【摘要】：卵巢癌(Ovarian cancer,OC)是常見的婦科惡性腫瘤之一,盡管其發(fā)病率在婦科生殖系統(tǒng)腫瘤中居第三位,但其死亡率卻高居首位。因卵巢癌的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,至今仍缺乏有效的診斷分子標(biāo)記物及治療靶點(diǎn)。因此,尋找針對卵巢癌的獨(dú)特分子標(biāo)志物仍是卵巢癌基礎(chǔ)研究的一項(xiàng)重大課題,一旦有所突破,將能夠有效提高患者生存率,為卵巢癌患者帶來希望。人滋養(yǎng)層細(xì)胞表面抗原-2(TROP2)是一種在多種腫瘤中表達(dá)的跨膜糖蛋白,由TACSTD2基因編碼,能通過傳遞細(xì)胞內(nèi)的鈣信號、調(diào)控ERK/MAPK的信號通路,來參與細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的激活,從而影響腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲及凋亡等惡性生物學(xué)行為。TROP2被首次發(fā)現(xiàn)于胎盤的滋養(yǎng)細(xì)胞,它在具有干細(xì)胞性質(zhì)的細(xì)胞中表達(dá)。研究表明TROP2在子宮內(nèi)膜樣腺癌、宮頸癌、乳腺癌、喉癌和結(jié)直腸癌等組織中都有過度表達(dá),該蛋白過表達(dá)與多種惡性腫瘤患者的生存率降低以及腫瘤侵襲性和轉(zhuǎn)移性增加有關(guān),且TROP2在轉(zhuǎn)移組織中的過度表達(dá)使其成為治療晚期惡性腫瘤極具吸引力和潛在的治療靶點(diǎn)。漿液性卵巢癌(Serous ovarian carcinoma,SOC)是卵巢癌中最常見的組織學(xué)類型。本研究我們檢測出TROP2蛋白在SOC組織中的高表達(dá),評價其與臨床病理特征和預(yù)后之間的關(guān)系,并觀察到用siRNA對卵巢癌細(xì)胞進(jìn)行干擾后TROP2的表達(dá)明顯下調(diào)。我們的結(jié)果表明TROP2蛋白過表達(dá)與SOC侵襲性進(jìn)展和不良預(yù)后密切相關(guān),是評價SOC不良預(yù)后的獨(dú)立因素,能促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。TROP2是一個SOC潛在的預(yù)后標(biāo)志物和靶向治療的新靶點(diǎn)。第一部分TROP2在漿液性卵巢癌中的表達(dá)及與Ki-67的相關(guān)性研究目的:檢測并分析TROP2在卵巢病變組織及正常卵巢、輸卵管傘組織中的表達(dá),探討TROP2的表達(dá)在SOC細(xì)胞增殖中的作用及與SOC患者臨床病理特征的相關(guān)性。方法:采用免疫組織化學(xué)方法檢測126例SOC患者,36例交界性卵巢腫瘤,26例卵巢漿液性囊腺瘤、20例正常卵巢和20例正常輸卵管傘石蠟包埋組織標(biāo)本中TROP2及Ki-67蛋白的表達(dá);比較不同臨床病理特征的TROP2表達(dá)水平,并分析TROP2和Ki-67表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果:1.TROP2蛋白的表達(dá)情況卵巢低級別漿液性腺癌(LGSOC)實(shí)驗(yàn)組,采用正常卵巢組織作為正常對照組,正常卵巢組織中TROP2蛋白表達(dá)陰性12例(60%),弱陽性7例(35%),中度陽性1例(5%),無強(qiáng)陽性表達(dá)。而LGSOC組織中TROP2蛋白陰性6例(10%),弱陽性13例(21.7%),中度陽性20例(5%),強(qiáng)陽性21例(35%),TROP2蛋白表達(dá)較正常卵巢、卵巢漿液性囊腺瘤及卵巢交界性腫瘤組織明顯增高,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。卵巢高級別漿液性腺癌(HGSOC)實(shí)驗(yàn)組,采用正常輸卵管傘組織作為正常對照組,正常輸卵管傘組織中TROP2蛋白表達(dá)陰性10例(50%),呈弱陽性表達(dá)8例(40%),中等陽性2例(10%),無強(qiáng)陽性表達(dá)。HGSOC組織中TROP2蛋白表達(dá)陰性8例(12.1%),弱陽性16例(24.2%),中等陽性22例(33.3%),強(qiáng)陽性表達(dá)20例(30.3%),TROP2蛋白表達(dá)較對照組正常輸卵管傘組織明顯增高(P0.05)。2.TROP2蛋白表達(dá)與SOC的FIGO臨床分期、腫瘤病理分級、術(shù)前血清CA125水平、腹水和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切(P0.05),而其表達(dá)與卵巢癌患者年齡及鉑耐藥無相關(guān)性(均為P0.05)。3.Ki-67在卵巢低級別及高級別漿液性腺癌中的表達(dá)明顯高于對照組及良性病變組織(P0.05)。Spearman等級相關(guān)分析顯示,TROP2和Ki-67在SOC組織中的表達(dá)具有相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論:1.TROP2在SOC組織中表達(dá)升高,與SOC的不良臨床病理特征密切相關(guān),說明TROP2參與SOC的發(fā)生發(fā)展過程。2.TROP2與Ki-67蛋白表達(dá)呈正相關(guān),提示TROP2可能參與SOC細(xì)胞的增殖及侵襲過程。第二部分126例漿液性卵巢癌患者的臨床資料統(tǒng)計及生存分析目的:進(jìn)一步探究此項(xiàng)研究第一部分中影響SOC患者預(yù)后的相關(guān)因素。分析TROP2的表達(dá)、FIGO臨床分期、腫瘤病理分級、術(shù)前血清CA125水平、腹水、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及年齡等不同因素對SOC患者生存時間的影響。方法:采集入組與第一部分中的SOC癌相同的患者病例,共計126例SOC患者。患者在山東大學(xué)附屬齊魯醫(yī)院行手術(shù)且及時完成治療,并保存了完整的病例記錄和隨訪資料,術(shù)后隨訪時間60個月,隨訪信息包括總生存時間(OS)和無進(jìn)展生存時間(PFS)。采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存時間的比較,并繪制生存曲線;采用單因素、多因素Cox比例風(fēng)險回歸分析,篩選影響預(yù)后的主要因素。結(jié)果:1.單因素分析顯示:TROP2蛋白過表達(dá)與無進(jìn)展生存期(PFS)和總生存期(OS)有相關(guān)性(均為P0.05)。在FIGO臨床分期、腫瘤病理分級、術(shù)前血清CA125水平、腹水和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面,患者中位生存期具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),而年齡50歲和≥50歲兩組患者中位生存期無統(tǒng)計學(xué)差異。2.多因素COX回歸模型分析結(jié)果顯示:TROP2的表達(dá)、FIGO臨床分期、術(shù)前血清CA125水平、腹水和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況是影響SOC患者五年生存率的獨(dú)立因素。結(jié)論:1.TROP2的過表達(dá)導(dǎo)致SOC患者的不良預(yù)后,是評價SOC預(yù)后的獨(dú)立因素。2.FIGO臨床分期、術(shù)前血清CA125水平、腹水和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也是影響卵巢癌預(yù)后的危險因素。第三部分TROP2的表達(dá)對卵巢癌生物學(xué)行為的影響目的:觀察TROP2表達(dá)水平的變化對卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲及遷移能力等生物學(xué)行為的影響,探索TROP2在卵巢癌腫瘤的形成發(fā)展中的作用及可能的機(jī)制。方法:我們合成了兩個獨(dú)立的siRNA序列siRNA-550和siRNA-1100序列來轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞,干擾沉默TROP2的內(nèi)源性表達(dá)。用Western Blot檢測轉(zhuǎn)染后TROP2蛋白的表達(dá)量;用CCK-8法測定TROP2表達(dá)水平的改變對卵巢癌細(xì)胞增殖能力的影響;分別用劃痕實(shí)驗(yàn)和侵襲實(shí)驗(yàn)來測定細(xì)胞的遷移和侵襲能力;使用Western Blot法測定凋亡相關(guān)蛋白Bax和Bcl-2的表達(dá)。結(jié)果:1.免疫熒光染色分析顯示:在A2780、HO8910和SK-OV-3細(xì)胞表面均有一層紅色熒光染色。Western Blot檢測結(jié)果表明TROP2蛋白在3種細(xì)胞中均有表達(dá),其中A2780細(xì)胞系中TROP2的表達(dá)比其它兩個細(xì)胞系更高。2.用轉(zhuǎn)染序列siRNA-550和siRNA-1100對A2780進(jìn)行干擾后,TROP2蛋白表達(dá)明顯降低。3.用CCK-8法研究發(fā)現(xiàn):TROP2基因沉默的A2780細(xì)胞增殖能力顯著降低(P0.05)。4.通過細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):TROP2基因沉默后的卵巢癌細(xì)胞穿過Transwell小室的細(xì)胞數(shù)量明顯降低(P0.05),說明細(xì)胞侵襲能力降低。5.細(xì)胞劃痕試驗(yàn)顯示在進(jìn)行細(xì)胞劃痕24和48小時后,TROP2基因沉默后的卵巢癌細(xì)胞具有顯著較慢的劃痕愈合速度(P0.05),說明細(xì)胞遷移能力顯著下降。6.Western Blot法測定凋亡相關(guān)蛋白顯示:TROP2基因沉默后的卵巢癌細(xì)胞Bcl-2蛋白的表達(dá)顯著下降,而Bax蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)。結(jié)論:通過沉默卵巢癌A 2780細(xì)胞的TROP2基因,發(fā)現(xiàn)TROP2基因參與卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。TROP2基因通過破壞Bax/Bcl-2家族蛋白之間的平衡調(diào)節(jié)來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
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邐６０逡逑Ｏｖｅｒａｌｌ邋Ｓｕｒｖｉｖａｌ（ｍｏｎｔｈｓ）逡逑圖２－２不同ＦＩＧＯ分期的ＳＯＣ患者Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線圖逡逑對４８例“Ｉ期＋ｎ期”、７８例“ｍ期＋ＩＶ期”的ＳＯＣ患者生存分析。Ｏｖｅｒａｌｌ邋ｓｕｒｖｉｖａｌ，逡逑總生存期；尸＜０．００１；風(fēng)險比率ＨＲ＝５．１１９；置信區(qū)間９５％邋Ｃｌ：邋２．５９６？１０．０９５。逡逑４６逡逑

（Ａ）邐（Ｂ）逡逑圖２－１與ＴＲＯＰ２表達(dá)相關(guān)的漿液性卵巢癌患者Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線。逡逑Ａ：總體生存期（ＯＳ），尸＝０．０１７。Ｂ：無進(jìn)展生存率（ＰＦＳ），尸＜０．００１。總體逡逑風(fēng)險比率ＨＲ＝１．９１６；置信區(qū)間９５％ＣＩ：邋１．１０８？３．３１２。逡逑１０－邐邐ｐ邋，邐／＞＜000！邐ＦＩＧＯ．Ｕｇｅ：逡逑個邐＂ｔ＂１邋ｌ－Ｄ－？ｎ？ｏｎ＾逡逑Ｌ．邐？—ｊ邐—ｆ—邋ｌｌ－ＩＶ邋ｒｍａｍｌ逡逑０８－邐＼邐＾￣Ｉ——ｈ逡逑0邋０６－邐？邋ｔ邋，逡逑！邋＇＇＇逡逑１逡逑ｏ逡逑０邋２－逡逑ｏｏ－逡逑Ｉ邐Ｉ邐Ｉ邐Ｉ邐Ｉ邐Ｉ邐Ｉ逡逑０邐１０邐２０邐３０邐？０邐５０邐６０逡逑Ｏｖｅｒａｌｌ邋Ｓｕｒｖｉｖａｌ（ｍｏｎｔｈｓ）逡逑圖２－２不同ＦＩＧＯ分期的ＳＯＣ患者Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線圖逡逑對４８例“Ｉ期＋ｎ期”、７８例“ｍ期＋ＩＶ期”的ＳＯＣ患者生存分析。Ｏｖｅｒａｌｌ邋ｓｕｒｖｉｖａｌ，逡逑總生存期；尸＜０．００１；風(fēng)險比率ＨＲ＝５．１１９；置信區(qū)間９５％邋Ｃｌ：邋２．５９６？１０．０９５。逡逑４６逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.31

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本文編號：2702680