【摘要】：研究目的:近年來(lái)研究表明,早發(fā)性卵巢功能不全(POI)與自身免疫失調(diào)有關(guān),表現(xiàn)為外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)降低。不同來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)應(yīng)用于化療性POI動(dòng)物模型時(shí),均顯示有改善誘導(dǎo)POI的作用,但應(yīng)用于免疫誘導(dǎo)的POI的研究甚少。也有研究顯示雌激素(17β-E2)有促進(jìn)Treg增殖并增強(qiáng)其免疫抑制活性的作用。本實(shí)驗(yàn)探討了脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)聯(lián)合17β-E2對(duì)POI患者Treg的免疫調(diào)控作用。方法:第一章:原代培養(yǎng)ADSCs并進(jìn)行流式鑒定及成脂成骨誘導(dǎo)。密度梯度離心法分離健康人及POI患者的PBMCs。在植物凝集素(PHA)的刺激下,將PBMCs分別與不同濃度ADSCs及17β-E2共培養(yǎng)72h,檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖率和Foxp3、TGF-β1、IFN-y的mRNA水平以及Treg的比例。第二章:選擇第一章中促Treg增殖效果最佳的1x1 05ADSCs以及10-9moI/L 17β-E2作為聯(lián)合組,在PHA的刺激下將PBMCs分別與對(duì)照組、10-9mo1/L17β-E2組、1x105ADSCs組、聯(lián)合組共培養(yǎng)72h,檢測(cè)Foxp3、TGF-β1、IFN-γ的mRNA水平以及Treg的比例。結(jié)果:第一章:原代培養(yǎng)的ADSCs純度高,活性好,表型穩(wěn)定,高表達(dá)CD29、CD44、CD105,低表達(dá)CD34、CD45、人白細(xì)胞DR抗原(HLA-DR),具備成脂成骨分化能力。與對(duì)照組相比,不同濃度的ADSCs及17β-E2均能促進(jìn)Treg的增殖,上調(diào)Foxp3、TGF-β1的表達(dá),下調(diào)IFN-y的表達(dá)。第二章:與對(duì)照組相比,各實(shí)驗(yàn)組均能上調(diào)Foxp3、TGF-β1的mRNA水平,下調(diào)IFN-y的mRNA水平,及促進(jìn)Treg表達(dá),其中聯(lián)合組的效果最佳。結(jié)論:第一章:ADSCs及17β-E2均能發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用,誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞生成,其中 1x1O5 ADSCs 和 10-9 mol/L 17β-E2 為最佳濃度。第二章:ADSCs及雌激素可以通過(guò)促進(jìn)Foxp3的表達(dá)、TGF-βl的分泌及抑制IFN-y的分泌促進(jìn)Treg增殖。ADSCs聯(lián)合17β-E2能發(fā)揮協(xié)同作用,共同誘導(dǎo)Treg的免疫調(diào)節(jié)功能。
【圖文】：

流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示細(xì)胞高表達(dá)基質(zhì)細(xì)胞的表面標(biāo)志ＣＤ２９、ＣＤ４４和逡逑ＣＤ１０５，低表達(dá)造血干細(xì)胞表面標(biāo)志ＣＤ３４、ＣＤ４５和成纖維細(xì)胞表面標(biāo)志逡逑ＨＬＡ－ＤＲ，證實(shí)本實(shí)驗(yàn)所培養(yǎng)細(xì)胞符合干細(xì)胞的基本特征（圖１－２）。成脂分化逡逑誘導(dǎo)后，胞質(zhì)中出現(xiàn)大量脂滴，Ｏｉｌ邋ＲｅｄＯ陽(yáng)性，，脂滴呈橘紅色；成骨分化誘導(dǎo)逡逑經(jīng)Ａｌｉｚａｒｉｎ邋Ｒｅｄ邋Ｓ染色后可見(jiàn)胞質(zhì)中出現(xiàn)黑色的鈣結(jié)節(jié)。證實(shí)為人脂肪間充質(zhì)千逡逑細(xì)胞，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研宄（圖１－３）。逡逑１６逡逑

ＣＤ４４邋ＦＩＴＣ－Ａ邐ＣＤ３４邋ＰＥ－Ａ逡逑圖１－２邋ＡＤＳＣｓ的免疫表型鑒定逡逑Ｆｉｇ邋１－２邋Ｔｈｅ邋ｉｍｍｕｎｅ邋ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ邋ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＡＤＳＣｓ逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R711.75

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2686713