發(fā)布時間：2020-04-22 12:36

【摘要】：目的:(1)探究nsPEFs對不同種源宮頸癌細(xì)胞的殺傷作用及是否能誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞免疫原性死亡。(2)觀察nsPEFs對小鼠皮下宮頸癌移植瘤的消融作用及其激發(fā)的特異性免疫應(yīng)答作用。方法:(1)采用不同場強(qiáng)的nsPEFs刺激人宮頸癌HeLa細(xì)胞和小鼠宮頸癌U14細(xì)胞懸液。通過CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)和ELISA法分別檢測電刺激后腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞活性、凋亡率和損傷相關(guān)分子模式(DAMPs)的表達(dá)情況。(2)構(gòu)建小鼠宮頸癌皮下移植瘤動物模型,分別觀察nsPEFs消融實(shí)體瘤效應(yīng)及檢測激發(fā)小鼠機(jī)體的免疫應(yīng)答。實(shí)驗(yàn)分為空白對照組、腫瘤組及刺激組三組。觀察nsPEFs消融實(shí)體腫瘤后小鼠的體重及腫瘤生長變化等情況。流式細(xì)胞術(shù)檢測nsPEFs對皮下移植瘤消融后小鼠淋巴結(jié)、脾臟和實(shí)體腫瘤組織中DCs的分化成熟、T細(xì)胞的分化活化以及T細(xì)胞釋放細(xì)胞因子的情況。結(jié)果:(1)隨著場強(qiáng)的提高和時間的增加,nsPEFs刺激后細(xì)胞的活力逐漸降低,凋亡率明顯升高;在場強(qiáng)10 kV/cm以上的nsPEFs刺激后分別在24 h和3h檢測到HeLa和U14細(xì)胞的鈣網(wǎng)蛋白(CRT)、熱休克蛋白70(HSP70)以及高遷移族蛋白-1(HMGB1)的表達(dá)上調(diào)。(2)小鼠皮下宮頸癌實(shí)體瘤建模后,小鼠體重速度增長減緩;腫瘤體積逐漸增大,在nsPEFs消融后迅速增大至高峰,同時脾臟指數(shù)顯著性升高。nsPEFs消融皮下移植瘤后,實(shí)體瘤組織中DCs的分化成熟、CD8~+分化活化以及CD4~+和CD8~+細(xì)胞中釋放的IFN-γ、TNF-β和GzB等細(xì)胞因子在刺激組比腫瘤組中均有顯著性上升;淋巴結(jié)和脾臟組織中DCs的頻率和細(xì)胞因子TNF-β的表達(dá)在刺激組比腫瘤組中均有顯著性上升,而CD4~+細(xì)胞的活化明顯下降。結(jié)論:(1)nsPEFs對不同來源宮頸癌細(xì)胞的殺傷效果具有差異性;nsPEFs刺激后能誘導(dǎo)凋亡的宮頸癌細(xì)胞釋放DAMPs信號從而激活細(xì)胞發(fā)生免疫原性死亡。(2)nsPEFs能夠有效消融小鼠移植實(shí)體瘤,抑制腫瘤的生長。(3)nsPEFs消融小鼠移植實(shí)體瘤后,通過促進(jìn)DCs的分化成熟、T細(xì)胞的分化活化以及IFN-γ、TNF-β和GzB等多種免疫細(xì)胞因子的釋放等進(jìn)而激活機(jī)體局部和全身性免疫系統(tǒng)的應(yīng)答。
【圖文】：

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 劉劍英況下，機(jī)體各臟器的重量和體重的比值是相對恒定的。當(dāng)動物受到腫瘤侵襲后，局部或者全身免疫系統(tǒng)被激活，而脾臟作為全身免疫系統(tǒng)的主要器官之一可能發(fā)生臟器充血、水腫或增生肥大等，，因而脾臟指數(shù)也會發(fā)生相應(yīng)的變化。如圖 7B所示，小鼠建模后腫瘤組和刺激的脾臟指數(shù)與空白對照組相比都增大，說明脾臟對腫瘤的存在產(chǎn)生了應(yīng)激或免疫反應(yīng)。同時刺激組和腫瘤組相比無顯著性差異，說明 nsPEFs 對腫瘤消融電刺激后激發(fā)機(jī)體以脾臟為代表的全身免疫系統(tǒng)反應(yīng)在宏觀上表現(xiàn)不明顯。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.33

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本文編號：2636522