【摘要】：【目的】Statmin1(STMN1)為微管解聚蛋白,通過改變微管的穩(wěn)定性使得微管骨架蛋白發(fā)生重排,從而參與調(diào)節(jié)細胞周期、遷移、凋亡等過程。既往研究已經(jīng)證實在多種惡性腫瘤細胞中都可以檢測到STMN1高表達,STMN1在宮頸癌和子宮頸上皮內(nèi)瘤變3級組織中也呈高表達,與臨床預后密切相關,然而STMN1與宮頸癌生物學行為及其機制尚缺乏深入研究。本研究第一部分旨在深入探究STMN1對宮頸癌細胞生物學行為的影響及其可能的分子機制�！痉椒ā�1、Oncomine數(shù)據(jù)庫檢索并分析STMN1基因m RNA水平在宮頸鱗狀細胞癌以及正常宮頸鱗狀上皮中的表達差異。收集術后病理診斷符合宮頸鱗狀細胞癌患者的癌組織和相應癌旁正常組織,提取總RNA,進行逆轉錄反應,實時定量PCR檢測STMN1m RNA表達水平,免疫組織化學染色方法檢測兩組間STMN1蛋白表達水平差異。2、采用小分子RNA干擾技術沉默宮頸癌細胞系Siha和C33A中STMN1基因的表達,劃痕實驗、Transwell小室技術檢測實驗組(si-STMN1)與正常對照組(si-NC)干預C33A和Siha細胞侵襲和遷移能力的影響。3、Real-time PCR與Western blotting技術分別檢測比較各組細胞中相關基因m RNA水平和蛋白水平表達情況�！窘Y果】1、Oncomine數(shù)據(jù)顯示:在宮頸鱗狀細胞癌組織中,STMN1的表達水平明顯高于宮頸鱗狀上皮組織中的表達。與配對癌旁組織中的STMN1表達水平相比,宮頸癌患者原發(fā)灶組織標本中STMN1 m RNA和蛋白表達水平均明顯升高。2、體外實驗證實,實驗組(si-STMN1)與正常對照組(si-NC)相比下調(diào)STMN1表達顯著降低宮頸癌細胞的遷移能力及侵襲能力。3、在宮頸癌細胞Siha和C33A中下調(diào)STMN1表達后,MMP2和MMP9的m RNA和蛋白表達水平均顯著降低�！窘Y論】本研究結果初步提示,STMN1在宮頸癌中高表達,其與宮頸癌細胞侵襲和遷移能力密切相關,可能的機制為:STMN1的高表達水平導致基質(zhì)金屬蛋白酶活性升高,為腫瘤細胞侵襲和遷移提供有利條件。靶向STMN1及其相關下游信號通路可能有助于宮頸癌治療�！灸康摹壳捌谘芯恳呀�(jīng)證實在STMN1在宮頸癌細胞的生物學惡性行為中發(fā)揮了重要的作用,尤其是對宮頸癌細胞C33A和Siha的侵襲和遷移能力的影響。目前研究表明,STMN1高表達與惡性腫瘤患者不良預后密切相關,還可作為評估多種類型腫瘤的標志物,然而STMN1與宮頸癌耐藥的關系和機制尚缺乏深入研究。本研究第二部分旨在深入探究在宮頸癌中的異常表達的STMN1對宮頸癌細胞鉑類化療藥物敏感性的影響及其可能的分子機制�！痉椒ā�1、采用小分子RNA干擾技術沉默宮頸癌細胞系Siha和C33A中STMN1基因的表達,Cell counting kit(CCK8)實驗檢測宮頸癌細胞Siha和C33A經(jīng)過STMN1 si RNA處理后對化療藥物敏感性的影響。2、流式細胞學技術檢測鉑類化療藥物干預宮頸癌細胞系的同時沉默STMN1的表達對宮頸癌細胞凋亡的影響。3、Real-time PCR與Western blotting技術分別檢測比較各組細胞中相關基因m RNA水平和蛋白水平表達情況�！窘Y果】1、CCK8實驗證實,與對照組相比下調(diào)STMN1表達可增加宮頸癌細胞Siha和C33A對化療藥物(順鉑)敏感性。隨著化療藥物(順鉑)濃度逐漸增加,STMN1的表達水平也隨之增加。2、流式細胞學技術結果表明沉默宮頸癌細胞Siha和C33A中STMN1表達后宮頸癌細胞系對化療藥物的細胞凋亡率增加3、Western blotting實驗結果顯示,順鉑處理宮頸癌細胞系后沉默STMN1表達能夠明顯改變細胞凋亡,表現(xiàn)為凋亡相關蛋白BAX表達水平上調(diào),BCL-2表達水平下調(diào),Cleaved-Casepase3的表達水平上調(diào)�！窘Y論】沉默宮頸癌細胞STMN1的表達能增加化療藥物(順鉑)敏感性。其可能的機制為:抑制STMN1表達導致宮頸癌細胞的凋亡增多,從而改善對化療藥物順鉑的敏感性。本研究結果初步提供了STMN1與宮頸癌細胞耐藥關系的證據(jù)以及可能的潛在機制,靶向STMN1基因為改善宮頸癌化療藥物敏感性提供新的理論科學依據(jù)和治療策略。
【圖文】：

圖 1.1 Oncomine 數(shù)據(jù)庫中 STMN1 在宮頸癌組織和宮頸鱗狀上皮組織的表達情況。A圖表示：Zhai Cervix Statistics 數(shù)據(jù)庫中 9 例正常宮頸組織和 21 例宮頸鱗狀細胞癌組織標本表達差異統(tǒng)計。B 圖表示：Scotto Cervix Statistics 數(shù)據(jù)庫中 24 例正常宮頸組織和 32 例宮頸鱗狀細胞癌組織標本的 STMN1 mRNA 表達差異統(tǒng)計。其中縱坐標選用校正后 log2中位數(shù)值，統(tǒng)計分析選用 t 檢驗。（***表示 P<0.001）

宮頸癌細胞系 Transwell 遷移和侵襲實驗中轉染 siNC 和 siSTMN1 后細胞典型圖片及其對應統(tǒng)計分析圖。（每組實驗至少重復三次。*表示 P<0.05，**表示 P<0.01）1.5.3 STMN1 在宮頸癌細胞中調(diào)節(jié) MMP-2 和 MMP-9 的表達有文獻報道，基質(zhì)金屬蛋白酶在多種類型腫瘤的惡性進展均發(fā)揮著重要作用，通過降解基底膜Ⅳ型膠原和變性的間質(zhì)膠原促進腫瘤的侵襲和遷移能力[18-20]。為了進一步探究 STMN1 對宮頸癌細胞侵襲和遷移能力的影響機制，我們利用 real-time PCR 技術和 Western Blotting 技術分別檢測 STMN1 siRNA 或 siNC 處理宮頸癌細胞 Siha 和C33A 后 MMP-2、MMP-9 的 mRNA 和蛋白的表達水平。結果顯示，下調(diào)宮頸癌細胞中 STMN1 的表達水平后，，MMP-2、MMP-9 的 mRNA 和蛋白的表達水平均明顯降低，并且具有顯著的統(tǒng)計學差異（兩者 t 檢驗 P <0.005）。提示在宮頸癌細胞侵襲或遷移發(fā)生過程中 STMN1 可能是通過促進基質(zhì)金屬蛋白酶的表達，降解基底膜Ⅳ型膠原和變性的間質(zhì)膠原，從而促進腫瘤的侵襲和遷移能力。（圖 1.4）
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R737.33

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 常凱凱;楊慧麗;周文潔;李明清;謝鋒;;缺氧通過刺激胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素分泌促進宮頸癌細胞體外侵襲[J];中國臨床醫(yī)學;2017年02期

2 陳觀娣;范格英;游可理;錢德英;岑堅敏;舒焰紅;李志剛;;5-氮雜-2'-脫氧胞苷對宮頸癌細胞的基因表達調(diào)控[J];實用醫(yī)學雜志;2016年18期

3 李娟;多重PCR分析宮頸癌細胞中16型HPV的狀態(tài)[J];國外醫(yī)學(預防、診斷、治療用生物制品分冊);2004年03期

4 李曉蘭;趙駿達;馬俊旗;;骨髓激酶X對宮頸癌細胞增殖的影響及可能的作用機制[J];中國癌癥防治雜志;2019年04期

5 賀帥;吳彥萍;蔡湘儀;陳紅波;王麗君;黃來強;;姜黃素對宮頸癌細胞生長與增殖的影響研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2017年01期

6 李晶;魏楓;楊帆;鄭禹;趙華;任秀寶;;宮頸癌細胞高遷移率族警報素的分泌與腫瘤浸潤淋巴細胞的相關性[J];中國腫瘤生物治療雜志;2017年03期

7 馮思佳;崔靜;楊璐;趙二趁;柴婕;楊丹丹;張翠翠;王志慧;郜培瓊;千新來;;集聚蛋白基因在不同宮頸癌細胞中的表達[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報;2016年05期

8 李曉蘭;謝環(huán);劉云;;宮頸癌細胞凋亡逃逸與腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體及其受體的表達[J];中國婦幼保健;2016年13期

9 劉霏;李浩然;程璽;李夢嬌;王子良;楊莉;;蟾蜍靈對宮頸癌細胞的增殖抑制作用及其機制研究[J];中國癌癥雜志;2015年10期

10 潘惠艷;趙群;詹陽;趙麗紅;張衛(wèi)華;吳玉梅;;電壓門控鈉離子通道表達對宮頸癌細胞增殖侵襲轉移作用的研究[J];中國腫瘤臨床;2012年04期

相關會議論文 前10條

1 潘惠艷;趙群;詹陽;;電壓門控鈉離子通道對宮頸癌細胞侵襲轉移作用的研究[A];第七屆全國醫(yī)學生物化學與分子生物學和第四屆全國臨床應用生物化學與分子生物學聯(lián)合學術研討會暨醫(yī)學生化分會會員代表大會論文集[C];2011年

2 鄭秀惠;陳竹欽;李力;梁培禾;;~(252)锎中子放療對宮頸癌細胞凋亡和增殖的影響[A];第八次全國婦產(chǎn)科學學術會議論文匯編[C];2004年

3 田小飛;彭芝蘭;;VEGF-C對宮頸癌細胞增殖和凋亡的影響研究[A];中華醫(yī)學會第九次全國婦科腫瘤學術會議論文匯編[C];2006年

4 鄭秀惠;李力;陳竹欽;郭建新;;~(252)锎中子放療對宮頸癌細胞凋亡和增殖的影響[A];中華醫(yī)學會第一屆全球華人婦產(chǎn)科學術大會暨第三次全國婦產(chǎn)科中青年醫(yī)師學術會議論文匯編[C];2007年

5 夏咸梅;;宮頸癌細胞學篩查在基層的試行及推廣[A];中華護理學會全國腫瘤護理學術交流暨專題講座會議論文匯編[C];2010年

6 陳紅;陳惠禎;吳緒峰;楊慶憶;劉詩權;;環(huán)孢菌素逆轉宮頸癌細胞耐藥性的研究[A];全國子宮頸癌暨湖北省婦科腫瘤專業(yè)委員會第五次婦科腫瘤學術會議論文匯編[C];2006年

7 張金亮;宗鋮;鄭曉姍;徐夢溪;任斌;;拉曼光譜用于宮頸癌細胞中生物分子的研究[A];第十八屆全國光散射學術會議摘要文集[C];2015年

8 郭菲;汪泱;繆麗芳;余娜莎;劉絲蓀;;氯化鑭抑制宮頸癌細胞轉移的作用及機制[A];“細胞活動 生命活力”——中國細胞生物學學會全體會員代表大會暨第十二次學術大會論文摘要集[C];2011年

9 鄭秀惠;李力;陳竹欽;;~(252)锎中子放療對宮頸癌細胞凋亡和增殖的影響[A];中華醫(yī)學會第九次全國婦科腫瘤學術會議論文匯編[C];2006年

10 熊潔琦;劉絲蓀;馮年花;婁遠蕾;郭菲;;二氧化硒對宮頸癌細胞的抑制作用及機制[A];細胞—生命的基礎——中國細胞生物學學會2013年全國學術大會·武漢論文摘要集[C];2013年

相關重要報紙文章 前5條

1 范杉珊;寧夏首次發(fā)現(xiàn)枸杞中有抗癌功效的物質(zhì)[N];華興時報;2008年

2 記者 戴湘宏;抗癌路上大風歌[N];湘潭日報;2005年

3 孫莉莉 茅清;從群眾最切身的利益出發(fā)[N];中國人口報;2010年

4 浙江省嘉興市婦幼保健院信息科 陸菲;醫(yī)院信息化：簡單即快樂[N];計算機世界;2009年

5 寧靜;人體中的抗癌液[N];民族醫(yī)藥報;2006年

相關博士學位論文 前10條

1 劉明珠;小檗堿對宮頸癌細胞抑制作用及放射增敏性研究[D];鄭州大學;2018年

2 周琛斐;TWIST2通過miR-221-3p靶向THBS2促進宮頸癌淋巴結轉移的分子機制[D];南方醫(yī)科大學;2018年

3 楊臻;GRSF1介導miR-G-1通過上調(diào)TMED5和LMNB1促進宮頸癌細胞的惡性行為及核自噬[D];天津醫(yī)科大學;2018年

4 王路芳;β-欖香烯通過介導β-catenin/TCF7/Sox2信號通路抑制宮頸癌細胞的增殖、遷移、侵襲及上皮間質(zhì)變的轉化[D];中國醫(yī)科大學;2018年

5 李琳;垂體瘤轉化基因1調(diào)控miR-3666介導的ZEB1增強宮頸癌細胞侵襲的機制研究[D];吉林大學;2018年

6 王金銘;microRNA-1266通過靶向調(diào)控DAB2IP對宮頸癌細胞生物學行為影響的研究[D];鄭州大學;2019年

7 王穎穎;miR-206通過靶定BAG3表達抑制宮頸癌細胞增殖、遷移與侵襲[D];山東大學;2019年

8 胡玉崇;HOXD—AS1在體內(nèi)外通過ERK/Ras信號通路促進宮頸癌細胞增殖、遷移和侵襲[D];南方醫(yī)科大學;2018年

9 漆云翔;宮頸癌細胞EGFR核轉位介導的放射抵抗的潛在機制及臨床研究[D];廣西醫(yī)科大學;2017年

10 李波;卵巢癌和宮頸癌細胞對二氯乙酸鹽的抵抗機制及增敏措施研究[D];第三軍醫(yī)大學;2017年

相關碩士學位論文 前10條

1 田譜;宮頸癌細胞胞質(zhì)中HPV DNA通過活化STING參與腫瘤微環(huán)境形成的機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2019年

2 曹沁;GDF15對宮頸癌細胞放射敏感性及EMT作用的研究[D];華中科技大學;2019年

3 封又榮;STMN1促進宮頸癌細胞侵襲遷移及誘導耐藥的機制研究[D];華中科技大學;2019年

4 郭穎;miR-365通過靶向ELF4抑制宮頸癌細胞的增殖及其臨床意義[D];華北理工大學;2019年

5 謝舜;miR-93-5p調(diào)控TNFAIP1基因影響宮頸癌細胞的生物學行為的研究[D];湖南師范大學;2016年

6 莊重;基于改進ResNet網(wǎng)絡的宮頸癌細胞識別[D];北京交通大學;2019年

7 張玉婷;多氯聯(lián)苯對宮頸癌細胞HeLa存活的影響及機制研究[D];山西大學;2019年

8 劉析t

本文編號：2707278