本文關(guān)鍵詞：miR-542-5p在漿液性卵巢癌中的表達(dá)及其作用機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：卵巢癌(Ovarian cancer)是最常見的女性生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤之一,其死亡率居女性生殖道惡性腫瘤的首位。因卵巢癌發(fā)病機(jī)制尚不明確,早期無明顯臨床癥狀,70%以上的患者在腫瘤進(jìn)展為中晚期時(shí)才被發(fā)現(xiàn)。由于目前尚缺乏早期篩查和診斷措施,其5年存活率僅30%[1-3]。因此,我們迫切的需要了解卵巢癌的發(fā)生機(jī)制,尋找一種能夠早期診斷或有效治療卵巢癌的方法。Micro RNA(mi RNA)是新發(fā)現(xiàn)的長度為19-25個(gè)核苷酸的內(nèi)源性小非編碼RNA,其通過直接降解靶m RNA或抑制蛋白質(zhì)翻譯來負(fù)性調(diào)控其對應(yīng)靶基因的表達(dá)[4]。mi RNA參與了細(xì)胞的增殖,分化,生長代謝以及凋亡等生物進(jìn)程,與腫瘤的產(chǎn)生和進(jìn)展聯(lián)系密切[5]。越來越多的證據(jù)表明,大量mi RNA在人類卵巢癌組織中異常表達(dá),其參與了卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展過程,并發(fā)揮重要作用[6]。這些表達(dá)異常的mi RNA有可能成為卵巢癌早期診斷和評價(jià)預(yù)后的疾病標(biāo)志物,并且有可能成為卵巢癌的治療靶點(diǎn)。因此,對于mi RNA和卵巢癌相關(guān)性的研究具有十分重要的意義和價(jià)值。近年來有文獻(xiàn)報(bào)道,漿液性卵巢癌并非起源于正常的卵巢組織,而是來源于輸卵管上皮[7-9]。本研究小組前期通過mi RNA芯片技術(shù)篩選漿液性卵巢癌和正常輸卵管傘端上皮組織中差異性表達(dá)的mi RNA,發(fā)現(xiàn)mi R-542-5p在漿液性卵巢癌組織中表達(dá)明顯下調(diào),差異倍數(shù)達(dá)25倍,表明它可能參與了漿液性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展[10]。研究表明,mi R-542-5p在多種腫瘤組織中表達(dá)異常,參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展,但目前國內(nèi)外均未見對其與卵巢腫瘤相關(guān)性的報(bào)道。為了進(jìn)一步明確mi R-542-5p在卵巢癌中的表達(dá),并初步了解卵巢癌發(fā)生和進(jìn)展的分子機(jī)制,本研究將對其在卵巢癌組織中的表達(dá)進(jìn)行大樣本的PCR驗(yàn)證、對卵巢癌細(xì)胞系的相關(guān)生物學(xué)行為的影響等問題進(jìn)行初步探討,初步預(yù)測并驗(yàn)證其作用的下游靶基因。目的:1.檢測mi R-542-5p在漿液性卵巢癌中的表達(dá)情況,并分析mi R-542-5p的表達(dá)與漿液性卵巢癌臨床病理特征之間的關(guān)系,探討其意義。2.探討mi R-542-5p對卵巢癌細(xì)胞系SKOV3的增殖、遷移、侵襲、凋亡等惡性生物學(xué)行為的影響。3.預(yù)測并驗(yàn)證其作用的靶基因,進(jìn)一步明確mi R-542-5p在漿液性卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。方法:1.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析100例漿液性卵巢癌組織及50例正常輸卵管傘端組織中mi R-542-5p的表達(dá),將檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2.將mi R-542-5p mimics、mimics NC(mimics陰性對照)轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞SKOV3。采用MTT實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)檢測過表達(dá)mi R-542-5p對SKOV3細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡的影響。3.通過生物信息學(xué)軟件預(yù)測出mi R-542-5p可能作用的靶基因,并采用RT-PCR、Western-blot技術(shù)和雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分別進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:1.漿液性卵巢癌組織中mi R-542-5p的表達(dá)顯著低于正常輸卵管傘端組織(P0.05)。mi R-542-5p的表達(dá)與漿液性卵巢癌各臨床病理特征之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.過表達(dá)mi R-542-5p后,SKOV3細(xì)胞的增殖能力較陰性對照和正常SKOV3細(xì)胞明顯降低(P0.05);transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)顯示,過表達(dá)mi R-542-5p后,細(xì)胞的遷移和侵襲能力較陰性對照組明顯下降(P0.05);流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,過表達(dá)mi R-542-5p后,SKOV3細(xì)胞的凋亡率較陰性對照組升高,而對細(xì)胞周期無影響。3.通過多種軟件預(yù)測,選取了mi R-542-5p可能作用的靶基因?yàn)閅whab。RT-PCR分析結(jié)果顯示,過表達(dá)mi R-542-5p后,SKOV3細(xì)胞中Ywhab的含量較陰性對照和正常SKOV3細(xì)胞明顯降低;Western-blot技術(shù)分析結(jié)果提示,轉(zhuǎn)染了mi R-542-5p類似物的細(xì)胞中,Ywhab蛋白的表達(dá)較陰性對照降低;雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)結(jié)果顯示:mi R-542-5p能夠抑制含有其結(jié)合位點(diǎn)的野生型質(zhì)粒的熒光素酶活性,而對其對照組和含有突變位點(diǎn)的質(zhì)粒無明顯影響。結(jié)論:1.mi R-542-5p可能作為抑癌基因參與了漿液性卵巢癌的發(fā)生,對于卵巢癌的早期診斷及治療具有潛在意義。2.過表達(dá)mi R-542-5p可以抑制卵巢癌細(xì)胞SKOV3的體外增殖、遷移和侵襲能力,誘導(dǎo)凋亡。提示mi R-542-5p在卵巢癌惡性生物學(xué)進(jìn)程中可能發(fā)揮重要作用。3.Ywhab有可能是mi R-542-5p作用的靶基因之一,mi R-542-5p通過與Ywhab的3’-UTR區(qū)結(jié)合對其進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：miRNA mi R-542-5p 漿液性卵巢癌 Ywhab
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-13
• 文獻(xiàn)回顧13-22
• 第一部分 mi R5425p在漿液性卵巢癌中的表達(dá)及意義22-31
• 1 材料22-23
• 2 方法23-26
• 3 結(jié)果26-28
• 4 討論28-31
• 第二部分 mi R5425p對卵巢癌細(xì)胞SKOV3惡性生物學(xué)行為的影響的研究31-42
• 1 材料31-32
• 2 方法32-35
• 3 結(jié)果35-40
• 4 討論40-42
• 第三部分 mi R5425p靶基因的預(yù)測和驗(yàn)證42-54
• 1 材料42-45
• 2 方法45-50
• 3 結(jié)果50-52
• 4 討論52-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-63
• 個(gè)人簡歷和研究成果63-64
• 致謝64

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 婁艷輝;楊興升;王福玲;錢金花;黃煜;;miR-21在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年03期

  本文關(guān)鍵詞：miR-542-5p在漿液性卵巢癌中的表達(dá)及其作用機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：267431