOV3和 SKOV3cp細(xì)胞中極短期(48h+4μg/ml)順鉑干預(yù)對(duì)于SKOV3中miR-34a表達(dá)水平的影響;采用不同濃度的順鉑(0,0.5,1,2,4,8μg/ml)處理 SKOV3/SKOV3cp/SKOV3 cp+miR-34a 和 SKOV3/SKOV3 cp/SKOV3+miR-34a inhibitor 細(xì)胞,并測(cè)定細(xì)胞在不同順鉑濃度下的存活率。研究結(jié)果1 miR-34a模擬物對(duì)卵巢癌細(xì)胞存活率的影響:兩種卵巢癌細(xì)胞系SKOV3和OVCA433分別轉(zhuǎn)染了 miR-34a模擬物,同時(shí)分別對(duì)兩個(gè)細(xì)胞系轉(zhuǎn)染了亂序 miRNA,作為陰性對(duì)照組。轉(zhuǎn)染后 1-5天,分別對(duì)兩種細(xì)胞系進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況的評(píng)估。SKOV3生長(zhǎng)抑制率為 0.075 ± 0.005、0.138±0.011、0.245±0.026、0.467±0.038、1.045±0.13 6;OVAC433 生長(zhǎng)抑制率分別為0.051±0.007、0.138±0.013、0.245±0.023、0.467±0.035、1.045±0.1 13。結(jié)果顯示隨著時(shí)間的延長(zhǎng),不論是否轉(zhuǎn)染miR-34a,SKOV3 和 OVCA433 細(xì)胞在不斷增殖,與轉(zhuǎn)染了亂序miRNA的對(duì)照組,轉(zhuǎn)染了 miR-34a模擬物的兩類卵巢癌細(xì)胞系細(xì)胞相對(duì)存活率都明顯低于對(duì)照組,差異具有顯著性(p0.001)(見(jiàn)圖2.1、圖2.2、表2.1及表2.2)。2 miR-34a模擬物對(duì)卵巢癌細(xì)胞集落形成的影響:軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果:轉(zhuǎn)染miR-34a模擬物后,SKOV3細(xì)胞系:對(duì)照組集落計(jì)數(shù)為210.3±19.5,實(shí)驗(yàn)組集落計(jì)數(shù)為 146.5±9.6,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p=0.0022;OVCA43 3細(xì)胞系:對(duì)照組集落計(jì)數(shù)為200±35.2,實(shí)驗(yàn)組集落計(jì)數(shù)為 118.25±7.1,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.0076);實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組,SKOV3和 OVCA433平均細(xì)胞集落數(shù)目分別降低了約29%和42%(見(jiàn)圖2.3和圖2.4)。3 miR-34a抑制物對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的影響:分別對(duì)兩種卵巢癌細(xì)胞系SKOV3和OVCA433分別轉(zhuǎn)染miR-34a抑制物,陰性對(duì)照組則為未轉(zhuǎn)染miR-34a抑制物的卵巢癌細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后等待24小時(shí),在此后的1-5天,分別對(duì)兩種細(xì)胞系進(jìn)行了 MTT分析,以此評(píng)估生長(zhǎng)抑制率。SKOV3生長(zhǎng)抑制率分別為 0.075±0.007、0.187±0.023、0.502±0.034、0.987±0.047、1.965±0.146;OVAC433 生長(zhǎng)抑制率分別為 0.075±0.007、0.157±0.028、0.432+0.024、0.837±0.077、1.765 ± 0.096。結(jié)果表明,隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加,轉(zhuǎn)染了 miR-3 4a抑制物的兩類卵巢癌細(xì)胞系中,細(xì)胞的相對(duì)存活率較對(duì)照組出現(xiàn)了明顯提高,兩組之間的存活率差異具有顯著性(p0.001)(見(jiàn)圖2.5、圖2.6、表2.3和表2.4)。4 miR-34a抑制物對(duì)卵巢癌細(xì)胞的細(xì)胞集落形成的影響:軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果:轉(zhuǎn)染miR-34a抑制物后,SKOV3細(xì)胞系:對(duì)照組集落計(jì)數(shù)為1 7 6.5±3 4.6,實(shí)驗(yàn)組集落計(jì)數(shù)為2 42.0±1 1.9,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.02);OVCA433細(xì)胞系:對(duì)照組集落計(jì)數(shù)為 173.5±14.2,實(shí)驗(yàn)組集落計(jì)數(shù)為 228.5±9.8,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.00 1 5)(見(jiàn)圖2.7和圖2.8)。結(jié)果顯示當(dāng)抑制miR-34a表達(dá)后,實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組,SKOV3和OVCA433平均細(xì)胞集落數(shù)目分別增加了約40%和3 6%。5 SKOV3和SKOV3cp細(xì)胞中的miR-34a的表達(dá)水平:采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分析了 SKOV3和SKOV3cp細(xì)胞中的miR-34a的表達(dá)水平,其結(jié)果見(jiàn)圖2.9。圖中miR-34a在SKOV3細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)水平(1.00±0.23)高于 SKOVcp(0.38±0.11)的兩倍以上,這表明在 SKOV3cp的細(xì)胞系中,miR-34a的表達(dá)出現(xiàn)非常明顯的下調(diào),顯著性達(dá)到了 p0.0 1。6短期順鉑(濃度4μg/ml+48h)處理對(duì)miR-34a表達(dá)的影響:對(duì)SKOV3細(xì)胞進(jìn)行短期順鉑處理,藥物濃度同耐藥細(xì)胞株培養(yǎng)方法。采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)其miR-34a的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)miR-34a在SKOV3細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)水平(1.00±0.1 5)為接受順鉑短期處理的SKOV3細(xì)胞的兩倍以上(0.45±0.08),表明即便是接受短期順鉑處理的SKOV3的細(xì)胞系中,miR-34a的表達(dá)也出現(xiàn)了非常明顯的下調(diào)倍,顯著性達(dá)到了 p0.01(見(jiàn)圖2.10)。7 miR-34a過(guò)表達(dá)對(duì)于順鉑處理抗藥性的影響:應(yīng)用 SKOV3和SKOV3cp細(xì)胞,同時(shí)對(duì)SKOV3cp細(xì)胞轉(zhuǎn)染了 miR-34a,以此模擬具有順鉑耐藥性細(xì)胞中 miR-34a過(guò)表達(dá)時(shí)對(duì)于化療藥物的影響。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,采用不同濃度的順鉑(0,0.5,1,2,4,8μ g/ml)處理這三類細(xì)胞,MTT結(jié)果顯示當(dāng)順鉑給藥濃度增加時(shí)其存活率均明顯下降。與SKOV3細(xì)胞相比,當(dāng)暴露于相同濃度的順鉑時(shí),SKOV3cp細(xì)胞的存活率顯著增高(p0.001)。與未轉(zhuǎn)染miR-34a 的 SKOV3cp 細(xì)胞比較,轉(zhuǎn)染 miR-34a 的 SKOV3cp 細(xì)胞的存活率下降(p0.001)(見(jiàn)圖2.1 1)。8 miR-34a表達(dá)抑制對(duì)于順鉑處理抗藥性的影響:實(shí)驗(yàn)中仍然采用兩類細(xì)胞:SKOV3和SKOV3cp細(xì)胞,但是與上述實(shí)驗(yàn)不同的是,將 SKOV3 轉(zhuǎn)染了 miR-34a抑制劑,模擬 SKOV3 細(xì)胞中miR-34a表達(dá)被抑制時(shí),卵巢癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的相應(yīng)反應(yīng)。結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染24小時(shí)后采用不同濃度的順鉑(0,0.5,1,2,4,8μg/ml)處理這三類細(xì)胞,MTT結(jié)果顯示當(dāng)順鉑給藥濃度增加時(shí)其存活率均明顯下降。與未轉(zhuǎn)染miR-34a的 SKOV3細(xì)胞比較,轉(zhuǎn)染miR-34a抑制劑的SKOV3細(xì)胞的增殖能力顯著增強(qiáng),不同濃度順鉑對(duì)于癌細(xì)胞的抑制能力減弱,其顯著性達(dá)到了 p0.001(見(jiàn)圖 2.1 2)。研究結(jié)論:第三部分HDAC1對(duì)于miR-34a的靶標(biāo)功能及對(duì)細(xì)胞增殖和順鉑耐藥性作用的研究研究目的:1.通過(guò)預(yù)測(cè) miR-34a的靶基因,進(jìn)而研究靶基因在卵巢癌中的功能及表達(dá)的作用;2.驗(yàn)證miR-34a是否可以通過(guò)抑制靶基因的表達(dá),以抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖并逆轉(zhuǎn)耐藥性。研究方法通過(guò)生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)了 miR-34a的75 1個(gè)潛在靶標(biāo),并選擇1 4個(gè)癌癥相關(guān)基因用于進(jìn)一步檢測(cè)過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)染miR-3 4a模擬物后相關(guān)基因的變化;構(gòu)建含有熒光素酶編碼序列的報(bào)告載體,連接上述潛在miR-34a作用靶標(biāo)的3'-UTR,并進(jìn)行雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定;Western-Blot驗(yàn)證卵巢癌細(xì)胞HDAC1表達(dá)特性以及與 miR-34a的調(diào)控關(guān)系;MTT法和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定HDAC1 基因表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞活性的影響;real time PCR、Western-Blot及MTT法驗(yàn)證HDAC1基因表達(dá)對(duì)順鉑對(duì)卵巢癌細(xì)胞耐藥性的影響;構(gòu)建HDAC1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,采用MTT法和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè) HDAC1 過(guò)表達(dá)對(duì) miR-34a 轉(zhuǎn)染的SKOV3和SKOV3cp細(xì)胞增殖的影響。研究結(jié)果1.miR-34a潛在靶基因篩選與分析:通過(guò)生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)并初步篩選了 miR-34a的 14種與癌癥相關(guān)的基因RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在卵巢癌細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)miR-34a會(huì)導(dǎo)致其中六種基因表達(dá)出現(xiàn)變化(Sox4,HDAC1,ITGB8,CDH4,TCF12 和 WNT1);隨后雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定結(jié)果顯示TCF12和HDAC1的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中 HDAC1 熒光素酶活性抑制最為明顯(p0.001)(見(jiàn)圖 3.1 和 3.2);2.miR-34a對(duì) HDAC1 表達(dá)的抑制作用:HDAC1 基因的 3'-UTR互補(bǔ)位點(diǎn)中引入突變并轉(zhuǎn)染 miR-34a mimics:未引入突變1.miR-34a的過(guò)表達(dá)可有效的抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖;2.miR-34a的過(guò)表達(dá)對(duì)逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥有一定作用,為卵巢癌的潛在治療靶點(diǎn)提供了理論基礎(chǔ)。組的熒光活性抑制表現(xiàn)依然顯著(p0.001),突變組中,由于miR-34a和HDAC1相互作用的中斷,抑制不再顯著(見(jiàn)圖3.3和3.4);3.卵巢癌細(xì)胞HDAC1表達(dá)特性以及與miR-34a的調(diào)控關(guān)系:電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染 miR-34a mimics 能夠抑制 SKOV3,OVCA43 3和SKOV3cp細(xì)胞中的HDAC1表達(dá)(見(jiàn)圖3.5);4.HDAC1基因表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞活性影響:采用 HDAC1 過(guò)表達(dá)質(zhì)�；騂DAC1 siRNA轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組,未轉(zhuǎn)染組作為陰性對(duì)照組。轉(zhuǎn)染后 1-5天,MTT法對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)情況進(jìn)行評(píng)估。過(guò)表達(dá)HDAC1組SKOV3生長(zhǎng)率為0.079±0.005、0.398±0.010、0.690±0.009、1.132±0.121、1.893±0.089,轉(zhuǎn)染HDAC1 siRNA 組 SKOV3 生長(zhǎng)率為 0.071 ± 0.005、0.312 ±0.014、0.456 ± 0.00 7、0.517±0.114、1.236±0.089,與未轉(zhuǎn)染組相比,差別具有顯著意義(P0.001)。軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與對(duì)照組(集落計(jì)數(shù)228.3±8.8)相比,HDAC1過(guò)表達(dá)組(集落計(jì)數(shù)296.3±24.5)能夠顯著促進(jìn)軟瓊脂中SKOV3細(xì)胞的集落形成。與對(duì)照組(集落計(jì)數(shù) 211.3±9.7)相比,當(dāng)HDAC1 表達(dá)沉默時(shí)(集落計(jì)數(shù) 153.8±15.0),SKOV3細(xì)胞的集落形成顯著受到抑制(P0.0 1)(見(jiàn)圖 3.6、3.7、3.8和表3.1、3.2);5.HDAC1對(duì)順鉑在卵巢癌細(xì)胞敏感性影響:RT-PCR結(jié)果顯示SKOV3細(xì)胞中 HDAC1-mRNA表達(dá)水平遠(yuǎn)低于 SKOV3cp細(xì)胞,Western-Blot結(jié)果說(shuō)明SKOV3細(xì)胞中HDAC1蛋白質(zhì)表達(dá)水平也遠(yuǎn)低于 SKOV3cp細(xì)胞(p0.01),HDAC1 過(guò)表達(dá)可顯著提高順鉑處理后SKOV3細(xì)胞的存活率(p0.001)(見(jiàn)圖3.9、3.10、3.11 和表 3.3);6.HDAC1過(guò)表達(dá)對(duì)miR-34a轉(zhuǎn)染的SKOV3或SKOV3cp的影響:MTT和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)均顯示miR-34a抑制SKOV3細(xì)胞的活力和集落形成,HDAC1過(guò)表達(dá)能夠逆轉(zhuǎn)上述抑制作用,;順鉑處理可導(dǎo)致 SKOV3 細(xì)胞活力的顯著降低(約 60%),對(duì)SKOV3cp細(xì)胞活力幾乎沒(méi)有影響(約 1 5%),而采用miR-34a轉(zhuǎn)染的 SKOV3cp細(xì)胞,細(xì)胞活力則降至 50%左右,若同時(shí)轉(zhuǎn)染HDAC1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性再次降低,細(xì)胞活力降低至只有20%左右,差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)(見(jiàn)圖3.12、3.13、3.14)。研究結(jié)論:1.HDAC1是miR-3 4a的功能靶點(diǎn),HDAC1的過(guò)表達(dá)增強(qiáng)了卵巢癌細(xì)胞的增殖能力,并與順鉑耐藥性呈正相關(guān);2.miR-34a通過(guò)靶向抑制HDAC1進(jìn)一步抑制卵巢癌細(xì)胞增殖并逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥性。
【圖文】：

實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑１邋ＭｉｃｒｏＲＮＡ－３４ａ在卵巢腫瘤及正常卵巢組織中的表達(dá)逡逑實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ檢測(cè)此反應(yīng)的溶解曲線（圖１．１）為單峰，表逡逑明無(wú)非特異性熒光產(chǎn)生，定量準(zhǔn)確。卵巢癌組織中ｍｉＲ－３４ａ相對(duì)逡逑表達(dá)量為０．５４７１±０．１邋５２６，明顯低于交界性卵巢腫瘤患者逡逑（０．９４２６±０．０８４９邋）和正常卵巢組織（１邋＿邋０邋３邋７邋５邋土０邋？邋０邋８邋１邋７邋），差異有逡逑統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ邋＝邋0．000），后兩者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｐ邋＝邋0．９９８邋）逡逑（見(jiàn)表１．４和圖１．２邋）。逡逑ＲＮＵ６Ｂ逡逑ｉｊ邐ｍｉＲ－３４ａ逡逑，邐／邋Ｉ邋＇ｈ逡逑ｉ邐／＇邐＼逡逑４邐＿邐邐邋—逡逑Ｉ邐＊■■■邋ｉｉ逡逑．邋｜邋，逡逑５邐＾邐？邐？邐ｎ

實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑１邋ＭｉｃｒｏＲＮＡ－３４ａ在卵巢腫瘤及正常卵巢組織中的表達(dá)逡逑實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ檢測(cè)此反應(yīng)的溶解曲線（圖１．１）為單峰，表逡逑明無(wú)非特異性熒光產(chǎn)生，定量準(zhǔn)確。卵巢癌組織中ｍｉＲ－３４ａ相對(duì)逡逑表達(dá)量為０．５４７１±０．１邋５２６，明顯低于交界性卵巢腫瘤患者逡逑（０．９４２６±０．０８４９邋）和正常卵巢組織（１邋＿邋０邋３邋７邋５邋土０邋？邋０邋８邋１邋７邋），差異有逡逑統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ邋＝邋0．000），后兩者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｐ邋＝邋0．９９８邋）逡逑（見(jiàn)表１．４和圖１．２邋）。逡逑ＲＮＵ６Ｂ逡逑ｉｊ邐ｍｉＲ－３４ａ逡逑，邐／邋Ｉ邋＇ｈ逡逑ｉ邐／＇邐＼逡逑４邐＿邐邐邋—逡逑Ｉ邐＊■■■邋ｉｉ逡逑．邋｜邋，逡逑５邐＾邐？邐？邐ｎ
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.31

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本文編號(hào)：2708159