發(fā)布時間：2020-06-08 16:47

【摘要】：目的:探求子宮內(nèi)膜異位癥中nm23-H1基因、MT1-MMP基因的表達情況,了解子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生與nm23-H1基因和MT1-MMP基因的相關(guān)性,為子宮內(nèi)膜異位癥的臨床診斷、預(yù)防、治療提供新的思路。方法:通過取正常子宮內(nèi)膜及異位癥組織各10例,經(jīng)消化分離后原代培養(yǎng)間質(zhì)細胞,待細胞貼壁后對異位癥組細胞加入0,10~-88 mol/L,10~-55 mol/L三種濃度17β-雌二醇(17β-Estradiolum)予以刺激,48 h后收集細胞,用Trizol試劑提取細胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA,利用qRT-PCR技術(shù)檢測正常及異位子宮內(nèi)膜細胞中nm23-H1基因及MT1-MMP基因的mRNA表達情況;另取正常及異位子宮內(nèi)膜,利用冰凍切片、HE試劑盒染色、激光捕獲顯微切割技術(shù),獲取子宮內(nèi)膜腺上皮細胞,經(jīng)微量試劑盒提取RNA后,反轉(zhuǎn)錄成cDNA,采用Q200微滴式數(shù)字PCR方法檢測nm23-H1基因及MT1-MMP基因在正常及異位子宮內(nèi)膜上皮細胞中mRNA的表達情況。結(jié)果:1.nm23-H1基因在正常子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜異位癥組織原代培養(yǎng)的間質(zhì)細胞中mRNA的表達水平分別是0.978±0.256、0.321±0.111,兩者相比子宮內(nèi)膜異位癥中nm23-H1基因的mRNA表達水平低于正常子宮內(nèi)膜對照組的表達情況,P=0.026,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2.MT1-MMP基因在正常子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜異位癥組織原代培養(yǎng)的間質(zhì)細胞中mRNA的表達水平分別是0.508±0.141、1.438±0.277,兩者相比子宮內(nèi)膜異位癥中MT1-MMP基因的mRNA表達水平高于正常子宮內(nèi)膜對照組的表達情況,P=0.011,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3.經(jīng)0、10~-88 mol/L、10~-55 mol/L不同濃度雌激素刺激后,子宮內(nèi)膜異位癥組織消化后原代培養(yǎng)的間質(zhì)細胞中nm23-H1基因的表達情況分別為1.028±0.189、0.553±0.204、0.271±0.099,隨著雌激素濃度的升高,子宮內(nèi)膜異位癥間質(zhì)細胞中nm23-H1基因的mRNA表達水平越來越低,未加雌激素組與10~-55 mol/L濃度雌激素刺激組之間有顯著差異;MT1-MMP基因的mRNA的表達情況分別是1.599±0.722、4.580±2.240、3.383±1.784,在雌激素刺激組的表達均有升高,其中10~(-5) mol/L濃度組表達最高,但各組間差異沒有顯著性趨勢。4.nm23-H1基因在正常子宮內(nèi)膜及內(nèi)異癥組織上皮細胞的mRNA表達情況分別是0.097±0.019、0.048±0.008,兩者相比子宮內(nèi)膜異位癥中nm23-H1基因的表達水平低于正常子宮內(nèi)膜對照組的表達情況,P=0.049,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。5.MT1-MMP基因在正常子宮內(nèi)膜及內(nèi)異癥組織上皮細胞的mRNA表達情況分別是0.219±0.041、0.416±0.062,兩者相比子宮內(nèi)膜異位癥中MT1-MMP基因的表達水平高于正常子宮內(nèi)膜對照組的表達情況,P=0.017,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:1.相比于正常子宮內(nèi)膜組織原代培養(yǎng)的間質(zhì)細胞,子宮內(nèi)膜異位癥組織原代培養(yǎng)的間質(zhì)細胞中nm23-H1基因的mRNA表達降低,MT1-MMP基因的mRNA表達升高,這與實驗室前期對子宮內(nèi)膜異位癥組織的研究結(jié)果一致,nm23-H1作為腫瘤抑制基因參與了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生。nm23-H1基因的表達是否會影響MT1-MMP從而導(dǎo)致子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生有待更深層次的探究。2.隨著雌激素濃度的增加,nm23-H1基因的mRNA表達有下降的趨勢,MT1-MMP基因的表達增加,但各組間統(tǒng)計無顯著性差異,后續(xù)可以增加樣本量,優(yōu)化細胞培養(yǎng)方案,進一步研究以明確兩者之間的關(guān)系。3.激光捕獲子宮內(nèi)膜上皮細胞經(jīng)dd-PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)與正常對照組相比nm23-H1基因的mRNA在Qg異組中表達降低,MT1-MMP基因的mRNA表達增高,子宮內(nèi)膜異位癥中上皮細胞可能與間質(zhì)細胞發(fā)生共同的作用。
【圖文】：

圖 1 腺上皮細胞貼壁后 圖 2 間質(zhì)細胞貼壁后Fig1 epitheial cells adherent Fig2 stromal cells adherent2 nm23-H1、MT1-MMP 基因在子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞中的 mRNA表達

圖 1 腺上皮細胞貼壁后 圖 2 間質(zhì)細胞貼壁后Fig1 epitheial cells adherent Fig2 stromal cells adherent2 nm23-H1、MT1-MMP 基因在子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞中的 mRNA表達
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R711.71

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本文編號：2703364