【摘要】：目的應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)分析低形態(tài)學(xué)評分胚胎的染色體非整倍體情況并探討低評分胚胎作為移植選擇的安全性。方法收集IVF/ICSI周期中的D3低評分胚胎,卵裂球固定后,應(yīng)用8種不同的染色體探針進(jìn)行二輪FISH雜交檢測細(xì)胞核。結(jié)果收集D3低評分胚胎40枚,獲得178個(gè)卵裂球,成功固定核170個(gè),固定成功率為95.5%(170/178);FISH雜交后163個(gè)核信號完整,雜交成功率為95.9%(163/170);40枚2PN胚胎中,未發(fā)現(xiàn)異常胚胎12枚,占30%,異常胚胎28枚,占70%。結(jié)論低評分胚胎染色體異常率高,臨床應(yīng)用于移植或冷凍時(shí)建議結(jié)合PGS。
【圖文】：

巧細(xì)遣Ｆ嗑?5min后在熒光顯微鏡下觀察并記錄結(jié)果。分析結(jié)束后，將玻片至于75%酒精中，脫去蓋玻片，再依次放入70%、90%和100%的酒精中脫水各2min，室溫晾干玻片。加入第二輪雜交探針混合液，重復(fù)上述雜交過程，加3μlDAPI負(fù)染，蓋上蓋玻片，15min后分析觀察結(jié)果。1.6結(jié)果判定以染色體核型正常男性為對照，計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞間期核以判斷FISH雜交效率。信號判讀標(biāo)準(zhǔn)[3]：兩個(gè)同色信號間距小于信號大小的一半時(shí)，判斷為一個(gè)信號。2結(jié)果2.1單卵裂球固定效率共收集40枚胚胎，共獲得178個(gè)卵裂球。成功固定核170個(gè)（圖1、2），固定成功率為95.5%（170/178）。2.2FISH雜交率以正常男性淋巴細(xì)胞FISH雜交結(jié)果為對照，計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。196個(gè)細(xì)胞信號完整，雜交成功率為98.0%（196/200）（圖3、4）。對170個(gè)成功固定的核進(jìn)行兩輪FISH雜交檢測8種染色體（圖5、6），163個(gè)核信號完整，雜交成功率為95.9%（163/170）。2.3FISH結(jié)果40個(gè)2PN胚胎中，正常胚胎12個(gè)，占30%。異常胚胎28個(gè)，占70%；其中非嵌合型異常10個(gè)，占25%；嵌合型異常14個(gè)，，占35%；無規(guī)律分離型4個(gè)，占10%。結(jié)果見附表。附表40枚低評分胚胎的FISH結(jié)果圖1固定過程中胞膜破裂圖片（×200）第12期史秋雯，等：低評分胚胎的非整倍體分析·17·

芯?中，應(yīng)用8條染色體探針對40枚D3低評分胚胎進(jìn)行分析，12枚為染色體正常胚胎，正常率為30%；28枚為染色體異常胚胎，異常率為70%。許多研究表明，嵌合體現(xiàn)象在人類早期胚胎中普遍存在，但各文獻(xiàn)中報(bào)道的嵌合體率差異較大，因此，嵌合體的影響尚有爭議。HARPER等[7]對多中心的結(jié)果分析后報(bào)道嵌合體的發(fā)生率在11%~52%。這種差異的形成受多種因素的影響：①胚胎操作及培養(yǎng)時(shí)的溫度改變、氧濃度；②超排卵方案；③女方年齡；④胚胎的發(fā)育速度及形態(tài)；⑤選用的FISH檢測探針數(shù)。其中超排卵方案和胚胎培養(yǎng)體系的影響圖2固定后細(xì)胞核（×200）紅色為13號染色體探針信號；天藍(lán)色為16號染色體探針信號；藍(lán)色為18號染色體探針信號；綠色為21號染色體探針信號；黃色為22號染色體探針信號圖3淋巴細(xì)胞中期核PB探針雜交后信號（×2000）紅色為X染色體探針信號，天藍(lán)色為17號染色體探針信號,綠色為Y染色體探針信號，藍(lán)色為DAPI染色圖4淋巴細(xì)胞中期核混合探針2雜交信號（×2000）紅色為13號染色體探針信號；天藍(lán)色為16號染色體探針信號；藍(lán)色為18號染色體探針信號；綠色為21號染色體探針信號；黃色為22號染色體探針信號圖5卵裂球PB探針雜交后二倍體信號（×2000）紅色為X染色體探針信號；天藍(lán)色為17號染色體探針信號；綠色為Y染色體探針信號；藍(lán)色為DAPI染色圖6卵裂球17，X，Y染色體探針雜交后，XXY（×2000）中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志第25卷·18·

【共引文獻(xiàn)】

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2 陸小n

本文編號：2647977