【摘要】：第一部分 Apelin 13在PCOS患者血清中的表達(dá)及意義背景與目的多囊卵巢綜合征(PCOS)被認(rèn)為是女性人群中最常見(jiàn)的代謝綜合征之一。肥胖作為IR的重要危險(xiǎn)因素之一,可加重PCOS患者機(jī)體的IR程度。據(jù)報(bào)道,PCOS患者中,約有50%-70%患者伴有肥胖癥。肥胖與IR相關(guān)脂肪因子對(duì)PCOS患者的卵泡發(fā)育具有一定的影響。目前有關(guān)脂肪因子與PCOS間關(guān)系的研究,多集中于脂肪因子蛋白功能缺陷或表達(dá)異常對(duì)患者糖脂代謝的影響,而脂肪因子對(duì)PCOS患者卵泡發(fā)育是否會(huì)有影響,這方面的研究甚少。Apelin是G蛋白耦聯(lián)受體APJ的天然配體,它是一種脂肪因子,在體內(nèi)廣泛存在,并在T2DM、高血壓、PCOS等肥胖相關(guān)性代謝疾病中發(fā)揮作用。Apelin與PCOS關(guān)系的研究尚處于探索階段,其臨床結(jié)論尚存在分歧,但Apelin是否參與PCOS的發(fā)生,尚需進(jìn)一步研究證實(shí),本章主要探討Apelin 13在PCOS患者血清中的表達(dá)及意義。方法收集2014年8月至2015年7月在我院婦科門診就診的PCOS患者98例。并收集同期在我院體檢門診行體格檢查的健康(月經(jīng)規(guī)律)婦女45例作為對(duì)照組。PCOS患者根據(jù)是否肥胖(體質(zhì)量指數(shù)BMI≥25kg/m2)分為肥胖組56例和非肥胖組42例。比較PCOS組和對(duì)照組血清Apelin13的水平及性激素、血糖、血脂差異。同時(shí)比較肥胖PCOS組與非肥胖PCOS組Apelin13的水平及性激素、血糖、血脂差異。分析PCOS患者血清Apelin13水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果PCOS 組的 BMI、LH、T、Ins、HOMA-IR、TG 水平明顯高于對(duì)照組(P0.05);肥胖組的BMI、WHR、Ins、HOMA-IR、TG水平明顯高于非肥胖組,HDL水平明顯低于非肥胖組(P0.05)。PCOS組血清Apelin13濃度明顯高于對(duì)照組(P0.05),PCOS患者肥胖組血清Apelin13濃度明顯高于非肥胖組(P0.05),相關(guān)分析顯示,PCOS患者血清Apelin13濃度與BMI、WHR、Ins、FBG、HOMA-IR呈正相關(guān),與HDL呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論P(yáng)COS患者血清Apelin13顯著高表達(dá),且肥胖PCOS患者表達(dá)更顯著。PCOS患者血清Apelin13濃度與其BMI、WHR、Ins、HOMA-IR、FBG有明顯的正相關(guān)性,與HDL有明顯的負(fù)相關(guān)性,表明Apelin13在PCOS的發(fā)病及其臨床表現(xiàn)中可能發(fā)揮重要作用。第二部分Apelin13/APJ系統(tǒng)在PCOS大鼠卵巢中的表達(dá)背景與目的脂肪組織是重要的內(nèi)分泌及旁分泌器官,Apelin是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的脂肪因子,它參與了整個(gè)生理和代謝循環(huán)控制過(guò)程的調(diào)節(jié),一般情況下它并無(wú)脂肪因子的特征,主要是作用于心血管系統(tǒng)和參與內(nèi)穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)。PCOS以代謝紊亂為主要表現(xiàn),因此Apelin在PCOS發(fā)生、進(jìn)展過(guò)程中起著較重要的作用。目前,PCOS卵泡異常發(fā)育機(jī)制并未得到明確的闡述,已有研究發(fā)現(xiàn)其機(jī)制可能與多種細(xì)胞因子局部?jī)?nèi)分泌調(diào)控相關(guān)。Apelin13是Apelin的重要成員,它作為心血管活性肽,具有促進(jìn)血管平滑肌增殖、內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移等生物學(xué)效應(yīng),它也是一種新的脂肪因子,在IR相關(guān)的肥胖、T2DM、高血壓等代謝綜合征的的發(fā)生起著重要作用。目前,對(duì)PCOS患者卵泡發(fā)育異常的研究結(jié)論不盡相同,其機(jī)制尚屬于探索階段。PCOS患者血清中存在高表達(dá)Apelin13,其對(duì)卵泡發(fā)育的作用機(jī)制如何?Apelin13及其受體APJ在PCOS患者卵巢中的是否也存在高表達(dá)?為此本章通過(guò)建立PCOS大鼠模型,檢測(cè)大鼠卵巢中Apelin13及其受體APJmRNA及蛋白表達(dá)水平,旨在探討Apelin13/APJ在PCOS發(fā)生中的作用。方法21日齡清潔級(jí)SD雌性大鼠40只,根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將其分為觀察組和對(duì)照組,各20只。觀察組采用來(lái)曲唑灌胃法建立PCOS模型,對(duì)照組未進(jìn)行任何處理。比較兩組卵巢形態(tài)及體重、卵巢重、卵巢重/體重比及性激素、糖耐量差異及動(dòng)情周期監(jiān)測(cè),監(jiān)測(cè)大鼠卵巢組織中的Apelin13及其受體APJmRNA及蛋白的表達(dá)。結(jié)果HE染色可見(jiàn),PCOS大鼠卵巢結(jié)構(gòu)紊亂,包膜下有多個(gè)囊性擴(kuò)張卵泡,部分卵泡內(nèi)無(wú)卵母細(xì)胞,黃體少見(jiàn),顆粒細(xì)胞層減少,常為2～3層。正常大鼠卵巢有不同發(fā)育階段的卵泡,有多個(gè)黃體,顆粒細(xì)胞層數(shù)可達(dá)8-9層,排列緊密整齊,形態(tài)完整。觀察組體重、卵巢重、卵巢重/體重比值明顯高于對(duì)照組(P0.05)。陰道涂片及美蘭染色結(jié)果提示,對(duì)照組有規(guī)律的動(dòng)情周期,動(dòng)情周期為4-5天,而PCOS模型組用藥第14天后出現(xiàn)動(dòng)情周期改變,陰道涂片顯示幾乎全是白細(xì)胞,處于動(dòng)情間期,表明無(wú)排卵。觀察組LH、T水平明顯高于對(duì)照組,E2明顯低于對(duì)照組(P0.05),觀察組在灌糖后60min、120min血糖濃度均明顯高于對(duì)照組(P0.001)。觀察組的ISI明顯低于對(duì)照組,HOMA-IR明顯高于對(duì)照組(P0.001)。卵泡內(nèi)膜層、顆粒細(xì)胞、卵巢間質(zhì)均存在Apelin13及其受體APJ的表達(dá)。觀察組大鼠卵巢Apelin13及APJ蛋白表達(dá)的平均灰度顯著高于對(duì)照組(P0.05),PCOS大鼠Apelin13及其受體APJmRNA的表達(dá)均明顯高于對(duì)照組(P0.001)。結(jié)論來(lái)曲唑灌胃法誘導(dǎo)PCOS大鼠模型,具有卵巢形態(tài)改變、生殖內(nèi)分泌紊亂、糖代謝紊亂等特征,與臨床PCOS患者的典型特征相似。無(wú)論是PCOS大鼠,還是正常大鼠,其卵泡內(nèi)膜細(xì)胞、顆粒細(xì)胞中均有Apelin13、APJ表達(dá)。與正常大鼠卵巢組織相比,PCOS大鼠卵巢組織中Apelin13/APJ基因及蛋白表達(dá)均明顯上調(diào),這種異常的上調(diào)表達(dá)可能在PCOS卵泡內(nèi)細(xì)胞異常增殖中發(fā)揮作用。第三部分Apelin13對(duì)大鼠卵巢發(fā)育相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控作用背景與目的PCOS卵巢組織存在胰島素受體磷酸化減弱、顆粒細(xì)胞胰島素信號(hào)通路障礙。磷脂酰肌醇3-激酶(P13K)信號(hào)通路與細(xì)胞內(nèi)糖代謝密切相關(guān),其下游分子主要是絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶(AKT)。P13K/AKT信號(hào)通路磷酸化減少是PCOS患者IR的重要特征,它是細(xì)胞內(nèi)胰島素發(fā)揮作用通路,在細(xì)胞增殖、分化及凋亡中發(fā)揮重要作用。轉(zhuǎn)錄因子FoxO1是Fox家族的一個(gè)重要成員,在細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期及胰島素信號(hào)通路等方面發(fā)揮作用,并受P13K/AKT信號(hào)通路調(diào)節(jié)。FoxO1在PCOS卵巢顆粒細(xì)胞的增殖中發(fā)揮作用,胰島素在促進(jìn)卵巢顆粒細(xì)胞增殖同時(shí)抑制顆粒細(xì)胞FoxO1mRNA表達(dá)。Apelin13作為脂肪因子,其在肥胖及IR相關(guān)的代謝性疾病中發(fā)揮重要作用。Apelin13對(duì)PCOS大鼠模型的作用機(jī)制如何,是否與P13K/AKT信號(hào)通路有關(guān)。為此,本章通過(guò)建立PCOS模型,并分組分別給予Apelin13及APJ拮抗劑干預(yù),觀察PCOS大鼠動(dòng)情周期、卵巢形態(tài)、性激素及糖代謝指標(biāo)的變化,以探討Apelin13對(duì)大鼠卵巢發(fā)育的P13K/AKT信號(hào)通路調(diào)控作用。方法將44只SD雌性大鼠隨機(jī)隨機(jī)分為PCOS組14只,正常組30只。正常組24只隨機(jī)分為Apenlin13組、Apenlin13+F13A組、正常對(duì)照組,每組8只。另取PCOS組8只作為PCOS對(duì)照組。PCOS組、正常組各取剩余6只大鼠稱其體重處死,取大鼠卵巢。觀察各組動(dòng)情周期、體重、卵巢重量、性激素、空腹血糖、胰島素、胰島素敏感性及IR,同時(shí)采用qRT-PCR檢測(cè)卵巢組織PI3K、AKT、FoxO1mRNA表達(dá),WB法檢測(cè)卵巢組織AKT、FoxO1、p-AKT和p-FoxO1蛋白表達(dá)情況。結(jié)果PCOS對(duì)照組大鼠動(dòng)情周期均處于動(dòng)情間期。Apenlin13組大鼠在給予Apenlin13干預(yù)10天左右,動(dòng)情周期開(kāi)始延長(zhǎng),在干預(yù)21天后,動(dòng)情間期不規(guī)律,大多數(shù)處于動(dòng)情間期。Apenlin13+F13A組在給予Apenlin13、F13A干預(yù)21天后,部分出現(xiàn)動(dòng)情周期延長(zhǎng),偶有處于動(dòng)情間期。PCOS對(duì)照組、Apenlin13組、Apenlin13+F13A組大鼠體重及卵巢重、血清LH、FSH、T、空腹血糖、空腹胰島素和HOMA-IR均明顯高于正常對(duì)照組(P0.05),ISI明顯降低(P0.05);PCOS對(duì)照組、Apenlin13組兩組大鼠體重及卵巢重、血清LH、FSH、T、空腹血糖、空腹胰島素和HOMA-IR比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Apenlin13+F13A組大鼠體重及卵巢重、LH、FSH、ISI明顯低于PCOS對(duì)照組、Apenlin13組(P0.05)。正常對(duì)照組、PCOS對(duì)照組、Apenlin13組、Apenlin13+F13A組大鼠卵巢顆粒細(xì)胞均有FoxO1表達(dá)。正常對(duì)照組主要表達(dá)于顆粒細(xì)胞細(xì)胞質(zhì),PCOS對(duì)照組及Apenlin13組主要表達(dá)于顆粒細(xì)胞胞核中,Apenlin13+F13A組在顆粒細(xì)胞胞質(zhì)及胞核內(nèi)均有表達(dá)。4組卵巢組織均存在AKT、FoxO1、p-AKT、p-FoxO1蛋白不同程度的表達(dá)。Apenlin13組及PCOS對(duì)照組AKT、FoxO1蛋白表達(dá)比正常對(duì)照組均升高,Apenlin13+F13A組比Apenlin13組及PCOS對(duì)照組有所降低,但各組間AKT表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。PCOS對(duì)照組、Apenlin13組p-AKT蛋白表達(dá)比正常對(duì)照組均顯著升高(P0.05),而Apenlin1 3+F13A組p-AKT蛋白表達(dá)相比PCOS組、Apenlin13組均明顯降低(P0.05)。PCOS對(duì)照組、Apenlin13組p-FoxO1蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組明顯升高(P0.05),Apenlin13+F13A組則比PCOS對(duì)照組和Apenlin 13組明顯下調(diào)(P0.05)。結(jié)論Apelin13高表達(dá)可能通過(guò)激活P13K/AKT信號(hào)通路,抑制其下游凋亡基因表達(dá),促進(jìn)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖,抗凋亡;P13K/AKT信號(hào)通路的活化可適當(dāng)誘導(dǎo)胰島素水平增加,引起IR;同時(shí)誘導(dǎo)脂肪合成增加體重,這可能是PCOS發(fā)生的一個(gè)機(jī)制之一。
【圖文】：

膜下有多個(gè)呈囊性擴(kuò)張的卵泡，部分卵泡內(nèi)未見(jiàn)卵母細(xì)胞，黃體少見(jiàn)，顆粒細(xì)逡逑胞層減少，常為２？３層。正常大鼠卵巢有不同發(fā)育階段的卵泡，有多個(gè)黃體，逡逑顆粒細(xì)胞排列緊密整齊，形態(tài)完整，層數(shù)可達(dá)８－９層。見(jiàn)圖１。逡逑觀察組體重、卵巢重、卵巢重／體重比值明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意逡逑義（Ｐ＜０．０５），見(jiàn)表邋１。逡逑２４逡逑

．邋？邐』、、＇？．邐＊邋＊ｆ＊邋＇邐：逡逑圖２－２邋ＰＣＯＳ大鼠陰道涂片（ｘｌ00）逡逑３．３觀察組與對(duì)照組大鼠性激素比較情況逡逑觀察與對(duì)照組ＦＳＨ、Ｐ水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５），，觀察組ＬＨ、Ｔ逡逑水平明顯高于對(duì)照組，Ｅ２明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５），見(jiàn)表２。逡逑邐表２觀察組和對(duì)照組大鼠內(nèi)分泌激素比較（ｒ±ｓ）邐逡逑組別邐只邐ＦＳＨ（ＭＩＵ／ｍｌ）邐ＬＨ（ＭｌＵ／ｍｌ）邐Ｐ（ｐｇ／ｍｌ）邐Ｅ２（ｐｇ／ｍｌ）邐Ｔ（ｎｇ／ｍｌ）逡逑觀察組邐２０邐］．３０±0．８２邐２．９２±１．６８邐２．６９±０．８６邐２４．８８±６．７８邐３．２７±２．０３逡逑對(duì)照組邐２０邐１．０２±０．３６邐０．５６±０．２３邐３．１０土０．８９邐３７．３５±１４．１２邐０．３５±０．２２逡逑Ｉ邐１．６４８邐６．０６７邐１．８６８邐３．６９１邐６．５１２逡逑邐Ｐ邐＞０．０５邐＜０．００１邐＞０．０５邐＜０．００１邐＜０．００１逡逑２６逡逑
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R711.75

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2666500