【摘要】：目的:在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中,微小RNA(micro RNA,mi RNA)的異常表達(dá)起著重要作用。課題組前期使用Affymetrix Gene Chip mi RNA 4.0 Array芯片技術(shù)檢測(cè)了僅感染了HPV16的不同階段的宮頸組織中mi RNA的表達(dá)譜,結(jié)果顯示mi R-27a的表達(dá)隨著宮頸病變程度的進(jìn)展而呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。為驗(yàn)證前期課題組芯片檢測(cè)結(jié)果,本研究對(duì)不同病變程度的宮頸組織中mi R-27a的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)驗(yàn)證,并通過(guò)過(guò)表達(dá)及低表達(dá)mi R-27a,研究mi R-27a對(duì)宮頸癌Siha細(xì)胞的增殖及凋亡等生物學(xué)功能的影響,同時(shí)探討mi R-27a對(duì)下游靶基因的調(diào)控作用,進(jìn)而闡明mi R-27a在宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程中的可能分子機(jī)制。方法:(1)對(duì)僅HPV16陽(yáng)性的正常宮頸組織、僅HPV16陽(yáng)性的HSIL組織以及僅HPV16陽(yáng)性的早期宮頸鱗癌組織中的mi R-27a的表達(dá)量使用RT-PCR方法分別進(jìn)行檢測(cè)驗(yàn)證;(2)使用Lipofectamine?3000轉(zhuǎn)染試劑將mi R-27a mimic、mi R-27a mimic NC、mi R-27ainhibitor、mi R-27a inhibitor NC以及NC片段轉(zhuǎn)染入宮頸癌細(xì)胞Siha中,使用RT-PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)驗(yàn)證mi R-27a過(guò)表達(dá)及低表達(dá)轉(zhuǎn)染后的mi R-27a的表達(dá)水平;(3)增殖及凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)mi R-27a過(guò)表達(dá)及低表達(dá)對(duì)Siha宮頸癌細(xì)胞的增殖、凋亡等生物學(xué)功能的影響;(4)使用Western-blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)Siha細(xì)胞轉(zhuǎn)染之后下游靶基因SIPA1L3的表達(dá)水平。結(jié)果:(1)在HPV16陽(yáng)性的正常宮頸組織、HSIL組織以及早期宮頸鱗癌組織中,mi R-27a的相對(duì)表達(dá)量分別為:1.10±0.06、1.58±0.07、1.94±0.08,任意兩組之間相比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(2)Siha細(xì)胞轉(zhuǎn)染完成之后,mi R-27a mimic組中mi R-27a的表達(dá)水平增加至其NC對(duì)照組的7.42倍,細(xì)胞增殖能力較前明顯增強(qiáng),而細(xì)胞凋亡則明顯下降,SIPA1L3蛋白的相對(duì)表達(dá)量降為其NC對(duì)照組的18.13%,與其NC對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);相反,轉(zhuǎn)染mi R-27a inhibitor使mi R-27a的表達(dá)水平降低至其NC對(duì)照組的20.59%,細(xì)胞增殖能力較前明顯下降,而細(xì)胞凋亡則明顯上升,SIPA1L3蛋白的相對(duì)表達(dá)量增加為其NC對(duì)照組的2.43倍,與其NC對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。本研究的空白對(duì)照組與mi R-27a mimic NC組與mi R-27ainhibitor NC組之間相比,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:mi R-27a通過(guò)下調(diào)SIPA1L3基因進(jìn)而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖、抑制其凋亡,從而起到了一定程度的促癌作用,為阻斷宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)進(jìn)展為宮頸癌提供了新的思路。
【圖文】：

圖 2-2Siha 細(xì)胞轉(zhuǎn)染后 24h（200×）光鏡(A)及熒光顯微鏡(B)下所見(jiàn).3 miR-27a 的表達(dá)量測(cè)定轉(zhuǎn)染了 miR-27a mimic 組中 miR-27a 的表達(dá)量相比其 NC 對(duì)照組明顯增高(P<0.05)，為其C 對(duì)照組的 7.42 倍。轉(zhuǎn)染了 miR-27a inhibitor 組中 miR-27a 的表達(dá)量相比其 NC 對(duì)照組明顯降(P<0.05)，表達(dá)水平為其 NC 對(duì)照組的 20.59%。但 miR-27a 的表達(dá)量在 miR-27a mimic NC、iR-27a inhibitor NC 及空白對(duì)照組三組之間的差異，，相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示：染 miR-27a mimic 可促進(jìn) miR-27a 在 Siha 細(xì)胞中的表達(dá)，相反，轉(zhuǎn)染 miR-27a inhibitor 可制 miR-27a 在 Siha 細(xì)胞中的表達(dá)（表 2-1）。表 2-1 轉(zhuǎn)染后 Siha 細(xì)胞中 miR-27a 的相對(duì)表達(dá)量(xs )組別 miR-27a 的相對(duì)表達(dá)量miR-27a mimic 組 9.35±0.30
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 孔靈玲;滿冬梅;;卵巢腫瘤組織LSD1過(guò)表達(dá)臨床意義分析[J];中華腫瘤防治雜志;2014年21期

本文編號(hào)：2642048