【摘要】：卵巢癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一,發(fā)病率和致死率極高,嚴(yán)重危害全世界女性的健康。Micro RNA(miRNA)是能通過解降m RNA或翻譯抑制下調(diào)靶基因表達(dá)的一類非編碼短序列RNA。近年來研究表明:miRNA表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和治療密切相關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道:Micro RNA-210(miR-210)在卵巢癌細(xì)胞中異常高表達(dá),且與卵巢癌的化療耐藥有關(guān),但其與卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和放射治療的相關(guān)性目前尚無相關(guān)報(bào)道。本課題對(duì)miR-210與卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和放射治療的關(guān)系及其作用機(jī)制做了深入研究。目的:探討miR-210在卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)過程中的作用及其與放射治療敏感性的關(guān)系,闡明miR-210對(duì)卵巢癌發(fā)展和治療的影響及可能的分子機(jī)制。方法:1.體外培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞株OVCAR3和SKOV3。應(yīng)用瞬時(shí)細(xì)胞轉(zhuǎn)染法分別將miR-210 mimic和抗miR-210抑制劑轉(zhuǎn)染至OVCAR3和SKOV3細(xì)胞中,并利用Real-time PCR法進(jìn)行轉(zhuǎn)染結(jié)果鑒定,從而獲得miR-210過表達(dá)和低表達(dá)卵巢癌細(xì)胞模型。2.分別將OVCAR3和SKOV3兩種卵巢癌細(xì)胞設(shè)立為對(duì)照組miR-210過表達(dá)模型組和miR-210低表達(dá)模型組,采用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖活性,采用Transwell法檢測(cè)各組細(xì)胞的遷移和侵襲能力。3.采用Western Blot法檢測(cè)OVCAR3卵巢癌細(xì)胞的對(duì)照組miR-210過表達(dá)模型組和miR-210低表達(dá)模型組細(xì)胞增殖,遷移和侵襲的相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。4.采用不同劑量(3050和100 Gy)電離輻射分別照射OVCAR3和SKOV3兩種卵巢癌細(xì)胞的對(duì)照組和miR-210過表達(dá)模型組細(xì)胞,并采用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖活性。5.采用Western Blot法分別檢測(cè)OVCAR3和SKOV3兩種卵巢癌細(xì)胞對(duì)照組和miR-210過表達(dá)模型組細(xì)胞經(jīng)50Gy射線照射后,凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平。6.采用不同劑量(510和20 Gy)電離輻射分別照射OVCAR3和SKOV3兩種卵巢癌細(xì)胞的對(duì)照組和miR-210過表達(dá)模型組細(xì)胞,并采用Caspase-Glo?檢測(cè)試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞caspase 3/7酶的活性。結(jié)果:1.經(jīng)瞬時(shí)細(xì)胞轉(zhuǎn)染和Real-time PCR鑒定,成功建立OVCAR3和SKOV3兩種卵巢癌細(xì)胞的miR-210過表達(dá)和miR-210低表達(dá)細(xì)胞模型。2.MTT結(jié)果顯示:與對(duì)照組比較,miR-210過表達(dá)卵巢癌細(xì)胞組細(xì)胞增殖活性升高,miR-210低表達(dá)卵巢癌細(xì)胞組細(xì)胞增殖活性降低(P0.05);Transwell腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對(duì)照組比較,miR-210過表達(dá)卵巢癌細(xì)胞組細(xì)胞遷移和侵襲能力增強(qiáng),miR-210低表達(dá)卵巢癌細(xì)胞組細(xì)胞遷移和侵襲能力減弱(P0.05)。說明miR-210可以促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖遷移和侵襲。3.Western Blot結(jié)果顯示:與對(duì)照組比較,miR-210過表達(dá)的OVCAR3卵巢癌細(xì)胞PTENE-cadherin的表達(dá)水平明顯下降,而P-AKTN-cadherinSnail和Vimentin的表達(dá)水平明顯升高。相反,miR-210低表達(dá)的OVCAR3卵巢癌細(xì)胞PTENE-cadherin的表達(dá)水平明顯升高,而P-AKTN-cadherinSnail和Vimentin的表達(dá)水平明顯下降。說明miR-210可以激活卵巢癌細(xì)胞的AKT通路,調(diào)控EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)。4.MTT結(jié)果顯示:在給予電離輻射后,與對(duì)照組比較,過表達(dá)miR-210卵巢癌細(xì)胞組細(xì)胞增殖活性升高(P0.05)。說明miR-210降低了卵巢癌細(xì)胞對(duì)電離輻射的敏感性。5.Western Blot結(jié)果顯示:與對(duì)照組比較,過表達(dá)miR-210的OVCAR3和SKOV3細(xì)胞給予50 Gy放射線照射后,兩株細(xì)胞中BAX表達(dá)水平均明顯下降,而BCL-2表達(dá)水平均明顯升高。說明miR-210可以抑制電離輻射引起的細(xì)胞凋亡過程。6.Caspase-Glo?檢測(cè)結(jié)果顯示:在給予電離輻射后,與對(duì)照組比較,過表達(dá)miR-210卵巢癌細(xì)胞組細(xì)胞caspase 3/7酶的活性明顯降低(P0.05),進(jìn)一步說明了miR-210可以抑制電離輻射引起的細(xì)胞凋亡過程。結(jié)論:1.miR-210可通過激活A(yù)KT信號(hào)通路調(diào)控EMT相關(guān)蛋白表達(dá)促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。2.miR-210可通過抑制凋亡作用,降低卵巢癌細(xì)胞對(duì)放射治療的敏感性,有望成為潛在的治療卵巢腫瘤的新靶點(diǎn)。
【圖文】：

圖 1.1 microRNA的生物合成及功能miRNA 的功能：成熟的 miRNA 被加工合成后，立刻與 RNA 誘導(dǎo)的（RISC）相結(jié)合，，通過以下兩種方式作用于靶基因：（1） 以不完式與靶基因 mRNA 結(jié)合，抑制其翻譯表達(dá)，減少相應(yīng)蛋白質(zhì)合成，

結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，轉(zhuǎn)染 miR-210mimic 后，OVCAR3 和 SKOV miR-210 表達(dá)水平明顯升高，而 anti-miR-210 抑制劑則抑制了 OVCAV3 細(xì)胞中 miR-210 的表達(dá)(P<0.05)（圖 3.1，表 3.1）。說明通過瞬時(shí)成功建立了 miR-210 過表達(dá)和低表達(dá) miR-210 的 OVCAR3 和 SKOV3
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Mei Liu;Xin Zhang;Chen-Fei Hu;Qing Xu;Hong-Xia Zhu;Ning-Zhi Xu;;MicroRNA-mRNA functional pairs for cisplatin resistance in ovarian cancer cells[J];Chinese Journal of Cancer;2014年06期

本文編號(hào)：2672716