【摘要】：目的:多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是一種內分泌代謝疾病,主要特征是出現(xiàn)高雄激素血癥、排卵障礙以及胰島素抵抗。該癥狀最常見于育齡婦女,具體臨床表現(xiàn)為月經稀發(fā)、閉經,婚后不孕,卵巢多囊樣等。綜合征發(fā)病時往往伴有肥胖、胰島素抵抗、血脂異常等情況,同時作為2型糖尿病、心腦血管病及子宮內膜癌等疾病的高危誘因,一旦發(fā)病,將會對患者的正常生活產生非常嚴重的影響。然而,其詳細的發(fā)病機制至今仍不十分清楚。微小RNA(microRNA,miRNA)是一類具有基因調控功能的小RNA分子,一般通過作用于靶基因mRNA的3′非翻譯區(qū)(UTR)引起靶基因mRNA降解或翻譯受阻,起到負調控作用。近年來,越來越多的研究表明,差異表達的miRNA與PCOS的發(fā)生發(fā)展過程密切相關。本研究通過檢測PCOS患者血清中miR-93的表達量的變化,分析miR-93的變化與PCOS患者臨床特征的關系,探討miR-93在PCOS發(fā)生發(fā)展中的臨床意義;隨后又檢測了miR-93對人卵巢顆粒樣細胞系KGN細胞增殖的影響并鑒定了miR-93的直接靶基因,為進一步闡明PCOS可能的發(fā)病機制及其臨床診療提供新依據和新思路。方法:收集2014年12月-2015年12月經病理確診的多囊卵巢綜合征患者血清25例為實驗研究組,同時收集卵巢功能正常者血清25例為實驗對照組。記錄患者的年齡、身高、體重、性激素六項(包括卵泡生成激素、黃體生成激素、雌二醇、孕酮、睪酮和催乳素)、胰島素、血糖等。采用SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)法分別檢測兩組患者血清中miR-93的相對表達量,并分析miR-93與多囊卵巢綜合征臨床特征(高雄激素血癥、胰島素抵抗等)的關系。通過繪制受試者工作特征曲線ROC,計算曲線下面積(AUC)來評價miR-93診斷PCOS的價值。利用MTT和克隆形成實驗檢測人卵巢顆粒樣細胞系KGN細胞生長和增殖的變化;進一步利用生物信息學技術分析預測miR-93作用的靶基因,然后在人卵巢顆粒樣細胞系KGN利用雙熒光素酶報告基因實驗驗證miR-93的直接靶基因。采用SPSS17.0軟件對實驗數(shù)據進行統(tǒng)計學分析,當P0.05時表明差異具有統(tǒng)計學意義。結果:通過對臨床資料進行回顧性分析,在PCOS患者中,體重指數(shù),黃體生成素、睪酮、胰島素和血糖水平均明顯高于卵巢功能正常對照者(P0.05)。與對照組相比,miR-93在多囊卵巢綜合征患者血清中的相對表達量明顯增加(Z=7.614,P0.01)。在對照組,miR-93的表達水平與睪酮、胰島素水平、胰島素抵抗指數(shù)的相關系數(shù)r值分別為0.03、0.42、0.39(P值分別為0.95、0.11、0.13);在實驗組,miR-93的表達水平與睪酮、胰島素水平、胰島素抵抗指數(shù)的相關系數(shù)r值分別為0.33、0.24、0.28(P值分別為0.09、0.41、0.47)。ROC曲線分析顯示,miR-93用于診斷多囊卵巢綜合征的AUC(ROC曲線下面積)值為0.73,敏感度為70%,特異度為78%,95%置信區(qū)間為[0.59-0.87]。封閉miR-93的表達后,人卵巢顆粒樣細胞系KGN細胞的生長增殖能力均明顯降低;而過表達miR-93后,細胞的生長增殖能力均明顯升高。熒光報告基因實驗結果顯示,miR-93能夠識別并結合Ras相關蛋白基因(RAB5B)mRNA 3'UTR,抑制熒光素酶的活性;而對突變的RAB5B mRNA 3'UTR無作用。與對照組相比,在人卵巢顆粒樣細胞系KGN細胞中轉染miR-93 ASO后,RAB5B mRNA和蛋白水平均顯著增高;而轉染miR-93 mimics后,RAB5B mRNA和蛋白水平均顯著降低。結論:1.miR-93在多囊卵巢綜合征患者血清中異常高表達,且其表達水平與患者的胰島素、睪酮水平無關。2.miR-93用于診斷多囊卵巢綜合征準確度較高,可能對多囊卵巢綜合征的診斷有一定價值。3.miR-93可促進人卵巢顆粒樣細胞系KGN細胞的增殖。4.RAB5B是miR-93的直接靶基因并受其負調控。
【圖文】：

圖 1.1 miR-93 及 U6 snRNA 的溶解曲線1.2.3 實驗組與對照組患者血清中 miR-93 的表達兩組患者血清中均檢測出 miR-93 的表達。如表（1.2）所示，與正常對照組相比，miR-93 在多囊卵巢綜合征患者（PCOS 組）血清中的相對表達量明顯升高（P < 0.01），差異具有統(tǒng)計學意義。表 1.2 兩組患者血清中 miR-93 的相對表達量 M（P25, P75）項 目對照組（n=25）PCOS 組（n=25）Z PmiR-93 1.01(0.55,1.40) 2.70(2.10,3.15) 7.614 < 0.01P < 0.01 表示差異具有統(tǒng)計學意義1.2.4 兩組患者血清中 miR-93 的表達水平與睪酮、胰島素水平、胰島素抵抗指數(shù)的相關性分析在正常對照組，miR-93 的表達水平與睪酮、胰島素水平、胰島素抵抗指數(shù)

數(shù)0.390.13 0.28 R-93 診斷 PCOS 的 ROC 曲線分析，又稱為感受性曲線, 用于評價某種診斷指標的敏率（敏感度）為縱坐標，，假陽性率（1-特異度）為 曲線越靠近左上角和曲線下面積越大，診斷的準佳[18]。如圖（1.2）所示，以每個臨界點對應的假陽縱坐標，繪制ROC曲線，miR-93用于診斷PCOS的.05 相比（AUC=0.05 時提示無診斷價值），差異具依次從圖（1.2）曲線上最左側的點選擇出正確診斷100％）最大的臨界點，此時相對應的切點的真陽確診斷率最高。具體數(shù)值詳見表 1.4 及圖 1.2。表 1.4 血清 miR-93 的 ROC 曲線分析AUC 敏感度 (%) 特異度 (%) 0.73 70 78
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R711.75

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本文編號：2707180