【摘要】：目的:利用天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院子宮內(nèi)膜組織標本庫,采用免疫組化的方法探討子宮內(nèi)膜癌組織中DENND1A的表達及其與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系;采用慢病毒轉(zhuǎn)染試驗在體外探討DENND1A對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖、遷移及侵襲能力的影響,并利用Western blot方法檢測DENND1A對PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白的表達及活化情況,為子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展提供新的思路。方法:1.收集228例子宮內(nèi)膜癌患者及同期匹配的148例正常對照和46例不典型性增生子宮內(nèi)膜患者相關(guān)病例資料;免疫組化方法檢測DENND1A在這三種組織中的表達情況,分析子宮內(nèi)膜癌組織中DENND1A表達與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征的關(guān)系,并探討DENND1A與子宮內(nèi)膜癌患者生存及預(yù)后的關(guān)系。2.Western blot檢測DENND1A在子宮內(nèi)膜癌細胞系A(chǔ)N3CA、ECC-1、Ishikawa、HEC-lA、HEC-lB、KLE中的表達。選擇子宮內(nèi)膜癌HEC-1B及HEC-1A細胞,采用慢病毒轉(zhuǎn)染的方法分別上調(diào)和下調(diào)DENND1A表達,qRT-PCR和Western blot方法檢測上調(diào)和下調(diào)效果。采用克隆形成試驗檢測上調(diào)和下調(diào)DENND1A后子宮內(nèi)膜癌細胞增殖的情況;采用Transwell小室檢測上調(diào)和下調(diào)DENND1A后子宮內(nèi)膜癌細胞遷移、侵襲的情況。采用Western blot方法檢測上調(diào)DENND1A后子宮內(nèi)膜癌細胞信號通路蛋白t-Akt、p-Akt和CyclinD1的表達情況。結(jié)果:1.子宮內(nèi)膜癌組織DENND1A表達水平高于正常對照和不典型性增生子宮內(nèi)膜組織,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。子宮內(nèi)膜癌組織中FIGO I-II期患者DENND1A陽性表達水平明顯高于III-IV期患者,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。在I型子宮內(nèi)膜癌組織中:FIGO I-II期患者DENND1A陽性表達水平明顯高于III-IV期患者,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者DENND1A陽性表達的水平明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);DENND1A陽性表達組預(yù)后明顯高于陰性表達組患者,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.六個子宮內(nèi)膜癌細胞系中HEC-1A細胞DENND1A表達水平最高,HEC-1B細胞DENND1A表達水平最低。慢病毒轉(zhuǎn)染后HEC-1B細胞中DENND1A表達增加,HEC-1A細胞中DENND1A表達下降。上調(diào)DENND1A表達后,與陰性對照組相比,子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細胞克隆形成數(shù)量減少,體積較小,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與陰性對照組相比,Transwell小室試驗顯示,HEC-1B細胞穿膜數(shù)明顯減少(遷移:65.9±3.7162 vs.33.3±5.9080;侵襲:25.3±3.4503 vs.9.0±2.0000),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。下調(diào)DENND1A表達后,與陰性對照組相比,HEC-1A細胞克隆形成數(shù)量增加,體積較大,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與陰性對照組相比,Transwell小室試驗顯示,HEC-1A細胞穿膜數(shù)增加(遷移:13.6±3.2094 vs.32.4±3.9115;侵襲:6.3±1.0328 vs.17.5±5.7183),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。DENND1A上調(diào)后,與陰性對照組相比,DENND1A的表達量增加,同時p-Akt、CyclinD1的表達水平減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),t-Akt表達水平無明顯變化(P0.05)。結(jié)論:1.DENND1A可能與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展相關(guān),DENND1A陽性表達與子宮內(nèi)膜癌患者早期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),且預(yù)后好,在I型子宮內(nèi)膜癌中尤為明顯,提示DENND1A可能為I型子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的早期事件,DENND1A有可能成為I型子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的分子標志物。2.上調(diào)HEC-1B細胞中的DENND1A后,細胞克隆形成能力降低,Transwell小室細胞穿膜數(shù)減少,下調(diào)HEC-1A細胞中的DENND1A后,細胞克隆形成能力增加,Transwell小室細胞穿膜數(shù)增加,表明DENND1A可抑制子宮內(nèi)膜癌細胞增殖、遷移及侵襲。DENND1A上調(diào)抑制子宮內(nèi)膜癌細胞Akt活化,同時抑制CyclinD1表達,表明DENND1A可能是通過PI3K/Akt信號通路抑制子宮內(nèi)膜癌細胞進展。
【圖文】：

.1 正常、不典型增生及子宮內(nèi)膜癌組織中 DENND1A 表達情況（PV 法，×4002 子宮內(nèi)膜癌組織 DENND1A 表達與患者臨床病理特征的關(guān)系為研究子宮內(nèi)膜癌組織中 DENND1A 表達的臨床意義，進一步分析了子宮癌組織中 DENND1A 表達與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征間關(guān)系，研究結(jié)示如下：子宮內(nèi)膜癌組織 DENND1A 陽性表達與臨床分期進展相關(guān)(P<0.05)：臨床病理分期 I-II 期患者 DENND1A 陽性表達的比例明顯高于 III-IV 期患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.939，P=0.003），結(jié)果見表 1.3。子宮內(nèi)膜癌組織 DENND1A 陽性表達與患者發(fā)病年齡、糖尿病、高血壓、PCOS、組織學(xué)分型、肌層浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P＞0.05），結(jié)果見表 1.3子宮內(nèi)膜樣腺癌組織 DENND1A 陽性表達與臨床分期進展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)：臨床病理分期 I-II 期患者 DENND1A 陽性表達的比例明顯高于III-IV 期患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=11.987，P=0.001）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者 DENND1A 陽性表達的比例明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異具

死于其他原因 6 例（5.55%），存活 79 例（73.15%）；90 例 DENND1A 陽性表達組的患者中，死于該疾病 10 例（11.11%），死于其他原因 8 例（8.89%），存活 72 例（80.00%）。在這 198 例隨訪子宮內(nèi)膜癌患者中，有 167 例為子宮內(nèi)膜樣腺癌，其中 37 例死亡（26 例死于該疾病，，11 例死于其他原因）。91例 DENND1A 陰性表達組中，死于該疾病 20 例（21.98%），死于其他原因 5例（5.49%），存活 66 例（72.53%）；76 例 DENND1A 陽性表達組中，死于該疾病 6 例（7.89%），死于其他原因 6 例（7.89%），存活 64 例（84.21%）。2) 應(yīng)用 Kaplan-Meier 法對 DENND1A 陰性表達及陽性表達組的預(yù)后情況進行分析，差異性經(jīng) Log-rank 檢驗，結(jié)果表明：198 例隨訪子宮內(nèi)膜癌患者中，DENND1A 陽性表達組的預(yù)后高于 DENND1A 陰性表達組，但未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=2.520，P=0.112)，詳見圖 1.2A。在 167 例隨訪子宮內(nèi)膜樣腺癌患者中，DENND1A 陽性表達組的預(yù)后明顯高于 DENND1A 陰性表達組，即DENND1A 陽性表達組的預(yù)后明顯好于 DENND1A 陰性表達組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.145，P=0.023)，詳見圖 1.2B。A B
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.33

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1 彭丹紅;羅嘉莉;凌麗;李雪琳;任慕蘭;;DENND1A基因多態(tài)性與多囊卵巢綜合征易感性的Meta分析[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2017年10期

2 黃玉紅;丁劍冰;李霞;艾海權(quán);朱sソ

本文編號：2656285