【摘要】：目的:在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中,微小RNA(micro RNA,mi RNA)的異常表達起著重要作用。課題組前期使用Affymetrix Gene Chip mi RNA 4.0 Array芯片技術檢測了僅感染了HPV16的不同階段的宮頸組織中mi RNA的表達譜,結果顯示mi R-27a的表達隨著宮頸病變程度的進展而呈現上升的趨勢。為驗證前期課題組芯片檢測結果,本研究對不同病變程度的宮頸組織中mi R-27a的表達水平進行檢測驗證,并通過過表達及低表達mi R-27a,研究mi R-27a對宮頸癌Siha細胞的增殖及凋亡等生物學功能的影響,同時探討mi R-27a對下游靶基因的調控作用,進而闡明mi R-27a在宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展過程中的可能分子機制。方法:(1)對僅HPV16陽性的正常宮頸組織、僅HPV16陽性的HSIL組織以及僅HPV16陽性的早期宮頸鱗癌組織中的mi R-27a的表達量使用RT-PCR方法分別進行檢測驗證;(2)使用Lipofectamine?3000轉染試劑將mi R-27a mimic、mi R-27a mimic NC、mi R-27ainhibitor、mi R-27a inhibitor NC以及NC片段轉染入宮頸癌細胞Siha中,使用RT-PCR實驗技術驗證mi R-27a過表達及低表達轉染后的mi R-27a的表達水平;(3)增殖及凋亡實驗檢測mi R-27a過表達及低表達對Siha宮頸癌細胞的增殖、凋亡等生物學功能的影響;(4)使用Western-blot實驗技術檢測Siha細胞轉染之后下游靶基因SIPA1L3的表達水平。結果:(1)在HPV16陽性的正常宮頸組織、HSIL組織以及早期宮頸鱗癌組織中,mi R-27a的相對表達量分別為:1.10±0.06、1.58±0.07、1.94±0.08,任意兩組之間相比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);(2)Siha細胞轉染完成之后,mi R-27a mimic組中mi R-27a的表達水平增加至其NC對照組的7.42倍,細胞增殖能力較前明顯增強,而細胞凋亡則明顯下降,SIPA1L3蛋白的相對表達量降為其NC對照組的18.13%,與其NC對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);相反,轉染mi R-27a inhibitor使mi R-27a的表達水平降低至其NC對照組的20.59%,細胞增殖能力較前明顯下降,而細胞凋亡則明顯上升,SIPA1L3蛋白的相對表達量增加為其NC對照組的2.43倍,與其NC對照組相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。本研究的空白對照組與mi R-27a mimic NC組與mi R-27ainhibitor NC組之間相比,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:mi R-27a通過下調SIPA1L3基因進而促進宮頸癌細胞增殖、抑制其凋亡,從而起到了一定程度的促癌作用,為阻斷宮頸上皮內瘤變(CIN)進展為宮頸癌提供了新的思路。
【圖文】：

圖 2-2Siha 細胞轉染后 24h（200×）光鏡(A)及熒光顯微鏡(B)下所見.3 miR-27a 的表達量測定轉染了 miR-27a mimic 組中 miR-27a 的表達量相比其 NC 對照組明顯增高(P<0.05)，為其C 對照組的 7.42 倍。轉染了 miR-27a inhibitor 組中 miR-27a 的表達量相比其 NC 對照組明顯降(P<0.05)，表達水平為其 NC 對照組的 20.59%。但 miR-27a 的表達量在 miR-27a mimic NC、iR-27a inhibitor NC 及空白對照組三組之間的差異，，相比無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。提示：染 miR-27a mimic 可促進 miR-27a 在 Siha 細胞中的表達，相反，轉染 miR-27a inhibitor 可制 miR-27a 在 Siha 細胞中的表達（表 2-1）。表 2-1 轉染后 Siha 細胞中 miR-27a 的相對表達量(xs )組別 miR-27a 的相對表達量miR-27a mimic 組 9.35±0.30
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.33

【參考文獻】

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1 孔靈玲;滿冬梅;;卵巢腫瘤組織LSD1過表達臨床意義分析[J];中華腫瘤防治雜志;2014年21期

本文編號：2642048