【摘要】：目的:miRNA與宮頸癌的發(fā)病密切相關(guān),深入了解相關(guān)miRNA的功能,有利于揭示宮頸癌發(fā)病的分子機制,本研究旨在探討miR-99a對宮頸癌HeLa細胞增殖的影響及相關(guān)機制,為深入闡明宮頸癌發(fā)病機制提供實驗依據(jù)。方法:1、將miR-99a mimics瞬時轉(zhuǎn)染宮頸癌HeLa細胞,采用細胞生長曲線和平皿克隆形成實驗,觀察miR-99a對HeLa細胞增殖的影響。2、應(yīng)用Targetscan 6.2軟件預(yù)測miR-99a與HOXA1基因3’UTR的靶向性作用,通過熒光素酶報告基因檢測,分析miR-99a對HOXA1基因表達的影響。3、利用q RT-PCR和Western-blot檢測miR-99a對HOXA1表達的影響。4、構(gòu)建HOXA1干擾載體,轉(zhuǎn)染HeLa細胞,篩選后利用細胞生長曲線和平皿克隆實驗觀察HOXA1表達降低后對HeLa細胞增殖的影響。結(jié)果:1、miR-99a被導(dǎo)入宮頸癌Hela細胞后,細胞的生長速度減慢,miR-99a mimics組Hela細胞克隆數(shù)為156±30,與miR-ctr組(386±49)比較,克隆數(shù)減少(F=26.093,P=0.001)。2、采用Targe tscan6.2(http://www.targetscan.org/)軟件分析miR-99a與HOXA1基因的作用位點發(fā)現(xiàn),miR-99a與HOXA1基因3’UTR的1485-1497位核苷酸位點存在結(jié)合,miR-99a表達后,抑制Hela細胞中HOXA1的表達。3、干擾HOXA1表達后,Hela細胞生長速度減慢,平皿克隆形成能力降低,si-HOXA1克隆數(shù)為165±35,si-control克隆數(shù)為390±46,P0.05。結(jié)論miR-99a與HOXA1基因3’UTR 1485-1497位核苷酸位點結(jié)合沉默其表達,抑制宮頸癌HeLa細胞的增殖。
【圖文】：

第4章 結(jié) 果 檢測 miR-99a 在 HeLa 細胞中的表達R-99a 對宮頸癌細胞增殖的影響，采用脂質(zhì)體瞬時s 和對照序列導(dǎo)入 Hela 細胞，，通過 qRT-PCR 檢測情況。結(jié)果顯示：miR-99a mimics 導(dǎo)入 Hela 細光表達量明顯高于對照組（圖 4-1，t=64.5，P=0.002胞中呈現(xiàn)高表達，可用于后續(xù)實驗。

圖 4.2 miR-99a 高表達對 HeLa 細胞增殖的影響生長曲線觀察 miR-99a 高表達對 HeLa 細胞生長的影響miR-ctr 組及未轉(zhuǎn)染組比較，P<0.05。克隆形成實驗觀察 miR-99a 高表達對 HeLa 細胞增殖的-99a 影響 Hela 細胞克隆形成的統(tǒng)計分析。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.33

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本文編號：2652797